ਡੀਨੇਸ ਆਈ
DNase I (Deoxyribonuclease I) ਇੱਕ ਐਂਡੋਡੀਓਕਸੀਰੀਬੋਨਿਊਕਲੀਜ਼ ਹੈ ਜੋ ਸਿੰਗਲ- ਜਾਂ ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਹਜ਼ਮ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਇਹ 5′-ਟਰਮੀਨਲ 'ਤੇ ਫਾਸਫੇਟ ਸਮੂਹਾਂ ਅਤੇ 3′-ਟਰਮੀਨਲ 'ਤੇ ਹਾਈਡ੍ਰੋਕਸਿਲ ਦੇ ਨਾਲ ਮੋਨੋਡੌਕਸੀਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡਸ ਜਾਂ ਸਿੰਗਲ- ਜਾਂ ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਓਲੀਗੋਡਿਓਕਸੀਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡਸ ਪੈਦਾ ਕਰਨ ਲਈ ਫਾਸਫੋਡੀਏਸਟਰ ਬਾਂਡਾਂ ਨੂੰ ਪਛਾਣਦਾ ਅਤੇ ਤੋੜਦਾ ਹੈ।DNase I ਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀ Ca2+ 'ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਇਸ ਨੂੰ Mn2+ ਅਤੇ Zn2+ ਵਰਗੇ ਡਿਵੈਲੈਂਟ ਮੈਟਲ ਆਇਨਾਂ ਦੁਆਰਾ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।5mM Ca2+ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਨੂੰ ਹਾਈਡੋਲਿਸਿਸ ਤੋਂ ਬਚਾਉਂਦਾ ਹੈ।Mg2+ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਵਿੱਚ, ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਬੇਤਰਤੀਬੇ DNA ਦੇ ਕਿਸੇ ਵੀ ਸਟ੍ਰੈਂਡ 'ਤੇ ਕਿਸੇ ਵੀ ਸਾਈਟ ਨੂੰ ਪਛਾਣ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਉਸ ਨੂੰ ਕੱਟ ਸਕਦਾ ਹੈ।Mn2+ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਵਿੱਚ, DNA ਦੇ ਦੋਹਰੇ ਤਾਰਾਂ ਨੂੰ ਇੱਕੋ ਸਮੇਂ ਪਛਾਣਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ 1-2 ਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡ ਫੈਲਣ ਵਾਲੇ ਫਲੈਟ ਸਿਰੇ ਵਾਲੇ DNA ਟੁਕੜੇ ਜਾਂ ਸਟਿੱਕੀ ਸਿਰੇ ਵਾਲੇ DNA ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਲਗਭਗ ਇੱਕੋ ਥਾਂ 'ਤੇ ਕਲੀਵ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਉਤਪਾਦ ਦੀ ਜਾਇਦਾਦ
ਬੋਵਾਈਨ ਪੈਨਕ੍ਰੀਅਸ DNase I ਨੂੰ ਖਮੀਰ ਸਮੀਕਰਨ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਗਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਸ਼ੁੱਧ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
Cਓਪੋਨੈਂਟਸ
| ਕੰਪੋਨੈਂਟ | ਵਾਲੀਅਮ | |||
| 0.1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNase I, RNase-ਮੁਕਤ | 20μL | 200μL | 1 ਮਿ.ਲੀ | 10 ਮਿ.ਲੀ |
| 10×DNase I ਬਫਰ | 1 ਮਿ.ਲੀ | 1 ਮਿ.ਲੀ | 5 × 1 ਮਿ.ਲੀ | 5 × 10 ਮਿ.ਲੀ |
ਆਵਾਜਾਈ ਅਤੇ ਸਟੋਰੇਜ
1. ਸਟੋਰੇਜ ਸਥਿਰਤਾ: – ਸਟੋਰੇਜ ਲਈ 15℃~-25℃;
2. ਆਵਾਜਾਈ ਸਥਿਰਤਾ: ਆਈਸ ਪੈਕ ਦੇ ਅਧੀਨ ਆਵਾਜਾਈ;
3. ਇਸ ਵਿੱਚ ਸਪਲਾਈ ਕੀਤਾ ਗਿਆ: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50% ਗਲਾਈਸਰੋਲ, 25℃ 'ਤੇ pH 7.6।
ਯੂਨਿਟ ਪਰਿਭਾਸ਼ਾ
ਇੱਕ ਯੂਨਿਟ ਨੂੰ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਵਜੋਂ ਪਰਿਭਾਸ਼ਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ ਜੋ 37°C 'ਤੇ 10 ਮਿੰਟਾਂ ਵਿੱਚ 1 µg pBR322 DNA ਨੂੰ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਘਟਾ ਦੇਵੇਗਾ।
ਗੁਣਵੱਤਾ ਕੰਟਰੋਲ
RNase:37 ℃ 'ਤੇ 4 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ 1.6 μg MS2 RNA ਦੇ ਨਾਲ DNase I ਦਾ 5U ਐਗਰੋਸ ਜੈੱਲ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਦੁਆਰਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੇ ਅਨੁਸਾਰ ਕੋਈ ਵੀ ਗਿਰਾਵਟ ਨਹੀਂ ਦਿੰਦਾ।
ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਐਂਡੋਟੌਕਸਿਨ:LAL-ਟੈਸਟ, ਚੀਨੀ ਫਾਰਮਾਕੋਪੀਆ IV 2020 ਐਡੀਸ਼ਨ, ਜੈੱਲ ਸੀਮਾ ਟੈਸਟ ਵਿਧੀ, ਆਮ ਨਿਯਮ (1143) ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ।ਬੈਕਟੀਰੀਅਲ ਐਂਡੋਟੌਕਸਿਨ ਸਮੱਗਰੀ ≤10 EU/mg ਹੋਣੀ ਚਾਹੀਦੀ ਹੈ।
ਵਰਤਣ ਲਈ ਨਿਰਦੇਸ਼
1. ਹੇਠਾਂ ਦਿੱਤੇ ਅਨੁਪਾਤ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ RNase-ਮੁਕਤ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਹੱਲ ਤਿਆਰ ਕਰੋ:
| ਕੰਪੋਨੈਂਟ | ਵਾਲੀਅਮ |
| ਆਰ.ਐਨ.ਏ | X μg |
| 10 × DNase I ਬਫਰ | 1 μL |
| DNase I, RNase-ਮੁਕਤ (5U/μL) | 1 U ਪ੍ਰਤੀ μg RNA |
| ddH2O | 10 μL ਤੱਕ |
15 ਮਿੰਟ ਲਈ 2.37 ℃;
3. ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ ਸਮਾਪਤੀ ਬਫਰ ਨੂੰ ਜੋੜੋ, ਅਤੇ DNase I ਨੂੰ ਅਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਕਰਨ ਲਈ 10 ਮਿੰਟ ਲਈ 65℃ 'ਤੇ ਗਰਮ ਕਰੋ। ਨਮੂਨੇ ਨੂੰ ਅਗਲੇ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਪ੍ਰਯੋਗ ਲਈ ਸਿੱਧਾ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਨੋਟਸ
1. RNA ਦੇ ਪ੍ਰਤੀ μg 1U DNase I, ਜਾਂ 1μg RNA ਤੋਂ ਘੱਟ ਲਈ 1U DNase I ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ।
2. EDTA ਨੂੰ 5 mM ਦੀ ਅੰਤਮ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਵਿੱਚ ਜੋੜਿਆ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ ਤਾਂ ਜੋ RNA ਨੂੰ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਇਨਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਦੌਰਾਨ ਡੀਗਰੇਡ ਹੋਣ ਤੋਂ ਬਚਾਇਆ ਜਾ ਸਕੇ।
