ਪ੍ਰੋਟੀਨੇਜ਼ ਕੇ (ਲਾਇਓਫਿਲਾਈਜ਼ਡ ਪਾਊਡਰ)
ਬਿੱਲੀ ਨੰ: HC4500A
ਪ੍ਰੋਟੀਨੇਜ਼ ਕੇ ਵਿਆਪਕ ਸਬਸਟਰੇਟ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਦੇ ਨਾਲ ਇੱਕ ਸਥਿਰ ਸੀਰੀਨ ਪ੍ਰੋਟੀਜ਼ ਹੈ।ਇਹ ਡਿਟਰਜੈਂਟ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਵਿੱਚ ਵੀ ਦੇਸੀ ਰਾਜ ਵਿੱਚ ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਨੂੰ ਘਟਾਉਂਦਾ ਹੈ।ਕ੍ਰਿਸਟਲ ਅਤੇ ਅਣੂ ਬਣਤਰ ਦੇ ਅਧਿਐਨਾਂ ਤੋਂ ਸਬੂਤ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਇੱਕ ਸਰਗਰਮ ਸਾਈਟ ਕੈਟੇਲੀਟਿਕ ਟ੍ਰਾਈਡ (ਏਐਸਪੀ) ਵਾਲੇ ਸਬਟਿਲਿਸਿਨ ਪਰਿਵਾਰ ਨਾਲ ਸਬੰਧਤ ਹੈ39-ਉਸ ਦਾ69- ਸੇਰ224).ਕਲੀਵੇਜ ਦੀ ਪ੍ਰਮੁੱਖ ਸਾਈਟ ਬਲੌਕ ਕੀਤੇ ਅਲਫ਼ਾ ਅਮੀਨੋ ਸਮੂਹਾਂ ਦੇ ਨਾਲ ਅਲੀਫੈਟਿਕ ਅਤੇ ਐਰੋਮੈਟਿਕ ਅਮੀਨੋ ਐਸਿਡ ਦੇ ਕਾਰਬੋਕਸਾਈਲ ਸਮੂਹ ਦੇ ਨਾਲ ਲੱਗਦੇ ਪੇਪਟਾਇਡ ਬਾਂਡ ਹੈ।ਇਹ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਇਸਦੇ ਵਿਆਪਕ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ
ਸਟੋਰੇਜ ਦੀਆਂ ਸ਼ਰਤਾਂ
2-8 ℃ ਛੋਟੀ ਮਿਆਦ ਦੀ ਸਟੋਰੇਜ, -25 ~ -15 ℃ ਲੰਬੀ ਮਿਆਦ ਦੀ ਸਟੋਰੇਜ।ਡਰਾਈ ਪਾਊਡਰ ਸਥਿਤੀ -25~-15℃ 3 ਸਾਲਾਂ ਲਈ ਵੈਧ;ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਪਾਊਡਰ ਨੂੰ ਉਚਿਤ ਮਾਤਰਾ ਵਿੱਚ ਭੰਗ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।
ਨਿਰਧਾਰਨ
| ਦਿੱਖ | ਚਿੱਟੇ ਤੋਂ ਆਫ-ਵਾਈਟ ਅਮੋਰਫਸ ਲਾਇਓਫਿਲਾਈਜ਼ਡ ਪਾਊਡਰ |
| ਸਰਗਰਮੀ | ≥30 U/mg |
| DNase | ਕੋਈ ਪਤਾ ਨਹੀਂ ਲੱਗਾ |
| RNase | ਕੋਈ ਪਤਾ ਨਹੀਂ ਲੱਗਾ |
ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ
| EC ਨੰਬਰ | 3.4.21.64 (Tritirachium ਐਲਬਮ ਤੋਂ ਰੀਕੌਂਬੀਨੈਂਟ) |
| ਅਣੂ ਭਾਰ | 29 kDa (SDS-PAGE) |
| ਆਈਸੋਇਲੈਕਟ੍ਰਿਕ ਪੁਆਇੰਟ | 7.81 |
| ਸਰਵੋਤਮ pH | 7.0-12.0 ਚਿੱਤਰ.1 |
| ਸਰਵੋਤਮ ਤਾਪਮਾਨ | 65 ℃ Fig.2 |
| pH ਸਥਿਰਤਾ | pH 4.5-12.5 (25℃, 16h) ਚਿੱਤਰ 3 |
| ਥਰਮਲ ਸਥਿਰਤਾ | ਹੇਠਾਂ 50℃(pH 8.0, 30min) ਚਿੱਤਰ 4 |
| ਐਕਟੀਵੇਟਰ | SDS, ਯੂਰੀਆ |
| ਇਨਿਹਿਬਟਰਸ | ਡਾਇਸੋਪ੍ਰੋਪਾਈਲ ਫਲੋਰੋਫੋਸਫੇਟ;phenylmethylsulfonyl ਫਲੋਰਾਈਡ |
ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨਾਂ
1. ਜੈਨੇਟਿਕ ਡਾਇਗਨੌਸਟਿਕ ਕਿੱਟ
2. RNA ਅਤੇ DNA ਕੱਢਣ ਵਾਲੀਆਂ ਕਿੱਟਾਂ
3. ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਤੋਂ ਗੈਰ-ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਭਾਗਾਂ ਨੂੰ ਕੱਢਣਾ, ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੀਆਂ ਅਸ਼ੁੱਧੀਆਂ ਦਾ ਵਿਗਾੜ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਡੀਐਨਏ ਟੀਕੇ ਅਤੇ ਹੈਪਰੀਨ ਦੀ ਤਿਆਰੀ
4. ਪਲਸਡ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰਸਿਸ ਦੁਆਰਾ ਕ੍ਰੋਮੋਸੋਮ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਤਿਆਰੀ
5. ਪੱਛਮੀ ਧੱਬਾ
6. ਵਿਟਰੋ ਨਿਦਾਨ ਵਿੱਚ ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਗਲਾਈਕੋਸਾਈਲੇਟਿਡ ਐਲਬਿਊਮਿਨ ਰੀਐਜੈਂਟਸ
ਸਾਵਧਾਨੀਆਂ
ਵਰਤੋਂ ਜਾਂ ਤੋਲਣ ਵੇਲੇ ਸੁਰੱਖਿਆ ਵਾਲੇ ਦਸਤਾਨੇ ਅਤੇ ਚਸ਼ਮੇ ਪਾਓ, ਅਤੇ ਵਰਤੋਂ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਹਵਾਦਾਰ ਰੱਖੋ।ਇਹ ਉਤਪਾਦ ਚਮੜੀ ਦੀ ਐਲਰਜੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਅਤੇ ਗੰਭੀਰ ਅੱਖਾਂ ਦੀ ਜਲਣ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਜੇਕਰ ਸਾਹ ਲਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਇਹ ਐਲਰਜੀ ਜਾਂ ਦਮੇ ਦੇ ਲੱਛਣਾਂ ਜਾਂ ਡਿਸਪਨੀਆ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਸਾਹ ਦੀ ਜਲਣ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣ ਸਕਦਾ ਹੈ.
ਪਰਖ
ਯੂਨਿਟ ਦੀ ਪਰਿਭਾਸ਼ਾ
ਇੱਕ ਯੂਨਿਟ (U) ਨੂੰ ਹੇਠ ਲਿਖੀਆਂ ਸ਼ਰਤਾਂ ਅਧੀਨ 1 μmol ਟਾਈਰੋਸਿਨ ਪ੍ਰਤੀ ਮਿੰਟ ਪੈਦਾ ਕਰਨ ਲਈ ਕੈਸੀਨ ਨੂੰ ਹਾਈਡ੍ਰੋਲਾਈਜ਼ ਕਰਨ ਲਈ ਲੋੜੀਂਦੇ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਵਜੋਂ ਪਰਿਭਾਸ਼ਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ।
ਰੀਐਜੈਂਟਸ ਦੀ ਤਿਆਰੀ
ਰੀਏਜੈਂਟ I: 1 ਗ੍ਰਾਮ ਦੁੱਧ ਕੈਸੀਨ ਨੂੰ 0.1M ਸੋਡੀਅਮ ਫਾਸਫੇਟ ਘੋਲ (pH 8.0) ਦੇ 50ml ਵਿੱਚ ਘੁਲਿਆ ਗਿਆ, 65-70 ℃ ਪਾਣੀ ਵਿੱਚ 15 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ ਉਬਾਲਿਆ ਗਿਆ, ਹਿਲਾ ਕੇ ਅਤੇ ਘੁਲਿਆ ਗਿਆ, ਪਾਣੀ ਦੁਆਰਾ ਠੰਢਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ, ਸੋਡੀਅਮ ਹਾਈਡ੍ਰੋਕਸਾਈਡ ਦੁਆਰਾ pH 8.0 ਵਿੱਚ ਐਡਜਸਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ, ਅਤੇ ਫਿਕਸ ਵਾਲੀਅਮ 100 ਮਿ.ਲੀ.
ਰੀਐਜੈਂਟ II: 0.1M ਟ੍ਰਾਈਕਲੋਰੋਸੈਟਿਕ ਐਸਿਡ, 0.2M ਸੋਡੀਅਮ ਐਸੀਟੇਟ, 0.3M ਐਸੀਟਿਕ ਐਸਿਡ।
ਰੀਐਜੈਂਟ III: 0.4M Na2CO3ਦਾ ਹੱਲ.
ਰੀਐਜੈਂਟ IV: ਫੋਰਿੰਟ ਰੀਐਜੈਂਟ ਨੂੰ 5 ਵਾਰ ਸ਼ੁੱਧ ਪਾਣੀ ਨਾਲ ਪੇਤਲਾ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।
ਰੀਐਜੈਂਟ V: ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਪਤਲਾ: 0.1M ਸੋਡੀਅਮ ਫਾਸਫੇਟ ਘੋਲ (pH 8.0)।
ਰੀਐਜੈਂਟ VI: ਟਾਈਰੋਸਿਨ ਘੋਲ: 0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 umol/ml ਟਾਈਰੋਸਿਨ 0.2M HCL ਨਾਲ ਘੁਲਿਆ ਹੋਇਆ।
ਵਿਧੀ
1. 0.5 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਰੀਐਜੈਂਟ I ਨੂੰ 37℃ ਤੱਕ ਪਹਿਲਾਂ ਤੋਂ ਗਰਮ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, 0.5ml ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਘੋਲ ਪਾਓ, ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮਿਲਾਓ, ਅਤੇ 10 ਮਿੰਟ ਲਈ 37℃ 'ਤੇ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕਰੋ।
2. ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ 1 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਰੀਐਜੈਂਟ II ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ, ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮਿਲਾਓ, ਅਤੇ 30 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕਰਨਾ ਜਾਰੀ ਰੱਖੋ।
3. ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਗੇਟ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦਾ ਹੱਲ.
4. 0.5ml ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਲਓ, 2.5ml ਰੀਐਜੈਂਟ III, 0.5ml ਰੀਐਜੈਂਟ IV ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ, ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮਿਲਾਓ ਅਤੇ 37℃ 'ਤੇ 30 ਮਿੰਟ ਲਈ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕਰੋ।
5. ਓ.ਡੀ660OD ਵਜੋਂ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ1;ਖਾਲੀ ਕੰਟਰੋਲ ਗਰੁੱਪ: 0.5ml ਰੀਐਜੈਂਟ V ਦੀ ਵਰਤੋਂ OD ਨੂੰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਘੋਲ ਨੂੰ ਬਦਲਣ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ660OD ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ2, ΔOD=OD1-ਓ.ਡੀ2.
6. L-ਟਾਈਰੋਸਾਈਨ ਸਟੈਂਡਰਡ ਕਰਵ: 0.5mL ਵੱਖ-ਵੱਖ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ L ਟਾਈਰੋਸਿਨ ਘੋਲ, 2.5mL ਰੀਏਜੈਂਟ III, 5mL ਸੈਂਟਰੀਫਿਊਜ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ 0.5mL ਰੀਏਜੈਂਟ IV, 30 ਮਿੰਟ ਲਈ 37℃ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕਰੋ, OD ਲਈ ਖੋਜੋ660L-ਟਾਈਰੋਸਿਨ ਦੀ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਲਈ, ਫਿਰ ਸਟੈਂਡਰਡ ਕਰਵ Y=kX+b ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ, ਜਿੱਥੇ Y L- ਟਾਇਰੋਸਿਨ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਹੈ, X OD ਹੈ600.
ਗਣਨਾ
2: ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਘੋਲ ਦੀ ਕੁੱਲ ਮਾਤਰਾ (mL)
0.5: ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਘੋਲ ਦੀ ਮਾਤਰਾ (mL)
0.5: ਕ੍ਰੋਮੋਜਨਿਕ ਨਿਰਧਾਰਨ (mL) ਵਿੱਚ ਵਰਤੀ ਜਾਂਦੀ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਤਰਲ ਮਾਤਰਾ
10: ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਦਾ ਸਮਾਂ (ਮਿੰਟ)
Df: ਪਤਲਾ ਮਲਟੀਪਲ
C: ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ (mg/mL)
ਹਵਾਲੇ
1. Wieger U & Hilz H. FEBS Lett.(1972); 23:77.
2. ਵਾਈਗਰ ਯੂ ਐਂਡ ਹਿਲਜ਼ ਐੱਚ. ਬਾਇਓਕੈਮ।ਬਾਇਓਫਿਜ਼.Res.ਕਮਿਊਨ।(1971); 44:513.
3. ਹਿਲਜ਼, ਐੱਚ.ਅਤੇ ਬਾਕੀ.,ਯੂਰੋ.ਜੇ. ਬਾਇਓਕੈਮ(1975); 56:103-108.
4. ਸੈਮਬਰੂਕ ਜੇet al., ਮੌਲੀਕਿਊਲਰ ਕਲੋਨਿੰਗ: ਏ ਲੈਬਾਰਟਰੀ ਮੈਨੂਅਲ, ਦੂਜਾ ਐਡੀਸ਼ਨ, ਕੋਲਡ ਸਪਰਿੰਗ ਹਾਰਬਰ ਲੈਬੋਰੇਟਰੀ ਪ੍ਰੈਸ, ਕੋਲਡ ਸਪਰਿੰਗ ਹਾਰਬਰ (1989)।
ਚਿੱਤਰ 2 ਸਰਵੋਤਮ ਤਾਪਮਾਨ
20 ਐਮਐਮ ਕੇ-ਫਾਸਫੇਟ ਬਫਰ pH 8.0 ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ।ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ: 1mg/mL
ਚਿੱਤਰ 3 pH ਸਥਿਰਤਾ
25℃, 50mM ਬਫਰ ਹੱਲ ਨਾਲ 16 h-ਇਲਾਜ: pH 4.5-5.5, ਐਸੀਟੇਟ;pH 6.0-8.0, ਨਾ-ਫਾਸਫੇਟ;pH 8.0-9.0, ਟ੍ਰਿਸ-ਐੱਚ.ਸੀ.ਐੱਲ.pH 9.0-12.5, Glycine-NaOH.ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ: 1mg/mL
ਚਿੱਤਰ 4 ਥਰਮਲ ਸਥਿਰਤਾ
50mm Tris-HCL ਬਫਰ, pH 8.0 ਨਾਲ 30 ਮਿੰਟ-ਇਲਾਜ।ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ: 1mg/mL
ਚਿੱਤਰ 5 ਸਟੋਰੇਜ ਸਥਿਰਤਾty at 25℃
