ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ RNA (dsRNA) ELISA KIT

ਇਹ ਕਿੱਟ ਕ੍ਰਮ ਦੀ ਪਰਵਾਹ ਕੀਤੇ ਬਿਨਾਂ, 60 ਬੇਸ ਜੋੜਿਆਂ (ਬੀਪੀ) ਤੋਂ ਵੱਧ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਵਾਲੇ dsRNA ਦੀ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਮਾਪ ਲਈ, ਬਾਇਓਟਿਨ-ਸਟ੍ਰੈਪਟਾਵਿਡਿਨ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਦੇ ਨਾਲ ਇੱਕ ਐਨਜ਼ਾਈਮ-ਲਿੰਕਡ ਇਮਯੂਨੋਸੋਰਬੈਂਟ ਅਸੇ (ELISA) ਜੋੜੀ ਹੈ।ਪਲੇਟ ਨੂੰ ਐਂਟੀ-ਡੀਐਸਆਰਐਨਏ ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਨਾਲ ਪ੍ਰੀ-ਕੋਟੇਡ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ।ਨਮੂਨੇ ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ dsRNA ਜੋੜਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਖੂਹਾਂ 'ਤੇ ਲੇਪ ਕੀਤੇ ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ ਨਾਲ ਜੋੜਦਾ ਹੈ।ਅਤੇ ਫਿਰ ਬਾਇਓਟਿਨੀਲੇਟਿਡ ਐਂਟੀ-dsRNA ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਨੂੰ ਜੋੜਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਨਮੂਨੇ ਵਿੱਚ dsRNA ਨਾਲ ਜੋੜਦਾ ਹੈ।ਧੋਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, HRP-Streptavidin ਜੋੜਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਬਾਇਓਟਿਨੀਲੇਟਿਡ ਐਂਟੀ-dsRNA ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਨਾਲ ਜੁੜ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਹੋਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਐਚਆਰਪੀ-ਸਟ੍ਰੈਪਟਾਵਿਡਿਨ ਨੂੰ ਧੋ ਦਿੱਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਫਿਰ TMB ਸਬਸਟਰੇਟ ਘੋਲ ਨੂੰ HRP ਦੁਆਰਾ ਜੋੜਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਇੱਕ ਨੀਲੇ ਰੰਗ ਦਾ ਉਤਪਾਦ ਤਿਆਰ ਕਰਨ ਲਈ ਉਤਪ੍ਰੇਰਕ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਜੋ ਐਸਿਡਿਕ ਸਟਾਪ ਘੋਲ ਨੂੰ ਜੋੜਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਪੀਲੇ ਵਿੱਚ ਬਦਲ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਪੀਲੇ ਦੀ ਘਣਤਾ ਪਲੇਟ ਵਿੱਚ ਕੈਪਚਰ ਕੀਤੇ dsRNA ਦੀ ਟੀਚਾ ਮਾਤਰਾ ਦੇ ਅਨੁਪਾਤੀ ਹੈ।ਸਮਾਈ 450 nm 'ਤੇ ਮਾਪੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।

ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨ

ਇਹ ਕਿੱਟ ਬਾਕੀ ਬਚੇ dsRNA ਦੀ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਮਾਪ ਲਈ ਹੈ।

ਕਿੱਟ ਦੇ ਹਿੱਸੇ

ਸਟੋਰੇਜ ਅਤੇ ਸਥਿਰਤਾ

1. ਅਣਵਰਤੀ ਕਿੱਟ ਲਈ: ਪੂਰੀ ਕਿੱਟ ਨੂੰ ਸ਼ੈਲਫ ਲਾਈਫ ਵਿੱਚ 2~8℃ 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਸਟੋਰੇਜ ਸਥਿਰਤਾ ਲਈ ਮਜ਼ਬੂਤ ​​ਰੌਸ਼ਨੀ ਤੋਂ ਬਚਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।

2. ਵਰਤੀ ਗਈ ਕਿੱਟ ਲਈ: ਇੱਕ ਵਾਰ ਮਾਈਕ੍ਰੋਪਲੇਟ ਖੋਲ੍ਹਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਪਲੇਟ ਸੀਲਰ ਨਾਲ ਅਣਵਰਤੇ ਖੂਹਾਂ ਨੂੰ ਢੱਕ ਦਿਓ ਅਤੇ ਡੈਸੀਕੈਂਟ ਪੈਕ ਵਾਲੇ ਫੋਇਲ ਪਾਊਚ 'ਤੇ ਵਾਪਸ ਜਾਓ, ਫੋਇਲ ਪਾਊਚ ਨੂੰ ਜ਼ਿਪ-ਸੀਲ ਕਰੋ ਅਤੇ ਵਰਤੋਂ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਜਿੰਨੀ ਜਲਦੀ ਹੋ ਸਕੇ 2~8℃ 'ਤੇ ਵਾਪਸ ਜਾਓ।ਹੋਰ ਰੀਐਜੈਂਟਸ ਨੂੰ ਵਰਤੋਂ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਜਿੰਨੀ ਜਲਦੀ ਹੋ ਸਕੇ 2~8℃ 'ਤੇ ਵਾਪਸ ਕਰ ਦੇਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।

ਸਮੱਗਰੀ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ ਪਰ ਸਪਲਾਈ ਨਹੀਂ ਕੀਤੀ ਗਈ

1. 450±10nm ਫਿਲਟਰ ਵਾਲਾ ਮਾਈਕ੍ਰੋਪਲੇਟ ਰੀਡਰ (ਜੇਕਰ 450 ਅਤੇ 650 nm ਤਰੰਗ-ਲੰਬਾਈ 'ਤੇ ਖੋਜਿਆ ਜਾ ਸਕੇ ਤਾਂ ਬਿਹਤਰ ਹੈ)।

2. ਮਾਈਕ੍ਰੋਪਲੇਟ ਸ਼ੇਕਰ।

3. RNase-ਮੁਕਤ ਟਿਪਸ ਅਤੇ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਟਿਊਬ।

ਓਪਰੇਸ਼ਨ ਫਲੋਚਾਰਟ

ਇਸ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਕਿ ਤੁਸੀਂ ਸ਼ੁਰੂ ਕਰੋ

1. ਵਰਤੋਂ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਕਿੱਟ ਦੇ ਸਾਰੇ ਹਿੱਸਿਆਂ ਅਤੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੂੰ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ (18-25℃) 'ਤੇ ਲਿਆਓ।ਜੇਕਰ ਕਿੱਟ ਨੂੰ ਇੱਕ ਵਾਰ ਵਿੱਚ ਵਰਤਿਆ ਨਹੀਂ ਜਾਵੇਗਾ, ਤਾਂ ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਮੌਜੂਦਾ ਪ੍ਰਯੋਗ ਲਈ ਸਿਰਫ ਸਟ੍ਰਿਪਾਂ ਅਤੇ ਰੀਐਜੈਂਟਸ ਕੱਢੋ, ਅਤੇ ਬਾਕੀ ਦੀਆਂ ਪੱਟੀਆਂ ਅਤੇ ਰੀਐਜੈਂਟਸ ਨੂੰ ਲੋੜੀਂਦੀ ਸਥਿਤੀ ਵਿੱਚ ਛੱਡ ਦਿਓ।

2. ਵਾਸ਼ ਬਫਰ: 1× ਵਾਸ਼ ਬਫਰ ਦਾ 800 ਮਿਲੀਲਿਟਰ ਤਿਆਰ ਕਰਨ ਲਈ 20× ਕੇਂਦਰਿਤ ਵਾਸ਼ ਬਫ਼ਰ ਦੇ 40mL ਨੂੰ 760mL ਡੀਓਨਾਈਜ਼ਡ ਜਾਂ ਡਿਸਟਿਲ ਵਾਟਰ ਨਾਲ ਪਤਲਾ ਕਰੋ।

3. ਮਿਆਰੀ: ਵਰਤਣ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਸਟਾਕ ਘੋਲ ਨੂੰ ਥੋੜ੍ਹੇ ਸਮੇਂ ਲਈ ਸਪਿਨ ਜਾਂ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਕਰੋ।ਪ੍ਰਦਾਨ ਕੀਤੇ ਗਏ ਚਾਰ ਮਿਆਰਾਂ ਦੀ ਇਕਾਗਰਤਾ 5ng/μL ਹੈ।UTP ਅਤੇ pUTP dsRNA ਮਿਆਰਾਂ ਲਈ, ਸਟੈਂਡਰਡ ਕਰਵ ਖਿੱਚਣ ਲਈ ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਸਟਾਕ ਹੱਲ ਨੂੰ 1,0.5,0.25,0.125,0.0625,0.0312,0.0156,0pg/μL ਨਾਲ STE ਬਫਰ ਨਾਲ ਪਤਲਾ ਕਰੋ।N1-Me-pUTP dsRNA ਮਿਆਰਾਂ ਲਈ, ਸਟੈਂਡਰਡ ਕਰਵ ਖਿੱਚਣ ਲਈ ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਸਟਾਕ ਹੱਲ ਨੂੰ 2,1,0.5,0.25,0.125,0.0625,0.0312, 0pg/μL ਨਾਲ STE ਬਫਰ ਨਾਲ ਪਤਲਾ ਕਰੋ।5-OMe-UTP dsRNA ਸਟੈਂਡਰਡ ਲਈ, ਸਟੈਂਡਰਡ ਕਰਵ ਖਿੱਚਣ ਲਈ ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਸਟਾਕ ਘੋਲ ਨੂੰ 4,2,1,0.5, 0.25,0.125,0.0625, 0pg/μL STE ਬਫਰ ਨਾਲ ਪਤਲਾ ਕਰੋ।ਅਸੀਂ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕਰਦੇ ਹਾਂ ਕਿ ਮਿਆਰਾਂ ਨੂੰ ਹੇਠਾਂ ਦਿੱਤੇ ਚਾਰਟਾਂ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਪੇਤਲਾ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ:

4. ਬਾਇਓਟਿਨੀਲੇਟਿਡ ਡਿਟੈਕਸ਼ਨ ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਅਤੇ ਐਚਆਰਪੀ-ਸਟ੍ਰੈਪਟਾਵਿਡਿਨ ਕਾਰਜਸ਼ੀਲ ਹੱਲ: ਵਰਤੋਂ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਸਟਾਕ ਘੋਲ ਨੂੰ ਸੰਖੇਪ ਵਿੱਚ ਸਪਿਨ ਜਾਂ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਕਰੋ।ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ ਪਤਲਾ ਬਫਰ ਨਾਲ ਕੰਮ ਕਰਨ ਵਾਲੀ ਇਕਾਗਰਤਾ ਵਿੱਚ ਪਤਲਾ ਕਰੋ।

5. TMB ਸਬਸਟੇਟ: ਘੋਲ ਦੀ ਲੋੜੀਂਦੀ ਖੁਰਾਕ ਨੂੰ ਨਿਰਜੀਵ ਟਿਪਸ ਦੇ ਨਾਲ ਐਸਪੀਰੇਟ ਕਰੋ ਅਤੇ ਬਚੇ ਹੋਏ ਘੋਲ ਨੂੰ ਦੁਬਾਰਾ ਸ਼ੀਸ਼ੀ ਵਿੱਚ ਨਾ ਸੁੱਟੋ।TMB ਸਬਸਟੇਟ ਰੋਸ਼ਨੀ ਪ੍ਰਤੀ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, TMB ਸਬਸਟੇਟ ਨੂੰ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਤੱਕ ਰੋਸ਼ਨੀ ਦੇ ਸੰਪਰਕ ਵਿੱਚ ਨਾ ਰੱਖੋ।

ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ

1. ਪਰਖ ਲਈ ਲੋੜੀਂਦੀਆਂ ਪੱਟੀਆਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰੋ।ਵਰਤੋਂ ਲਈ ਫਰੇਮਾਂ ਵਿੱਚ ਪੱਟੀਆਂ ਪਾਓ।ਬਾਕੀ ਦੀਆਂ ਪਲੇਟ ਦੀਆਂ ਪੱਟੀਆਂ ਜੋ ਇਸ ਪਰਖ ਵਿੱਚ ਨਹੀਂ ਵਰਤੀਆਂ ਗਈਆਂ ਹਨ, ਉਨ੍ਹਾਂ ਨੂੰ ਡੈਸੀਕੈਂਟ ਨਾਲ ਬੈਗ ਵਿੱਚ ਦੁਬਾਰਾ ਪੈਕ ਕਰਨਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।ਰੈਫ੍ਰਿਜਰੇਟਿਡ ਸਟੋਰੇਜ ਲਈ ਬੈਗ ਨੂੰ ਕੱਸ ਕੇ ਬੰਦ ਕਰੋ।

2. ਢੁਕਵੇਂ ਖੂਹਾਂ ਵਿੱਚ ਮਿਆਰੀ, ਖਾਲੀ ਅਤੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੇ ਹਰੇਕ 100μL ਨੂੰ ਪਾਓ।ਪਲੇਟ ਸੀਲਰ ਨਾਲ ਢੱਕੋ।ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 500rpm 'ਤੇ ਹਿੱਲਣ ਦੇ ਨਾਲ 1 ਘੰਟੇ ਲਈ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕਰੋ।ਸਹੀ ਪਰਖ ਲਈ ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੂੰ STE ਬਫਰ ਨਾਲ ਪਤਲਾ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।

3. ਧੋਣ ਦਾ ਕਦਮ: ਘੋਲ ਨੂੰ ਐਸਪੀਰੇਟ ਕਰੋ ਅਤੇ ਹਰੇਕ ਖੂਹ ਨੂੰ 250μL ਵਾਸ਼ ਬਫਰ ਨਾਲ ਧੋਵੋ ਅਤੇ ਇਸਨੂੰ 30 ਸਕਿੰਟ ਤੱਕ ਖੜ੍ਹਾ ਰਹਿਣ ਦਿਓ।ਪਲੇਟ ਨੂੰ ਸੋਖਣ ਵਾਲੇ ਕਾਗਜ਼ 'ਤੇ ਖਿੱਚ ਕੇ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਧੋਣ ਵਾਲੇ ਬਫਰ ਨੂੰ ਰੱਦ ਕਰੋ।ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ 4 ਵਾਰ ਧੋਵੋ.

4. ਹਰੇਕ ਖੂਹ ਵਿੱਚ 100μL ਬਾਇਓਟਿਨੀਲੇਟਿਡ ਡਿਟੈਕਸ਼ਨ ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਵਰਕਿੰਗ ਘੋਲ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ।ਪਲੇਟ ਸੀਲਰ ਨਾਲ ਢੱਕੋ।ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 500rpm 'ਤੇ ਹਿੱਲਣ ਦੇ ਨਾਲ 1 ਘੰਟੇ ਲਈ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕਰੋ।

5. ਧੋਣ ਦੇ ਕਦਮ ਨੂੰ ਦੁਹਰਾਓ।

6. ਹਰੇਕ ਖੂਹ ਵਿੱਚ 100μL HRP-ਸਟ੍ਰੈਪਟਾਵਿਡਿਨ ਕਾਰਜਸ਼ੀਲ ਘੋਲ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ।ਪਲੇਟ ਸੀਲਰ ਨਾਲ ਢੱਕੋ।500rpm 'ਤੇ ਹਿੱਲਣ ਦੇ ਨਾਲ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 30 ਮਿੰਟ ਲਈ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕਰੋ।

7. ਧੋਣ ਦੇ ਕਦਮ ਨੂੰ ਦੁਬਾਰਾ ਦੁਹਰਾਓ।

8. ਹਰੇਕ ਖੂਹ ਵਿੱਚ 100μL TMB ਸਬਸਟਰੇਟ ਘੋਲ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ।ਪਲੇਟ ਸੀਲਰ ਨਾਲ ਢੱਕੋ।RT 'ਤੇ 30 ਮਿੰਟ ਲਈ ਰੋਸ਼ਨੀ ਤੋਂ ਬਚਾਓ।ਸਬਸਟਰੇਟ ਘੋਲ ਦੇ ਜੋੜ ਨਾਲ ਤਰਲ ਨੀਲਾ ਹੋ ਜਾਵੇਗਾ।

9. ਹਰੇਕ ਖੂਹ ਵਿੱਚ 50μL ਸਟਾਪ ਘੋਲ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ।ਸਟਾਪ ਘੋਲ ਦੇ ਜੋੜ ਨਾਲ ਤਰਲ ਪੀਲਾ ਹੋ ਜਾਵੇਗਾ।ਫਿਰ ਮਾਈਕ੍ਰੋਪਲੇਟ ਰੀਡਰ ਚਲਾਓ ਅਤੇ ਤੁਰੰਤ ਮਾਪ 450nm 'ਤੇ ਚਲਾਓ।

ਨਤੀਜਿਆਂ ਦੀ ਗਣਨਾ

1. ਹਰੇਕ ਮਿਆਰੀ, ਨਿਯੰਤਰਣ, ਅਤੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਲਈ ਔਸਤ ਡੁਪਲੀਕੇਟ ਰੀਡਿੰਗਾਂ ਅਤੇ ਔਸਤ ਜ਼ੀਰੋ ਸਟੈਂਡਰਡ ਆਪਟੀਕਲ ਘਣਤਾ ਨੂੰ ਘਟਾਓ।ਲੰਬਕਾਰੀ(Y) ਧੁਰੇ 'ਤੇ ਸਮਾਈ ਅਤੇ ਲੇਟਵੇਂ (X) ਧੁਰੇ 'ਤੇ dsRNA ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਦੇ ਨਾਲ ਇੱਕ ਮਿਆਰੀ ਕਰਵ ਬਣਾਓ।

2. ਕੰਪਿਊਟਰ-ਅਧਾਰਿਤ ਕਰਵ-ਫਿਟਿੰਗ ਸੌਫਟਵੇਅਰ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਕਰਵ ਮਾਹਰ 1.3 ਜਾਂ ELISA ਕੈਲਕ 5 ਜਾਂ 4 ਪੈਰਾਮੀਟਰ ਗੈਰ-ਲੀਨੀਅਰ ਫਿਟ ਮਾਡਲ ਵਿੱਚ ਗਣਨਾ ਕਰਨ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।

ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਨ

1. ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ:

ਖੋਜ ਦੀ ਹੇਠਲੀ ਸੀਮਾ: ≤ 0.001pg/μL (UTP-, pUTP-, N1-Me-pUTP-dsRNA ਲਈ), ≤ 0.01pg/μL (5-OMe-UTP-dsRNA ਲਈ)।

ਘੱਟ ਮਾਤਰਾ ਦੀ ਸੀਮਾ: 0.0156 pg/μL (UTP-, pUTP-dsRNA ਲਈ), 0.0312 pg/μL (N1-Me-pUTP-dsRNA ਲਈ), 0.0625 pg/μL (5-OMe-UTP-dsRNA ਲਈ)।

2. ਸ਼ੁੱਧਤਾ: ਇੰਟਰਾ-ਐਸੇ ਦਾ ਸੀਵੀ ≤10%, ਇੰਟਰ-ਅਸੈ ਦਾ ਸੀਵੀ ≤10%

3. ਰਿਕਵਰੀ: 80% ~ 120%

4. ਰੇਖਿਕਤਾ: 0.0156-0.5pg/μL(forUTP-,pUTP-dsRNA)0.0312-1pg/μL(forN1-Me-pUTP dsRNA), 0.0625-1pg/μL(5-OMe-UTP-dsRNA ਲਈ)।

ਵਿਚਾਰ

1. TMB ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦਾ ਤਾਪਮਾਨ ਅਤੇ ਸਮਾਂ ਨਾਜ਼ੁਕ ਹੈ, ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ ਹਦਾਇਤਾਂ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਸਖਤੀ ਨਾਲ ਕੰਟਰੋਲ ਕਰੋ।

2. ਚੰਗੀ ਪਰਖ ਦੀ ਪੁਨਰ-ਉਤਪਾਦਕਤਾ ਅਤੇ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਨੂੰ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ, ਵਾਧੂ ਗੈਰ-ਪ੍ਰਤੀਕਰਮਿਤ ਰੀਐਜੈਂਟਸ ਨੂੰ ਹਟਾਉਣ ਲਈ ਪਲੇਟਾਂ ਨੂੰ ਸਹੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਧੋਣਾ ਜ਼ਰੂਰੀ ਹੈ।

3. ਸਾਰੇ ਰੀਐਜੈਂਟਾਂ ਨੂੰ ਵਰਤਣ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮਿਲਾਇਆ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਨਮੂਨੇ ਜਾਂ ਰੀਐਜੈਂਟ ਜੋੜਨ ਦੌਰਾਨ ਭੰਬਲਾਂ ਤੋਂ ਬਚਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।

4. ਜੇਕਰ ਸੰਘਣੇ ਧੋਣ ਵਾਲੇ ਬਫਰ (20x) ਵਿੱਚ ਕ੍ਰਿਸਟਲ ਬਣ ਗਏ ਹਨ, ਤਾਂ 37℃ ਤੱਕ ਗਰਮ ਕਰੋ ਅਤੇ ਜਦੋਂ ਤੱਕ ਕ੍ਰਿਸਟਲ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਘੁਲ ਨਹੀਂ ਜਾਂਦੇ, ਉਦੋਂ ਤੱਕ ਹੌਲੀ-ਹੌਲੀ ਮਿਲਾਓ।

5. ਸੋਡੀਅਮ ਅਜ਼ੀਡ (NaN3) ਵਾਲੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੀ ਜਾਂਚ ਤੋਂ ਪਰਹੇਜ਼ ਕਰੋ, ਕਿਉਂਕਿ ਇਹ HRP ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਨਸ਼ਟ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ ਜਿਸ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ dsRNA ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਦਾ ਅੰਦਾਜ਼ਾ ਘੱਟ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।

6. ਪਰਖ ਦੌਰਾਨ RNase ਗੰਦਗੀ ਤੋਂ ਬਚੋ।

7. ਸਟੈਂਡਰਡ/ਨਮੂਨਾ, ਖੋਜ ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਅਤੇ SA-HRP ਵੀ ਬਿਨਾਂ ਹਿੱਲੇ RT 'ਤੇ ਕੀਤੇ ਜਾ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਪਰ ਇਸ ਨਾਲ ਖੋਜ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਇੱਕ ਗੁਣਾ ਘਟ ਸਕਦੀ ਹੈ।ਇਸ ਕੇਸ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕਰਦੇ ਹਾਂ ਕਿ UTP ਅਤੇ pUTP dsRNA ਮਿਆਰਾਂ ਨੂੰ 2pg/μL ਤੋਂ ਪਤਲਾ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ, N1-Me-pUTP dsRNA ਮਿਆਰਾਂ ਨੂੰ 4pg/μL ਅਤੇ 5-OMe-UTP dsRNA ਮਿਆਰਾਂ ਨੂੰ 8pg/μL ਤੋਂ ਪੇਤਲਾ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 60 ਮਿੰਟ ਲਈ HRP-ਸਟ੍ਰੈਪਟਾਵਿਡਿਨ ਕਾਰਜਸ਼ੀਲ ਘੋਲ ਨੂੰ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕਰੋ।ਫਲਾਸਕ ਸ਼ੇਕਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਨਾ ਕਰੋ, ਕਿਉਂਕਿ ਫਲਾਸਕ ਸ਼ੇਕਰ ਦਾ ਨਤੀਜਾ ਗਲਤ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ।

ਆਮ ਨਤੀਜਾ

1. ਮਿਆਰੀ ਕਰਵ ਡੇਟਾ

2. ਮਿਆਰੀ ਕਰਵ ਗਣਨਾ

3. ਲਾਈਨਰ ਖੋਜ ਰੇਂਜ: 0.0312- 1pg/μL