ਐਂਡੋਫ੍ਰੀ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਮੈਕਸੀ ਕਿੱਟ
ਇਹ ਕਿੱਟ 150 - 300 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਦੇ ਘੋਲ ਨੂੰ ਰਾਤੋ-ਰਾਤ ਕਲਚਰ ਕਰਨ ਲਈ, ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਨੂੰ ਲਾਈਜ਼ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਸੁਧਾਰੀ SDS-ਅਲਕਲਾਈਨ ਲਾਈਸਿਸ ਵਿਧੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੱਢਣ ਲਈ ਢੁਕਵੀਂ ਹੈ।ਕੱਚੇ ਐਬਸਟਰੈਕਟ ਨੂੰ ਚੋਣਵੇਂ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਵਿਲੱਖਣ ਐਂਡੋਟੌਕਸਿਨ ਸਕੈਵੇਂਜਰ ਨਾਲ ਜੋੜਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਐਂਡੋਟੌਕਸਿਨ ਨੂੰ ਹਟਾਉਣ ਲਈ ਸੈਂਟਰੀਫਿਊਗੇਸ਼ਨ ਦੁਆਰਾ ਵੱਖ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਫਿਰ, ਸਿਲਿਕਾ ਜੈੱਲ ਝਿੱਲੀ ਉੱਚ-ਲੂਣ ਅਤੇ ਘੱਟ-ਪੀਐਚ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ ਵਿੱਚ ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਡੀਐਨਏ ਨਾਲ ਚੋਣਵੇਂ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਜੁੜ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਇਸ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਅਸ਼ੁੱਧੀਆਂ ਅਤੇ ਹੋਰ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਦੇ ਹਿੱਸਿਆਂ ਨੂੰ ਹਟਾਉਣ ਲਈ ਵਾਸ਼ ਬਫਰ ਨੂੰ ਜੋੜਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਅੰਤ ਵਿੱਚ, ਇੱਕ ਘੱਟ-ਲੂਣ, ਉੱਚ-ਪੀਐਚ ਇਲਿਊਸ਼ਨ ਬਫਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਸਿਲੀਕਾਨ ਮੈਟ੍ਰਿਕਸ ਝਿੱਲੀ ਤੋਂ ਸ਼ੁੱਧ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਕੱਢਣ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਸਿਲਿਕਾ ਜੈੱਲ ਝਿੱਲੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਸੋਜ਼ਸ਼ ਝਿੱਲੀ ਨੂੰ ਰੁਜ਼ਗਾਰ ਦਿੰਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਕਾਲਮ ਅਤੇ ਕਾਲਮ ਵਿਚਕਾਰ ਸੋਜ਼ਸ਼ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਦਾ ਅੰਤਰ ਬਹੁਤ ਛੋਟਾ ਹੈ ਅਤੇ ਦੁਹਰਾਉਣਯੋਗਤਾ ਚੰਗੀ ਹੈ.ਫਿਨੌਲ, ਕਲੋਰੋਫਾਰਮ ਅਤੇ ਹੋਰ ਜ਼ਹਿਰੀਲੇ ਰੀਐਜੈਂਟਸ ਦੀ ਲੋੜ ਨਹੀਂ ਹੈ, ਅਤੇ ਨਾ ਹੀ ਈਥਾਨੋਲ ਵਰਖਾ ਦੇ ਕਦਮ ਹਨ।ਇਸ ਕਿੱਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ 80% -90% ਦੀ ਐਕਸਟਰੈਕਸ਼ਨ ਦਰ ਦੇ ਨਾਲ, 0.2 -1.5 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ ਸ਼ੁੱਧ ਉੱਚ-ਕਾਪੀ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਕੱਢਣ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।ਕਿੱਟ ਇੱਕ ਵਿਲੱਖਣ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਫਾਰਮੂਲਾ ਵਰਤਦੀ ਹੈ ਜੋ ਐਂਡੋਟੌਕਸਿਨ ਨੂੰ ਹਟਾਉਂਦੀ ਹੈ, ਐਂਡੋਟੌਕਸਿਨ ਦੀ ਸਮੱਗਰੀ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਹੈ ਅਤੇ ਸੈੱਲ ਟ੍ਰਾਂਸਫੈਕਸ਼ਨ ਪ੍ਰਭਾਵ ਸ਼ਾਨਦਾਰ ਹੈ।ਐਕਸਟਰੈਕਟ ਕੀਤੇ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਨੂੰ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਪਾਚਨ, ਪੀਸੀਆਰ, ਵਿਟਰੋ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ, ਟ੍ਰਾਂਸਫਾਰਮੇਸ਼ਨ, ਸੀਕਵੈਂਸਿੰਗ ਅਤੇ ਹੋਰ ਅਣੂ ਜੀਵ ਵਿਗਿਆਨ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਵਿੱਚ ਸਿੱਧੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਸਟੋਰੇਜ਼ ਹਾਲਾਤ
RNaseA ਨੂੰ -30 ~ -15℃ ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ≤0℃ ਤੇ ਲਿਜਾਇਆ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।
Endotoxin Scavenger ਨੂੰ ਇੱਕ ਮਹੀਨੇ ਲਈ 2 ~ 8℃ ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਲਈ ਸਟੋਰੇਜ ਲਈ -30 ~ -15℃ ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈਅਤੇ ≤0℃ 'ਤੇ ਲਿਜਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।
ਹੋਰ ਹਿੱਸਿਆਂ ਨੂੰ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ (15 ~ 25 ℃) 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਲਿਜਾਇਆ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।
ਕੰਪੋਨੈਂਟਸ
| ਕੰਪੋਨੈਂਟਸ | 10RXNS |
| ਆਰਨੇਸ ਏ | 750 μL |
| ਬਫਰ P1 | 75 ਮਿ.ਲੀ |
| ਬਫਰ P2 | 75 ਮਿ.ਲੀ |
| ਬਫਰ P4 | 75 ਮਿ.ਲੀ |
| ਐਂਡੋਟੌਕਸਿਨ ਸਕੈਵੇਂਜਰ | 25 ਮਿ.ਲੀ |
| ਬਫਰ PW | 2 × 22 ਮਿ.ਲੀ |
| ਬਫਰ ਟੀ.ਬੀ | 20 ਮਿ.ਲੀ |
| FastPure DNA ਮੈਕਸੀ ਕਾਲਮ (ਹਰੇਕ ਇੱਕ 50ml ਕਲੈਕਸ਼ਨ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ) | 10 |
| ਐਂਡੋਟੌਕਸਿਨ-ਮੁਕਤ ਸੰਗ੍ਰਹਿ ਟਿਊਬ | 2 × 5 |
RNaseA:10 mg/ml, RNA ਨੂੰ ਹਟਾਉਣ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।
ਬਫਰ P1:ਬੈਕਟੀਰੀਅਲ ਸਸਪੈਂਸ਼ਨ ਬਫਰ, ਪਹਿਲੀ ਵਰਤੋਂ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ RNaseA ਨੂੰ ਬਫਰ P1 ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ।
ਬਫਰ P2:ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਲਾਈਸਿਸ ਬਫਰ (SDS/NaOH ਰੱਖਦਾ ਹੈ)।
ਬਫਰ P4:ਬੇਅਸਰ ਬਫਰ.
ਐਂਡੋਟੌਕਸਿਨ ਸਕੈਵੇਂਜਰ:ਕੱਚੇ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਐਬਸਟਰੈਕਟ ਤੋਂ ਐਂਡੋਟੌਕਸਿਨ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਹਟਾਓ।
ਬਫਰ PW:ਬਫਰ ਨੂੰ ਧੋਵੋ, ਪਹਿਲੀ ਵਰਤੋਂ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਈਥਾਨੌਲ ਦੀ ਨਿਰਧਾਰਤ ਮਾਤਰਾ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ।
ਬਫਰ ਟੀ.ਬੀ.elution ਬਫਰ.
FastPure DNA ਮੈਕਸੀ ਕਾਲਮ:ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਡੀਐਨਏ ਸੋਸ਼ਣ ਕਾਲਮ।
ਸੰਗ੍ਰਹਿ ਟਿਊਬ 50 ਮਿ.ਲੀ.ਫਿਲਟਰੇਟ ਕਲੈਕਸ਼ਨ ਟਿਊਬ.
ਐਂਡੋਟੌਕਸਿਨ-ਮੁਕਤ ਸੰਗ੍ਰਹਿ ਟਿਊਬ:ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਡੀਐਨਏ ਸੰਗ੍ਰਹਿ ਟਿਊਬ.
ਤਿਆਰ ਸਮੱਗਰੀ
ਸੰਪੂਰਨ ਈਥਾਨੌਲ, ਆਈਸੋਪ੍ਰੋਪਾਨੋਲ, 50 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਗੋਲ-ਬੋਟਮ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਟਿਊਬ ਅਤੇ 50 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਐਂਡੋਟੌਕਸਿਨ-ਮੁਕਤਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਟਿਊਬ.
ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨਾਂ
ਇਹ ਉਤਪਾਦ 150 - 300 ਮਿ.ਲੀ. ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਦੇ ਘੋਲ ਤੋਂ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਦੇ ਵੱਡੇ ਪੱਧਰ 'ਤੇ ਕੱਢਣ ਲਈ ਢੁਕਵਾਂ ਹੈ।ਰਾਤੋ ਰਾਤ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ.
ਪ੍ਰਯੋਗ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ
1. 150 - 200 ਮਿ.ਲੀ. (300 ਮਿ.ਲੀ. ਤੋਂ ਵੱਧ ਨਹੀਂ) ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਦੇ ਘੋਲ ਨੂੰ ਰਾਤੋ-ਰਾਤ ਸੰਸ਼ੋਧਿਤ ਕਰੋ ਅਤੇ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਕਰੋ1 - 2 ਮਿੰਟ ਲਈ ਲਗਭਗ 11,000 rpm (12,000 × g)।ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਨੂੰ ਰੱਦ ਕਰੋ ਅਤੇ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਇਕੱਠੇ ਕਰੋ।
Δ 50 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਤੋਂ ਵੱਧ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਦੇ ਘੋਲ ਨੂੰ ਇਕੱਠਾ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ, ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਨੂੰ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਦੇ ਘੋਲ, ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਗੇਸ਼ਨ, ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਨੂੰ ਰੱਦ ਕਰਨ ਅਤੇ ਹੋਰ ਕਦਮਾਂ ਲਈ ਉਸੇ 50 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ ਜੋੜ ਕੇ ਇਕੱਠਾ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਕਈ ਵਾਰ.
2. ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਵਿੱਚ 7.5 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਬਫਰ P1 (ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਜਾਂਚ ਕਰੋ ਕਿ ਕੀ RNaseA ਨੂੰ ਬਫਰ P1 ਵਿੱਚ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਹੈ) ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ।ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਵਾਲੀ ਟਿਊਬ ਅਤੇ ਵੌਰਟੈਕਸ ਜਾਂ ਪਾਈਪਟਿੰਗ ਦੁਆਰਾ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮਿਲਾਓ।
Δ ਇਸ ਪਗ ਵਿੱਚ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਦਾ ਸੰਪੂਰਨ ਪੁਨਰ-ਸਸਪੈਂਸ਼ਨ ਪੈਦਾਵਾਰ ਲਈ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ, ਅਤੇ ਪੁਨਰ-ਸਸਪੈਂਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਕੋਈ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਦੇ ਕਲੰਪ ਨਹੀਂ ਹੋਣੇ ਚਾਹੀਦੇ।ਜੇ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਦੇ ਝੁੰਡ ਹਨ ਜੋ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਨਹੀਂ ਮਿਲਾਏ ਗਏ ਹਨ, ਤਾਂ ਇਹ ਲੀਸਿਸ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਤ ਕਰੇਗਾ, ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਘੱਟ ਉਪਜ ਅਤੇ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਹੋਵੇਗੀ।ਜੇ ਬੈਕਟੀਰੀਅਲ ਘੋਲ ਦਾ OD600 0.65 ਹੈ, ਤਾਂ ਇਹ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ ਕਿ ਬਫਰ P1 ਦੇ 7.5 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ 150 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਦੇ ਘੋਲ ਵਿੱਚੋਂ ਕੱਢਦੇ ਸਮੇਂ ਕੀਤੀ ਜਾਵੇ;ਜਦੋਂ OD600 0.75 ਹੈ, ਤਾਂ ਬਫਰ P1 ਦੇ 8 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਜਾਣੀ ਚਾਹੀਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਬਫਰਾਂ P2 ਅਤੇ P4 ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਉਸ ਅਨੁਸਾਰ ਬਦਲੀ ਜਾਣੀ ਚਾਹੀਦੀ ਹੈ।ਜੇ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਦੇ ਘੋਲ ਦੀ ਮਾਤਰਾ 200 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਤੱਕ ਵਧਾਈ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਇਹ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ ਕਿਬਫਰਾਂ P1, P2, ਅਤੇ P4 ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਅਨੁਪਾਤਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਧਾਈ ਜਾਵੇ।
3. ਸਟੈਪ 2 ਤੋਂ ਬੈਕਟੀਰੀਅਲ ਸਸਪੈਂਸ਼ਨ ਵਿੱਚ 7.5 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਬਫਰ P2 ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ ਅਤੇ 6 - 8 ਲਈ ਹੌਲੀ-ਹੌਲੀ ਉੱਪਰ ਅਤੇ ਹੇਠਾਂ ਮਿਲਾਓ।ਵਾਰ ਅਤੇ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 4 - 5 ਮਿੰਟ ਲਈ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕਰੋ।
Δ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਰਲਾਉਣ ਲਈ ਹੌਲੀ ਹੌਲੀ ਉਲਟਾਓ।ਵੋਰਟੈਕਸਿੰਗ ਜੀਨੋਮਿਕ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣੇਗੀ, ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਐਕਸਟਰੈਕਟ ਕੀਤੇ ਪਲਾਜ਼ਮਿਡ ਵਿੱਚ ਜੀਨੋਮਿਕ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਹੋਣਗੇ।ਇਸ ਸਮੇਂ, ਘੋਲ ਲੇਸਦਾਰ ਅਤੇ ਪਾਰਦਰਸ਼ੀ ਬਣ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਇਹ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਖਤਮ ਹੋ ਗਿਆ ਹੈ।ਪਲਾਜ਼ਮੀਡਾਂ ਦੇ ਵਿਨਾਸ਼ ਤੋਂ ਬਚਣ ਲਈ ਮਿਆਦ 5 ਮਿੰਟ ਤੋਂ ਵੱਧ ਨਹੀਂ ਹੋਣੀ ਚਾਹੀਦੀ।ਜੇਕਰ ਹੱਲ ਸਪੱਸ਼ਟ ਨਹੀਂ ਹੈ, ਤਾਂ ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਹੋ ਸਕਦੇ ਹਨਅਧੂਰਾ lysis, ਇਸ ਲਈ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਉਚਿਤ ਘਟਾਇਆ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ.
4. ਕਦਮ 3 ਤੋਂ ਬੈਕਟੀਰੀਅਲ ਸਸਪੈਂਸ਼ਨ ਵਿੱਚ 7.5 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਬਫਰ P4 ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ ਅਤੇ ਹੱਲ ਨੂੰ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਨਾਲ ਬਫਰ P2 ਨੂੰ ਬੇਅਸਰ ਕਰਨ ਲਈ ਤੁਰੰਤ 6 - 8 ਵਾਰ ਹੌਲੀ ਹੌਲੀ ਉਲਟਾਓ।ਇਸ ਸਮੇਂ, ਚਿੱਟੇ ਫਲੋਕੁਲੈਂਟ ਪ੍ਰੈਪੀਟੇਟ ਦਿਖਾਈ ਦੇਣੇ ਚਾਹੀਦੇ ਹਨ।10 - 15 ਮਿੰਟ ਲਈ ਲਗਭਗ 11,000 rpm (12,000 × g) ਤੋਂ ਵੱਧ 'ਤੇ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਕਰੋ, ਧਿਆਨ ਨਾਲ ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਨੂੰ ਇੱਕ ਨਵੀਂ 50 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਗੋਲ-ਬੋਟਮ ਸੈਂਟਰੀਫਿਊਜ ਟਿਊਬ (ਸਵੈ-ਤਿਆਰ) ਵਿੱਚ ਪਾਓ ਅਤੇ ਬਚੋ।ਫਲੋਟਿੰਗ ਸਫੈਦ ਪਰੇਪੀਟੇਟ ਨੂੰ ਐਸਪੀਰੇਟ ਕਰੋ।
Δ ਬਫਰ P4 ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ ਅਤੇ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਰਲਾਉਣ ਲਈ ਤੁਰੰਤ ਉਲਟ ਕਰੋ।ਟਿਊਬ ਨੂੰ ਉਦੋਂ ਤੱਕ ਖੜ੍ਹਾ ਰਹਿਣ ਦਿਓ ਜਦੋਂ ਤੱਕ ਕਿ ਸਥਾਨਕ ਵਰਖਾ ਦੇ ਉਤਪਾਦਨ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਚਿੱਟੇ ਵਰਖਾ ਨੂੰ ਬਰਾਬਰ ਵੰਡਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਜੋ ਨਿਰਪੱਖਤਾ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਜੇ ਸੈਂਟਰੀਫਿਊਗੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਕੋਈ ਇਕਸਾਰ ਚਿੱਟਾ ਫਲੋਕੂਲੈਂਟ ਪ੍ਰੈਪੀਟੇਟ ਨਹੀਂ ਹੈ ਅਤੇ ਸੈਂਟਰੀਫਿਊਗੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਸਪੱਸ਼ਟ ਨਹੀਂ ਹੈ, ਤਾਂ ਟਿਊਬ ਹੋ ਸਕਦੀ ਹੈਹੋਰ 5 ਮਿੰਟ ਲਈ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਕੀਤਾ ਗਿਆ।
5. ਪੜਾਅ 4 ਤੋਂ ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਵਿੱਚ ਐਂਡੋਟੌਕਸਿਨ ਸਕੈਵੇਂਜਰ ਦੀ 0. 1 ਗੁਣਾ ਮਾਤਰਾ (ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਵਾਲੀਅਮ ਦਾ 10%, ਲਗਭਗ 2.2 ਮਿ.ਲੀ.) ਜੋੜੋ ਅਤੇ ਮਿਕਸ ਕਰਨ ਲਈ ਉਲਟ ਕਰੋ।ਘੋਲ ਨੂੰ ਬਰਫ਼ ਦੇ ਇਸ਼ਨਾਨ ਵਿੱਚ ਰੱਖੋ ਜਾਂ 5 ਮਿੰਟ ਲਈ ਕੁਚਲੇ ਹੋਏ ਬਰਫ਼ (ਜਾਂ ਫਰਿੱਜ ਫ੍ਰੀਜ਼ਰ) ਵਿੱਚ ਪਾਓ ਜਦੋਂ ਤੱਕ ਘੋਲ ਗੰਧਲੇ ਤੋਂ ਸਾਫ਼ ਅਤੇ ਪਾਰਦਰਸ਼ੀ (ਜਾਂ ਅਜੇ ਵੀ) ਵਿੱਚ ਨਹੀਂ ਬਦਲ ਜਾਂਦਾ।ਥੋੜ੍ਹਾ ਗੰਧਲਾ), ਅਤੇ ਕਦੇ-ਕਦਾਈਂ ਕਈ ਵਾਰ ਮਿਲਾਓ।
Δ ਐਂਡੋਟੌਕਸਿਨ ਸਕੈਵੇਂਜਰ ਨੂੰ ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਵਿੱਚ ਜੋੜਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਗੰਧਲਾ ਹੋ ਜਾਵੇਗਾ ਪਰਬਰਫ਼ ਦੇ ਇਸ਼ਨਾਨ ਵਿੱਚ ਠੰਢਾ ਹੋਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਸਪੱਸ਼ਟ (ਜਾਂ ਥੋੜ੍ਹਾ ਗੰਧਲਾ) ਹੋ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।
6. ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਨੂੰ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ (>25℃) 'ਤੇ 10 - 15 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ ਰੱਖਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਇਹ ਗੰਧਲਾ ਹੋ ਜਾਵੇਗਾਇਸ ਦਾ ਤਾਪਮਾਨ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ ਤੱਕ ਵਧ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਫਿਰ ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਨੂੰ ਮਿਲਾਉਣ ਲਈ ਉਲਟਾ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।
Δ ਜੇ ਕਮਰੇ ਦਾ ਤਾਪਮਾਨ ਘੱਟ ਹੈ ਜਾਂ ਤੁਸੀਂ ਕੱਢਣ ਦਾ ਸਮਾਂ ਘਟਾਉਣਾ ਚਾਹੁੰਦੇ ਹੋ, ਤਾਂ ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਨੂੰ 37 ~ 42 ℃ ਪਾਣੀ ਦੇ ਇਸ਼ਨਾਨ ਵਿੱਚ 5 - 10 ਮਿੰਟ ਲਈ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਅਗਲਾ ਕਦਮ ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਗੰਧਲਾ ਹੋ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।
7. ਫੇਜ਼ ਨੂੰ ਵੱਖ ਕਰਨ ਲਈ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ (ਤਾਪਮਾਨ >25℃ ਹੋਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ) 'ਤੇ 10 ਮਿੰਟ ਲਈ ਲਗਭਗ 11,000 rpm (12,000 × g) 'ਤੇ ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਨੂੰ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਕਰੋ।ਉੱਪਰਲੇ ਜਲਮਈ ਪੜਾਅ ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਜਦੋਂ ਕਿ ਹੇਠਲੇ ਨੀਲੇ ਤੇਲਯੁਕਤ ਪੜਾਅ ਦੀ ਪਰਤ ਵਿੱਚ ਐਂਡੋਟੌਕਸਿਨ ਅਤੇ ਹੋਰ ਅਸ਼ੁੱਧੀਆਂ ਹੁੰਦੀਆਂ ਹਨ।ਦਾ ਤਬਾਦਲਾ ਕਰੋਡੀਐਨਏ - ਇੱਕ ਨਵੀਂ ਟਿਊਬ ਲਈ ਜਲਮਈ ਪੜਾਅ ਅਤੇਤੇਲਯੁਕਤ ਪਰਤ ਨੂੰ ਰੱਦ ਕਰੋ.
Δ ਸੈਂਟਰੀਫਿਊਗੇਸ਼ਨ ਦੌਰਾਨ ਤਾਪਮਾਨ 25 ℃ ਤੋਂ ਵੱਧ ਹੋਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ ਕਿਉਂਕਿ ਪ੍ਰਭਾਵੀ ਪੜਾਅ ਵੱਖਰਾ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦਾਤਾਪਮਾਨ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਹੋਣ 'ਤੇ ਵਾਪਰਦਾ ਹੈ।
Δ ਜੇ ਪੜਾਅ ਵੱਖ ਕਰਨਾ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਨਹੀਂ ਹੈ, ਤਾਂ ਸੈਂਟਰੀਫਿਊਗੇਸ਼ਨ ਤਾਪਮਾਨ ਨੂੰ 30 ℃ ਤੱਕ ਐਡਜਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇਸੈਂਟਰੀਫਿਊਗੇਸ਼ਨ ਦਾ ਸਮਾਂ 15 ਮਿੰਟ ਤੱਕ ਵਧਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
Δ ਨੀਲੀ ਤੇਲ ਵਾਲੀ ਪਰਤ ਨੂੰ ਚੂਸੋ ਨਾ ਕਿਉਂਕਿ ਇਸ ਵਿੱਚ ਐਂਡੋਟੌਕਸਿਨ ਅਤੇ ਹੋਰ ਅਸ਼ੁੱਧੀਆਂ ਹੁੰਦੀਆਂ ਹਨ।
ਵਿਧੀ
ਰੀਸਸਪੈਂਸ਼ਨ ਲਾਇਸਿਸ ਨਿਰਪੱਖਤਾ
◇ 7.5 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਬਫਰ P1 ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ
◇ 7.5 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਬਫਰ P2 ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ
◇ 7.5 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਬਫਰ P4 ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ
ਐਂਡੋਟੌਕਸਿਨ ਨੂੰ ਹਟਾਉਣਾ
◇ ਐਂਡੋਟੌਕਸਿਨ ਸਕੈਵੇਂਜਰ ਦੇ ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਵਾਲੀਅਮ ਤੋਂ 0. 1 ਗੁਣਾ ਜੋੜੋ
ਬਾਈਡਿੰਗ ਅਤੇ ਧੋਣਾ
◇ ਆਈਸੋਪ੍ਰੋਪਾਨੋਲ ਦੀ ਮਾਤਰਾ 0.5 ਗੁਣਾ ਜੋੜੋ
◇ 10 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਬਫਰ PW ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ
◇ 10 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਬਫਰ PW ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ
ਇਲੂਸ਼ਨ
◇ 1 - 2 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਬਫਰ ਟੀਬੀ ਜਾਂ ਐਂਡੋਟੌਕਸਿਨ-ਮੁਕਤ ddH2O ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ
