M-MLV ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟਸ
RevScript ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟਸ ਜੈਨੇਟਿਕ ਇੰਜੀਨੀਅਰਿੰਗ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਇਸ ਵਿੱਚ ਉੱਚ cDNA ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਸਮਰੱਥਾ, ਥਰਮਲ ਸਥਿਰਤਾ ਅਤੇ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਤਾਪਮਾਨ ਸੀਮਾ (60 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਤੱਕ) ਹੈ।ਸਿੰਥੇਸਾਈਜ਼ਡ cDNA ਉਤਪਾਦ 10 kb ਤੱਕ ਹੈ।ਇਹ ਟੈਂਪਲੇਟਾਂ ਦੀ ਸਾਂਝ ਨੂੰ ਵਧਾਉਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਸੈਕੰਡਰੀ ਬਣਤਰ ਜਾਂ ਘੱਟ ਕਾਪੀ ਜੀਨਾਂ ਵਾਲੇ ਆਰਐਨਏ ਟੈਂਪਲੇਟਾਂ ਦੇ ਉਲਟ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਲਈ ਢੁਕਵਾਂ ਹੈ।
ਕੰਪੋਨੈਂਟਸ
| ਕੰਪੋਨੈਂਟ | HC2003 ਬੀ-01 (10,000U) | HC2003 ਬੀ-02 (5*10,000U) | HC2003 ਬੀ-03 (200,000U) |
| RevScript ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟੇਜ (200U/μL) | 50 μL | 5×50 μL | 1 ਮਿ.ਲੀ |
| 5 × RevScript ਬਫਰ | 250 μL | 1.25 ਮਿ.ਲੀ | 5 ਮਿ.ਲੀ |
ਸਟੋਰੇਜ ਦੀ ਸਥਿਤੀ
ਇਸ ਉਤਪਾਦ ਨੂੰ 2 ਸਾਲਾਂ ਲਈ -25°C~-15°C 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।
ਯੂਨਿਟ ਪਰਿਭਾਸ਼ਾ
ਇੱਕ ਯੂਨਿਟ ਓਲੀਗੋ(dT) ਨੂੰ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਵਜੋਂ ਵਰਤਦੇ ਹੋਏ 37°C 'ਤੇ 10 ਮਿੰਟਾਂ ਵਿੱਚ ਐਸਿਡ-ਘੁਲਣਸ਼ੀਲ ਸਮੱਗਰੀ ਵਿੱਚ 1 nmol dTTP ਨੂੰ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰਦੀ ਹੈ।
ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਸੈੱਟਅੱਪ
1.ਆਰਐਨਏ ਟੈਂਪਲੇਟ ਦਾ ਵਿਕਾਰਕਰਨ (ਇਹ ਪੜਾਅ ਵਿਕਲਪਿਕ ਹੈ, ਆਰਐਨਏ ਟੈਂਪਲੇਟ ਦੀ ਵਿਨਾਸ਼ਕਾਰੀ ਸੈਕੰਡਰੀ ਢਾਂਚੇ ਨੂੰ ਖੋਲ੍ਹਣ ਵਿੱਚ ਮਦਦ ਕਰਦੀ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਪਹਿਲੇ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਸੀਡੀਐਨਏ ਦੀ ਪੈਦਾਵਾਰ ਵਿੱਚ ਸੁਧਾਰ ਕਰੇਗੀ।)
| ਕੰਪੋਨੈਂਟਸ | ਵਾਲੀਅਮ (μL) |
| RNase ਮੁਫ਼ਤ ddH2O | ਨੂੰ 13 |
| ਓਲੀਗੋ(dT)18 (50 μmol/L) ਜਾਂ ਰੈਂਡਮ ਪ੍ਰਾਈਮਰ (50 μmol/L) ਜਾਂ ਜੀਨ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਪ੍ਰਾਈਮਰ (2 μmol/L) | 1 |
| ਜਾਂ 1 | |
| ਜਾਂ 1 | |
| RNA ਟੈਂਪਲੇਟ | ਐਕਸa |
ਨੋਟ:
1) a: ਕੁੱਲ RNA: 1-5 ug ਜਾਂ mRNA: 1-500 ng
2) 5 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ 65 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ 'ਤੇ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕਰੋ, ਫਿਰ 2 ਮਿੰਟ ਲਈ ਠੰਡਾ ਹੋਣ ਲਈ ਤੁਰੰਤ ਬਰਫ਼ 'ਤੇ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਕਰੋ।ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਤਰਲ ਨੂੰ ਇਕੱਠਾ ਕਰਨ ਲਈ ਸੰਖੇਪ ਕੇਂਦਰੀਕਰਨ, ਹੇਠਾਂ ਦਿੱਤੀ ਸਾਰਣੀ ਵਿੱਚ ਦਰਸਾਏ ਅਨੁਸਾਰ ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਹੱਲ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ।ਮਿਕਸ ਕਰਨ ਲਈ ਹੌਲੀ-ਹੌਲੀ ਪਾਈਪੇਟ ਕਰੋ।
1. ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਮਿਸ਼ਰਣ ਦੀ ਤਿਆਰੀ (20 μL ਵਾਲੀਅਮ)
| ਕੰਪੋਨੈਂਟਸ | ਵਾਲੀਅਮ (μL) |
| ਪਿਛਲੇ ਪੜਾਅ ਦਾ ਮਿਸ਼ਰਣ | 13 |
| 5×ਬਫਰ | 4 |
| dNTP ਮਿਕਸ (10nmol/L) | 1 |
| ਉਲਟਾ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟੇਜ (200 U/μL) | 1 |
| RNase ਇਨਿਹਿਬਟਰ (40 U/μL) | 1 |
1.ਹੇਠ ਲਿਖੀਆਂ ਸ਼ਰਤਾਂ ਅਧੀਨ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਕਰੋ:
| ਤਾਪਮਾਨ (°C) | ਸਮਾਂ |
| 25 ਡਿਗਰੀ ਸੈਂa | 5 ਮਿੰਟ |
| 42 ਡਿਗਰੀ ਸੈਂb | 15-30 ਮਿੰਟ |
| 85 ਡਿਗਰੀ ਸੈਂc | 5 ਮਿੰਟ |
ਨੋਟ:
1) ਏ.5 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ 25°C 'ਤੇ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕਰਨਾ ਸਿਰਫ਼ ਬੇਤਰਤੀਬ ਹੈਕਸਾਮਰਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨ ਲਈ ਲੋੜੀਂਦਾ ਹੈ।Oligo (dT) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਇਸ ਪੜਾਅ ਨੂੰ ਛੱਡ ਦਿਓ18ਜਾਂ ਜੀਨ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਪ੍ਰਾਈਮਰ।
2) ਬੀ.ਸਿਫਾਰਿਸ਼ ਕੀਤਾ ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਤਾਪਮਾਨ 42°C ਹੈ, ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਸੈਕੰਡਰੀ ਢਾਂਚੇ ਜਾਂ ਉੱਚ GC ਸਮੱਗਰੀ ਵਾਲੇ ਟੈਂਪਲੇਟਾਂ ਲਈ, ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਤਾਪਮਾਨ ਨੂੰ 50-55°C ਤੱਕ ਵਧਾਉਣ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।
3) ਸੀ.ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟਸ ਨੂੰ ਅਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਕਰਨ ਲਈ 5 ਮਿੰਟ ਲਈ 85°C 'ਤੇ ਗਰਮ ਕਰੋ।
4) ਉਤਪਾਦ ਨੂੰ ਸਿੱਧੇ PCR ਜਾਂ qPCR ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਵਿੱਚ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜਾਂ ਥੋੜ੍ਹੇ ਸਮੇਂ ਲਈ ਸਟੋਰੇਜ ਲਈ -20°C 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਦੀ ਸਟੋਰੇਜ ਲਈ ਉਤਪਾਦਾਂ ਨੂੰ ਅਲੀਗੂਟ ਕਰਨ ਅਤੇ -80 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕਰਨ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਵਾਰ-ਵਾਰ ਫ੍ਰੀਜ਼-ਪੰਘਣ ਤੋਂ ਬਚੋ।
5) ਉਤਪਾਦ ਇੱਕ-ਕਦਮ RT-qPCR ਲਈ ਢੁਕਵਾਂ ਹੈ, ਹਰ 25μL ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਲਈ 10-20 U ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟੇਜ ਜੋੜਨ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਜਾਂ ਅਸਲ ਸਥਿਤੀ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਹੌਲੀ-ਹੌਲੀ ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟੇਜ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਵਧਾਉਣ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।
ਨੋਟਸ
1.ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਖੇਤਰ ਨੂੰ ਸਾਫ਼ ਰੱਖੋ;ਅਪਰੇਸ਼ਨ ਦੌਰਾਨ ਸਾਫ਼ ਦਸਤਾਨੇ ਅਤੇ ਮਾਸਕ ਪਹਿਨਣੇ ਚਾਹੀਦੇ ਹਨ।RNase ਗੰਦਗੀ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ ਪ੍ਰਯੋਗ ਵਿੱਚ ਵਰਤੇ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਸਾਰੇ ਖਪਤਕਾਰ RNase ਮੁਕਤ ਹੋਣੇ ਚਾਹੀਦੇ ਹਨ।
2. ਸਾਰੀਆਂ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆਵਾਂ ਆਰਐਨਏ ਡਿਗਰੇਡੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ ਬਰਫ਼ 'ਤੇ ਕੀਤੀਆਂ ਜਾਣੀਆਂ ਚਾਹੀਦੀਆਂ ਹਨ।
3. ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਦੀ ਉੱਚ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਉੱਚ ਗੁਣਵੱਤਾ ਵਾਲੇ ਆਰਐਨਏ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।
4. ਇਹ ਉਤਪਾਦ ਸਿਰਫ ਖੋਜ ਵਰਤੋਂ ਲਈ ਹੈ।
5. ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਆਪਣੀ ਸੁਰੱਖਿਆ ਲਈ, ਲੈਬ ਕੋਟ ਅਤੇ ਡਿਸਪੋਸੇਬਲ ਦਸਤਾਨੇ ਨਾਲ ਕੰਮ ਕਰੋ।
