ਤਾਪਮਾਨ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ UNG
ਤਾਪਮਾਨ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ UNG (TS-UNG) ਈ. ਕੋਲੀ ਵਿੱਚ ਮੁੜ ਸੰਜੋਗ ਸਮੀਕਰਨ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ।ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਯੂਰੇਸਿਲ-ਯੁਕਤ ਸਿੰਗਲ- ਅਤੇ ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਡੀਐਨਏ ਤੋਂ ਮੁਕਤ ਯੂਰੇਸਿਲ ਦੀ ਰਿਹਾਈ ਨੂੰ ਉਤਪ੍ਰੇਰਕ ਕਰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਆਰਐਨਏ ਦੇ ਵਿਰੁੱਧ ਨਿਸ਼ਕਿਰਿਆ ਹੈ।ਈ. ਕੋਲੀ ਜੀਨ ਮੂਲ ਦੇ ਪਰੰਪਰਾਗਤ UNG ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ, TS-UNG ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਘੱਟ ਤਾਪਮਾਨ (20℃~37℃) ਵਿੱਚ ਵੱਧ ਗਤੀਵਿਧੀ ਹੁੰਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਇਹ ਤਾਪਮਾਨ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਅਤੇ ਆਸਾਨੀ ਨਾਲ ਅਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ (50℃) ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ dUTP- ਰੱਖਣ ਵਾਲੇ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਦੇ ਪਤਨ ਤੋਂ ਬਚਦਾ ਹੈ। ਬਕਾਇਆ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦੁਆਰਾ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਉਤਪਾਦ ਜੋ ਰਵਾਇਤੀ UNG ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਦੇ ਅਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਹੋਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਰਹਿ ਸਕਦੇ ਹਨ।ਇਸ ਲਈ, TS-UNG ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਨਾ ਸਿਰਫ਼ ਪੀਸੀਆਰ ਗੰਦਗੀ ਰੋਕਥਾਮ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਲਈ ਢੁਕਵਾਂ ਹੈ, ਸਗੋਂ ਇਹ RT-PCR ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮ ਨਾਲ ਵੀ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮੇਲ ਖਾਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ RT-PCR ਸੰਕਰਮਣ ਰੋਕਥਾਮ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਵਿੱਚ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਸਿਫ਼ਾਰਿਸ਼ ਕੀਤੀ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨ
ਗੰਦਗੀ ਦੀ ਰੋਕਥਾਮ ਐਮਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ
ਸਟੋਰੇਜ ਦੀ ਸਥਿਤੀ
-20 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਲਈ ਸਟੋਰੇਜ ਲਈ, ਵਰਤੋਂ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮਿਲਾਇਆ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ, ਵਾਰ-ਵਾਰ ਜੰਮਣ ਤੋਂ ਪਰਹੇਜ਼ ਕਰੋ।
ਸਟੋਰੇਜ ਬਫਰ
20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, ਸਟੈਬੀਲਾਈਜ਼ਰ, 50% ਗਲਾਈਸਰੋਲ।
ਯੂਨਿਟ ਪਰਿਭਾਸ਼ਾ
37°C 'ਤੇ 1 ਘੰਟੇ ਵਿੱਚ dU ਬੇਸਾਂ ਵਾਲੇ 1µg ਸਿੰਗਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਡੀਗਰੇਡ ਕਰਨ ਲਈ ਲੋੜੀਂਦੇ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਮਾਤਰਾ 1 ਕਿਰਿਆ ਦੀ ਇਕਾਈ (U) ਹੈ।
ਗੁਣਵੱਤਾ ਕੰਟਰੋਲ
1.SDS-PAGE ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਟਿਕ ਸ਼ੁੱਧਤਾ 98% ਤੋਂ ਵੱਧ
2.ਡਿਗਰੇਡੇਸ਼ਨ ਗਤੀਵਿਧੀ, ਬੈਚ-ਟੂ-ਬੈਚ ਨਿਯੰਤਰਣ, ਸਥਿਰਤਾ
3.ਕੋਈ ਐਕਸੋਜੇਨਸ ਨਿਊਕਲੀਜ਼ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨਹੀਂ, ਕੋਈ ਐਕਸੋਜੇਨਸ ਐਂਡੋਨਿਊਕਲੀਜ਼ ਜਾਂ ਐਕਸੋਨਿਊਕਲੀਜ਼ ਗੰਦਗੀ ਨਹੀਂ।
ਹਦਾਇਤਾਂ
| ਕੰਪੋਨੈਂਟਸ | ਵਾਲੀਅਮ (μL) | ਅੰਤਮ ਇਕਾਗਰਤਾ |
| 10 × PCR ਬਫਰ (dNTP ਮੁਫ਼ਤ, Mg²+ਮੁਫ਼ਤ) | 5 | 1× |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (dTTP ਬਦਲੋ) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 ਮਿ.ਮੀ |
| 5 U/μL ਟਾਕ | 0.25 | 1.25 ਯੂ |
| 1 U/μLTS-UNG | 0.5 (0.1-0.5) | 0.5 U (0.1-0.5U) |
| 25 × ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਮਿਕਸa | 2 | 1× |
| ਟੈਂਪਲੇਟ | - | 1μg/ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ |
| ddH₂O | ਨੂੰ 50 | - |
ਨੋਟ: a: ਜੇਕਰ qPCR/qRT-PCR ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਪੜਤਾਲ ਨੂੰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਵਿੱਚ ਜੋੜਿਆ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ, 0.2 μM ਦੀ ਇੱਕ ਅੰਤਮ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਚੰਗੇ ਨਤੀਜੇ ਦੇ ਸਕਦੀ ਹੈ;ਜਦੋਂ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਦੀ ਕਾਰਗੁਜ਼ਾਰੀ ਮਾੜੀ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਨੂੰ 0.2-1 μM ਦੀ ਰੇਂਜ ਵਿੱਚ ਐਡਜਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ, ਪੜਤਾਲ ਦੀ ਇਕਾਗਰਤਾ 0.1-0.3 μM ਦੀ ਰੇਂਜ ਵਿੱਚ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਅਤੇ ਪੜਤਾਲ ਦੇ ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਸੁਮੇਲ ਨੂੰ ਲੱਭਣ ਲਈ ਇਕਾਗਰਤਾ ਗਰੇਡੀਐਂਟ ਪ੍ਰਯੋਗ ਕੀਤੇ ਜਾ ਸਕਦੇ ਹਨ।
ਨੋਟਸ
1.TS-UNG ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਦਾ ਅਨੁਕੂਲ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦਾ ਤਾਪਮਾਨ ਮੁਕਾਬਲਤਨ ਘੱਟ ਹੈ, ਅਤੇ ਇਸਨੂੰ 20℃~37℃ ਦੀ ਰੇਂਜ ਵਿੱਚ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਖੁਰਾਕ ਅਤੇ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਸਮਾਂ 0.1~0.5U, 5~ ਦੀ ਰੇਂਜ ਵਿੱਚ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। 10 ਮਿੰਟ;ਅਤੇ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਨੂੰ ਉਲਟਾ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਦੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਵਿੱਚ ਅਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
2.ਇਹ ਗੰਦਗੀ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ ਪੀਸੀਆਰ ਅਤੇ ਆਰਟੀ-ਪੀਸੀਆਰ ਲਈ ਢੁਕਵਾਂ ਹੈ।
3.ਵਾਰ-ਵਾਰ ਫ੍ਰੀਜ਼-ਪੰਘਣ ਤੋਂ ਬਚੋ, ਅਤੇ ਤਾਪਮਾਨ ਦੇ ਵੱਡੇ ਉਤਰਾਅ-ਚੜ੍ਹਾਅ ਦਾ ਸਾਹਮਣਾ ਨਾ ਕਰੋ।
4.ਵਿਸਤ੍ਰਿਤ ਕੀਤੇ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਜੀਨਾਂ ਵਿੱਚ dUTP ਦੀ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਉਪਯੋਗਤਾ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਅਤੇ UNG ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਪ੍ਰਤੀ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਇਸਲਈ, ਜੇਕਰ UNG ਸਿਸਟਮ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਨਾਲ ਖੋਜ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਵਿੱਚ ਕਮੀ ਆਉਂਦੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਨੂੰ ਐਡਜਸਟ ਅਤੇ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ, ਜੇਕਰ ਤੁਹਾਨੂੰ ਤਕਨੀਕੀ ਸਹਾਇਤਾ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ, ਤਾਂ ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਸੰਪਰਕ ਕਰੋ ਸਾਡੀ ਕੰਪਨੀ.
