ਯੂਰੇਸਿਲ ਡੀਐਨਏ ਗਲਾਈਕੋਸਾਈਲੇਜ਼
Uracil-DNA Glycosylase (UNG ਜਾਂ UDG) 25 kDa ਦੇ ਅਣੂ ਭਾਰ ਦੇ ਨਾਲ E.coli ਦਾ ਇੱਕ ਰੀਕੌਂਬੀਨੈਂਟ ਕਲੋਨ ਹੈ।ਇਹ ਯੂਰੇਸਿਲ-ਯੁਕਤ ਸਿੰਗਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਅਤੇ ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਡੀਐਨਏ ਤੋਂ ਮੁਕਤ ਯੂਰੇਸਿਲ ਦੀ ਰਿਹਾਈ ਨੂੰ ਉਤਪ੍ਰੇਰਕ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਆਰਐਨਏ ਦੇ ਵਿਰੁੱਧ ਨਿਸ਼ਕਿਰਿਆ ਹੈ, ਅਤੇ ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਉਤਪਾਦਾਂ ਦੇ ਗੰਦਗੀ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਕਿਰਿਆ ਦਾ ਸਿਧਾਂਤ ਇਸ ਤੱਥ 'ਤੇ ਅਧਾਰਤ ਹੈ ਕਿ ਜੇ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਵਿੱਚ ਡੀਯੂਟੀਪੀ ਨੂੰ ਡੀਟੀਟੀਪੀ ਲਈ ਬਦਲਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਡੀਯੂ ਅਧਾਰਾਂ ਵਾਲਾ ਇੱਕ ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਉਤਪਾਦ ਬਣਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਚੁਣੇ ਹੋਏ ਯੂ ਬੇਸਾਂ ਦੇ ਗਲਾਈਕੋਸੀਡਿਕ ਬਾਂਡ ਨੂੰ ਸਿੰਗਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਅਤੇ ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਵਿੱਚ ਤੋੜ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਡੀਐਨਏ ਅਤੇ ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਉਤਪਾਦ ਨੂੰ ਘਟਾਉਂਦੇ ਹਨ।
ਸਿਫ਼ਾਰਿਸ਼ ਕੀਤੀ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨ
ਗੰਦਗੀ ਦੀ ਰੋਕਥਾਮ ਐਮਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ
ਸਟੋਰੇਜ ਦੀ ਸਥਿਤੀ
-20 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਲਈ ਸਟੋਰੇਜ ਲਈ, ਵਰਤੋਂ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮਿਲਾਇਆ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ, ਵਾਰ-ਵਾਰ ਜੰਮਣ ਤੋਂ ਪਰਹੇਜ਼ ਕਰੋ।
ਸਟੋਰੇਜ ਬਫਰ
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, ਸਟੈਬੀਲਾਈਜ਼ਰ, 50% ਗਲਾਈਸਰੋਲ।
ਯੂਨਿਟ ਪਰਿਭਾਸ਼ਾ
37°C 'ਤੇ 1 ਘੰਟੇ ਵਿੱਚ dU ਬੇਸਾਂ ਵਾਲੇ 1µg ਸਿੰਗਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ DNA ਨੂੰ ਡੀਗਰੇਡ ਕਰਨ ਲਈ ਲੋੜੀਂਦੇ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਮਾਤਰਾ 1 ਯੂਨਿਟ ਹੈ।
ਗੁਣਵੱਤਾ ਕੰਟਰੋਲ
1.SDS-PAGE ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਟਿਕ ਸ਼ੁੱਧਤਾ 98% ਤੋਂ ਵੱਧ
2.ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ, ਬੈਚ-ਟੂ-ਬੈਚ ਕੰਟਰੋਲ, ਸਥਿਰਤਾ
3.UNG ਦੇ 1U ਨੂੰ 2 ਮਿੰਟ ਲਈ 50℃ 'ਤੇ ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਜਾਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, 103 ਤੋਂ ਘੱਟ ਕਾਪੀਆਂ ਵਾਲੇ ਟੈਪਲੇਟ ਨੂੰ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਘਟਾਇਆ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਕੋਈ ਵੀ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਉਤਪਾਦ ਤਿਆਰ ਨਹੀਂ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
4.ਕੋਈ ਬਾਹਰੀ ਨਿਊਕਲੀਜ਼ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨਹੀਂ
ਹਦਾਇਤਾਂ
| ਕੰਪੋਨੈਂਟਸ | ਵਾਲੀਅਮ (μL) | ਅੰਤਮ ਇਕਾਗਰਤਾ |
| 10 × PCR ਬਫਰ (dNTP ਮੁਫ਼ਤ, Mg²+ਮੁਫ਼ਤ) | 5 | 1× |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (dTTP ਬਦਲੋ) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 ਮਿ.ਮੀ |
| 5 U/μL ਟਾਕ | 0.25 | 1.25 ਯੂ |
| 5 U/μL UNG | 0.25 (0.1-0.5) | 0.25 ਯੂ (0.1-0.5) |
| 25 × ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਮਿਕਸa | 2 | 1× |
| ਟੈਂਪਲੇਟ | - | 1μg/ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ |
| ddH₂O | ਨੂੰ 50 | - |
ਨੋਟ: a: ਜੇਕਰ qPCR/qRT-PCR ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਪੜਤਾਲ ਨੂੰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਵਿੱਚ ਜੋੜਿਆ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ, 0.2 μM ਦੀ ਇੱਕ ਅੰਤਮ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਚੰਗੇ ਨਤੀਜੇ ਦੇ ਸਕਦੀ ਹੈ;ਜਦੋਂ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਦੀ ਕਾਰਗੁਜ਼ਾਰੀ ਮਾੜੀ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਨੂੰ 0.2-1 μM ਦੀ ਰੇਂਜ ਵਿੱਚ ਐਡਜਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ, ਪੜਤਾਲ ਦੀ ਇਕਾਗਰਤਾ 0.1-0.3 μM ਦੀ ਰੇਂਜ ਵਿੱਚ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਅਤੇ ਪੜਤਾਲ ਦੇ ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਸੁਮੇਲ ਨੂੰ ਲੱਭਣ ਲਈ ਇਕਾਗਰਤਾ ਗਰੇਡੀਐਂਟ ਪ੍ਰਯੋਗ ਕੀਤੇ ਜਾ ਸਕਦੇ ਹਨ।
ਨੋਟਸ
1.UNG ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਤੋਂ ਦੂਸ਼ਿਤ dUTP ਐਂਪਲੀਫੀਕੇਸ਼ਨ ਉਤਪਾਦਾਂ ਨੂੰ ਹਟਾਉਣ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ, ਫਿਰ ਉਤਪਾਦ ਗੰਦਗੀ ਦੇ ਕਾਰਨ ਗਲਤ-ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਨਤੀਜਿਆਂ ਤੋਂ ਬਚਣ ਲਈ।
2.ਐਂਟੀ-ਕੰਟੈਮੀਨੇਸ਼ਨ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਵਿੱਚ ਵਰਤੇ ਜਾਣ ਵਾਲੇ UNG ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਲਈ ਅਨੁਕੂਲ ਤਾਪਮਾਨ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 2 ਮਿੰਟ ਲਈ 50℃ ਹੁੰਦਾ ਹੈ;ਅਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲਤਾ ਦੀ ਸਥਿਤੀ 5 ਮਿੰਟ ਲਈ 95℃ ਹੈ।
3.ਵਾਰ-ਵਾਰ ਫ੍ਰੀਜ਼-ਪੰਘਣ ਤੋਂ ਬਚੋ, ਅਤੇ ਤਾਪਮਾਨ ਦੇ ਵੱਡੇ ਉਤਰਾਅ-ਚੜ੍ਹਾਅ ਦਾ ਸਾਹਮਣਾ ਨਾ ਕਰੋ।
4.ਵਿਸਤ੍ਰਿਤ ਕੀਤੇ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਜੀਨਾਂ ਵਿੱਚ dUTP ਦੀ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਉਪਯੋਗਤਾ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਅਤੇ UNG ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਪ੍ਰਤੀ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਇਸਲਈ, ਜੇਕਰ UNG ਸਿਸਟਮ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਨਾਲ ਖੋਜ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਵਿੱਚ ਕਮੀ ਆਉਂਦੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਨੂੰ ਐਡਜਸਟ ਅਤੇ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ, ਜੇਕਰ ਤੁਹਾਨੂੰ ਤਕਨੀਕੀ ਸਹਾਇਤਾ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ, ਤਾਂ ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਸੰਪਰਕ ਕਰੋ ਸਾਡੀ ਕੰਪਨੀ.
