ਗਰਮ ਸ਼ੁਰੂਆਤ Bst 2.0 DNA ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ (ਗਲਾਈਸਰੋਲ ਮੁਕਤ)
Bst DNA ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ V2 ਬੇਸਿਲਸ ਸਟੀਰੋਥਰਮੋਫਿਲਸ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ I ਤੋਂ ਲਿਆ ਗਿਆ ਹੈ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ 5′→3′ DNA ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਗਤੀਵਿਧੀ ਅਤੇ ਮਜ਼ਬੂਤ ਚੇਨ ਰਿਪਲੇਸਮੈਂਟ ਗਤੀਵਿਧੀ ਹੈ, ਪਰ ਕੋਈ 5′→3′ ਐਕਸੋਨੁਕਲੀਜ਼ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨਹੀਂ ਹੈ।Bst DNA ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ V2 ਸਟ੍ਰੈਂਡ-ਡਿਸਪਲੇਸਮੈਂਟ, ਆਈਸੋਥਰਮਲ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ LAMP (ਲੂਪ ਮੈਡੀਏਟਿਡ ਆਈਸੋਥਰਮਲ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ) ਅਤੇ ਤੇਜ਼ ਕ੍ਰਮ ਲਈ ਆਦਰਸ਼ ਤੌਰ 'ਤੇ ਢੁਕਵਾਂ ਹੈ।Bst DNA ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ V2 ਇੱਕ ਹੌਟ-ਸਟਾਰਟ ਸੰਸਕਰਣ ਹੈ ਜੋ Bst DNA ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ V2 (HC5005A) 'ਤੇ ਅਧਾਰਤ ਹੈ ਜੋ ਰਿਵਰਸੀਬਲ ਸੋਧ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ, ਜੋ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਰੋਕ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਇਸਲਈ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਨੂੰ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਸੰਚਾਲਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। -ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਵਾਧਾ ਅਤੇ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਵਿੱਚ ਸੁਧਾਰ, ਅਤੇ ਇਸ ਸੰਸਕਰਣ ਨੂੰ ਲਾਇਓਫਿਲਾਈਜ਼ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਇਸਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਉੱਚ ਤਾਪਮਾਨਾਂ 'ਤੇ ਜਾਰੀ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਇਸਲਈ ਵੱਖਰੇ ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਸਟੈਪ ਦੀ ਕੋਈ ਲੋੜ ਨਹੀਂ ਹੈ।
ਕੰਪੋਨੈਂਟਸ
| ਕੰਪੋਨੈਂਟ | HC5006A-01 | HC5006A-02 | HC5006A-03 |
Bst DNA ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ V2 (ਗਲਾਈਸਰੋਲ-ਮੁਕਤ)(8U/μL) | 0.2 ਮਿ.ਲੀ | 1 ਮਿ.ਲੀ | 10 ਮਿ.ਲੀ |
| 10×HC Bst V2 ਬਫਰ | 1.5 ਮਿ.ਲੀ | 2×1.5 ਮਿ.ਲੀ | 3×10 ਮਿ.ਲੀ |
| MgSO4(100 ਮਿਲੀਮੀਟਰ) | 1.5 ਮਿ.ਲੀ | 2×1.5 ਮਿ.ਲੀ | 2×10 ਮਿ.ਲੀ |
ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨਾਂ
1.LAMP ਆਈਸੋਥਰਮਲ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ
2.ਡੀਐਨਏ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਸਿੰਗਲ ਡਿਸਪਲੇਸਮੈਂਟ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ
3.ਉੱਚ GC ਜੀਨ ਕ੍ਰਮ
4.ਨੈਨੋਗ੍ਰਾਮ ਪੱਧਰ ਦਾ ਡੀਐਨਏ ਕ੍ਰਮ।
ਸਟੋਰੇਜ ਦੀ ਸਥਿਤੀ
0°C ਦੇ ਹੇਠਾਂ ਆਵਾਜਾਈ ਅਤੇ -25°C~-15°C 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾਵੇ।
ਯੂਨਿਟ ਪਰਿਭਾਸ਼ਾ
ਇੱਕ ਯੂਨਿਟ ਨੂੰ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਵਜੋਂ ਪਰਿਭਾਸ਼ਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਜੋ 65°C 'ਤੇ 30 ਮਿੰਟਾਂ ਵਿੱਚ ਐਸਿਡ ਅਘੁਲਣਸ਼ੀਲ ਪਦਾਰਥ ਵਿੱਚ 25 nmol dNTP ਨੂੰ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰਦਾ ਹੈ।
ਗੁਣਵੱਤਾ ਕੰਟਰੋਲ
1.ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਪਰਖ (SDS-PAGE):Bst DNA ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ V2 ਦੀ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ≥99% ਕੂਮੈਸੀ ਬਲੂ ਖੋਜ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ SDS-PAGE ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੁਆਰਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।
2.Endonucleaseਸਰਗਰਮੀ:37 ℃ 'ਤੇ 16 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ 1 μg λDNA ਦੇ ਨਾਲ ਘੱਟੋ-ਘੱਟ 8 U Bst DNA ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ V2 ਵਾਲੀ 50 μL ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੇ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਹੋਣ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੇ ਅਨੁਸਾਰ ਕੋਈ ਖੋਜਣਯੋਗ ਗਿਰਾਵਟ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦੀ।
3.Exonuclease ਗਤੀਵਿਧੀ:1 μg λ -ਹਿੰਦ Ⅲ ਡਾਇਜੈਸਟ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ 37 ℃ 'ਤੇ 16 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ Bst DNA ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ V2 ਦਾ ਘੱਟੋ-ਘੱਟ 8 U ਰੱਖਣ ਵਾਲੀ 50 μL ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੇ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਹੋਣ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੇ ਅਨੁਸਾਰ ਕੋਈ ਖੋਜਣਯੋਗ ਗਿਰਾਵਟ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।
4.ਨਿੱਕੇਸ ਗਤੀਵਿਧੀ:37°C 'ਤੇ 16 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ 1 μg pBR322 DNA ਦੇ ਨਾਲ ਘੱਟੋ-ਘੱਟ 8 U Bst DNA ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ V2 ਵਾਲੀ 50 μL ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੇ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਹੋਣ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੇ ਅਨੁਸਾਰ ਕੋਈ ਖੋਜਣਯੋਗ ਗਿਰਾਵਟ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦੀ।
5.RNase ਗਤੀਵਿਧੀ:37°C 'ਤੇ 16 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ 1.6 μg MS2 RNA ਦੇ ਨਾਲ ਘੱਟੋ-ਘੱਟ 8 U Bst DNA ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ V2 ਵਾਲੀ 50 μL ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੇ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਹੋਣ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੇ ਅਨੁਸਾਰ ਕੋਈ ਖੋਜਣਯੋਗ ਗਿਰਾਵਟ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦੀ।
6.ਈ. ਕੋਲੀDNA:Bst DNA ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ V2 ਦੇ 120 U ਨੂੰ E. ਕੋਲੀ 16S rRNA ਲੋਕਸ ਲਈ ਖਾਸ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੇ ਨਾਲ TaqMan qPCR ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ E. ਕੋਲੀ ਜੀਨੋਮਿਕ DNA ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਲਈ ਸਕ੍ਰੀਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ।ਈ. ਕੋਲੀ ਜੀਨੋਮਿਕ ਡੀਐਨਏ ਗੰਦਗੀ ≤1 ਕਾਪੀ ਹੈ।
LAMP ਪ੍ਰਤੀਕਰਮ
| ਕੰਪੋਨੈਂਟਸ | 25μL |
| 10×HC Bst V2 ਬਫਰ | 2.5 μL |
| MgSO4 (100 ਮਿਲੀਮੀਟਰ) | 1.5 μL |
| dNTPs (ਹਰੇਕ 10mm) | 3.5 μL |
| SYTO™ 16 ਹਰਾ (25×)a | 1.0 μL |
| ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਮਿਸ਼ਰਣb | 6 μL |
| Bst DNA ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ V2 (ਗਲਾਈਸਰੋਲ-ਮੁਕਤ) (8 U/uL) | 1 μL |
| ਟੈਂਪਲੇਟ | × μL |
| ddH₂O | 25 μL ਤੱਕ |
ਨੋਟ:
1) ਏ.SYTOTM 16 ਗ੍ਰੀਨ (25×): ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਲੋੜਾਂ ਅਨੁਸਾਰ, ਹੋਰ ਰੰਗਾਂ ਨੂੰ ਬਦਲ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ;
2) ਬੀ.ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਮਿਕਸ: 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2.5 µ M F3, 2.5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB ਅਤੇ ਹੋਰ ਖੰਡਾਂ ਨੂੰ ਮਿਲਾ ਕੇ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ।
ਪ੍ਰਤੀਕਰਮ ਅਤੇ ਸਥਿਤੀ
1 × HC Bst V2 ਬਫਰ, ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਤਾਪਮਾਨ 60°C ਅਤੇ 65°C ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।
ਹੀਟ ਇਨਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ
80°C, 20 ਮਿੰਟ
