CHO HCP ਏਲੀਸਾ ਕਿੱਟ
ਇਸ ਪਰਖ ਵਿੱਚ ਇੱਕ-ਕਦਮ ਇਮਯੂਨੋਸੋਰਬੈਂਟ ELISA ਵਿਧੀ ਵਰਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।CHOK1 HCP ਵਾਲੇ ਨਮੂਨੇ ਇੱਕੋ ਸਮੇਂ HRP-ਲੇਬਲ ਵਾਲੀ ਬੱਕਰੀ ਐਂਟੀ-CHOK1 ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਅਤੇ ਏਲੀਸਾ ਪਲੇਟ ਉੱਤੇ ਕੋਟ ਕੀਤੇ ਐਂਟੀ-CHOK1 ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਨਾਲ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਅੰਤ ਵਿੱਚ ਠੋਸ-ਪੜਾਅ ਐਂਟੀਬਾਡੀ-HCP-ਲੇਬਲ ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਦਾ ਇੱਕ ਸੈਂਡਵਿਚ ਕੰਪਲੈਕਸ ਬਣਾਉਂਦੇ ਹਨ।ਅਣਬਾਊਂਡ ਐਂਟੀਜੇਨ-ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਨੂੰ ELISA ਪਲੇਟ ਧੋ ਕੇ ਹਟਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਟੀਐਮਬੀ ਸਬਸਟਰੇਟ ਨੂੰ ਕਾਫ਼ੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਲਈ ਖੂਹ ਵਿੱਚ ਜੋੜਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਸਟੌਪ ਘੋਲ ਨੂੰ ਜੋੜਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਰੰਗ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਨੂੰ ਰੋਕ ਦਿੱਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ 450/650nm 'ਤੇ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਘੋਲ ਦੇ OD ਜਾਂ ਸੋਖਣ ਮੁੱਲ ਨੂੰ ਮਾਈਕ੍ਰੋਪਲੇਟ ਰੀਡਰ ਨਾਲ ਪੜ੍ਹਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।OD ਮੁੱਲ ਜਾਂ ਸੋਖਣ ਮੁੱਲ ਘੋਲ ਵਿੱਚ HCP ਸਮੱਗਰੀ ਦੇ ਅਨੁਪਾਤੀ ਹੈ।ਇਸ ਤੋਂ, ਘੋਲ ਵਿੱਚ HCP ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਨੂੰ ਮਿਆਰੀ ਕਰਵ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਗਿਣਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨ
ਇਸ ਕਿੱਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਨਮੂਨਿਆਂ ਵਿੱਚ CHOK1 ਹੋਸਟ ਸੈੱਲ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੀ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ ਦੀ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਖੋਜ ਕਰਨ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।
Cਓਪੋਨੈਂਟਸ
| S/N | ਕੰਪੋਨੈਂਟ | ਧਿਆਨ ਟਿਕਾਉਣਾ | ਸਟੋਰੇਜ ਦੀਆਂ ਸ਼ਰਤਾਂ |
| 1 | CHOK1 HCP ਸਟੈਂਡਰਡ | 0.5mg/mL | ≤–20℃ |
| 2 | ਐਂਟੀ-CHO HCP-HRP | 0.5mg/mL | ≤–20℃, ਰੋਸ਼ਨੀ ਤੋਂ ਬਚਾਓ |
| 3 | ਟੀ.ਐਮ.ਬੀ | NA | 2-8℃, ਰੋਸ਼ਨੀ ਤੋਂ ਬਚਾਓ |
| 4 | 20 × PBST 0.05% | NA | 2-8℃ |
| 5 | ਹੱਲ ਰੋਕੋ | NA | RT |
| 6 | ਮਾਈਕ੍ਰੋਪਲੇਟ ਸੀਲਰ | NA | RT |
| 7 | ਬੀ.ਐੱਸ.ਏ | NA | 2-8℃ |
| 8 | ਉੱਚ ਸੋਖਣ ਪ੍ਰੀ-ਕੋਟਿੰਗ ਪਲੇਟਾਂ | NA | 2-8℃ |
ਉਪਕਰਨ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ
| ਖਪਤਕਾਰ / ਉਪਕਰਨ | ਉਤਪਾਦਨ | ਕੈਟਾਲਾਗ |
| ਮਾਈਕ੍ਰੋਪਲੇਟ ਰੀਡਰ | ਅਣੂ ਯੰਤਰ | ਸਪੈਕਟਰਾ ਮੈਕਸ M5, M5e, ਜਾਂ ਬਰਾਬਰ |
| ਥਰਮੋਮਿਕਸਰ | ਏਪੇਨਡੋਰਫ | Eppendorf/5355, ਜਾਂ ਬਰਾਬਰ |
| ਵੌਰਟੇਕਸ ਮਿਕਸਰ | ਆਈ.ਕੇ.ਏ | MS3 ਡਿਜੀਟਲ, ਜਾਂ ਬਰਾਬਰ |
ਸਟੋਰੇਜ਼ ਅਤੇ ਸਥਿਰਤਾ
1.-25~-15°C 'ਤੇ ਆਵਾਜਾਈ।
2.ਸਟੋਰੇਜ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ ਸਾਰਣੀ 1 ਵਿੱਚ ਦਰਸਾਏ ਅਨੁਸਾਰ ਹਨ;ਕੰਪੋਨੈਂਟ 1-2 ਸਟੋਰ ਕੀਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ ≤–20°C,5-6 ਸਟੋਰ ਕੀਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ RT,3、4、7、8 ਨੂੰ 2-8℃ ਵਿੱਚ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ;ਵੈਧਤਾ ਦੀ ਮਿਆਦ 12 ਮਹੀਨੇ ਹੈ।
ਉਤਪਾਦ ਪੈਰਾਮੀਟਰ
1.ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ: 1ng/mL
2.ਖੋਜ ਰੇਂਜ: 3- 100ng/mL
3.ਸ਼ੁੱਧਤਾ: ਇੰਟਰਾ-ਅਸੇ CV≤ 10%, ਇੰਟਰ-ਅਸੇ CV≤ 15%
4.HCP ਕਵਰੇਜ: >80%
5.ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ: ਇਹ ਕਿੱਟ ਸਰਵ ਵਿਆਪੀ ਹੈ ਕਿਉਂਕਿ ਇਹ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸ਼ੁੱਧੀਕਰਨ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਤੋਂ ਸੁਤੰਤਰ CHOK1 HCP ਨਾਲ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਕਰਦੀ ਹੈ।
ਰੀਐਜੈਂਟ ਦੀ ਤਿਆਰੀ
1.PBST 0.05%
20×PBST 0.05% ਦਾ 15 ਮਿ.ਲੀ. ਲਓ, ddH ਵਿੱਚ ਪਤਲਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ2ਓ, ਅਤੇ 300 ਮਿ.ਲੀ.
2.1.0% BSA
ਬੋਤਲ ਵਿੱਚੋਂ 1 ਗ੍ਰਾਮ BSA ਲਓ ਅਤੇ PBST 0.05% ਦੇ 100 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਵਿੱਚ ਪਤਲਾ ਕਰੋ, ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਭੰਗ ਹੋਣ ਤੱਕ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮਿਲਾਓ, ਅਤੇ 2-8 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕਰੋ।ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਪਤਲਾ ਬਫਰ 7 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਵੈਧ ਹੈ।ਲੋੜ ਅਨੁਸਾਰ ਤਿਆਰ ਕਰਨ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ.
3.ਖੋਜ ਹੱਲ 2μg/mL
0.5 mg/mL ਐਂਟੀ-CHO HCP-HRP ਦਾ 48μL ਲਓ ਅਤੇ 2μg/mL ਖੋਜ ਹੱਲ ਦੀ ਅੰਤਮ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ 1% BSA ਦੇ 11,952μL ਵਿੱਚ ਪਤਲਾ ਕਰੋ।
4.QC ਅਤੇ CHOK1 HCP ਮਿਆਰਾਂ ਦੀ ਤਿਆਰੀ
| ਟਿਊਬ ਨੰ. | ਮੂਲ | ਧਿਆਨ ਟਿਕਾਉਣਾ | ਵਾਲੀਅਮ | 1% BSA | ਕੁੱਲ ਵਾਲੀਅਮ | ਅੰਤਿਮ |
| A | ਮਿਆਰੀ | 0.5mg/mL | 10 | 490 | 500 | 10,000 |
| B | A | 10,000 | 50 | 450 | 500 | 1,000 |
| S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
ਸਾਰਣੀ: QC ਅਤੇ ਮਿਆਰਾਂ ਦੀ ਤਿਆਰੀ
ਪਰਖ ਦੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ
1.ਉਪਰੋਕਤ "ਰੀਏਜੈਂਟ ਤਿਆਰੀ" ਵਿੱਚ ਦਰਸਾਏ ਅਨੁਸਾਰ ਰੀਐਜੈਂਟ ਤਿਆਰ ਕਰੋ।
2.ਹਰੇਕ ਖੂਹ ਵਿੱਚ 50μL ਸਟੈਂਡਰਡ, ਨਮੂਨੇ ਅਤੇ QC (ਟੇਬਲ 3 ਵੇਖੋ) ਲਓ, ਫਿਰ ਖੋਜ ਹੱਲ (2μg/mL) ਦਾ 100μL ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ;ਪਲੇਟ ਨੂੰ ਸੀਲਰ ਨਾਲ ਢੱਕੋ, ਅਤੇ ELISA ਪਲੇਟ ਨੂੰ ਥਰਮੋਮਿਕਸਰ 'ਤੇ ਰੱਖੋ।500rpm, 25±3℃ 'ਤੇ 2 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕਰੋ।
3.ਸਿੰਕ ਵਿੱਚ ਮਾਈਕ੍ਰੋਪਲੇਟ ਨੂੰ ਉਲਟਾਓ ਅਤੇ ਕੋਟਿੰਗ ਘੋਲ ਨੂੰ ਰੱਦ ਕਰੋ।ELISA ਪਲੇਟ ਨੂੰ ਧੋਣ ਅਤੇ ਘੋਲ ਨੂੰ ਰੱਦ ਕਰਨ ਲਈ ਹਰੇਕ ਖੂਹ ਵਿੱਚ PBST 0.05% ਦਾ 300μL ਪਾਈਪ ਪਾਓ, ਅਤੇ ਧੋਣ ਨੂੰ 3 ਵਾਰ ਦੁਹਰਾਓ।ਪਲੇਟ ਨੂੰ ਇੱਕ ਸਾਫ਼ ਪੇਪਰ ਤੌਲੀਏ 'ਤੇ ਉਲਟਾਓ ਅਤੇ ਸੁਕਾਓ।
4.ਹਰੇਕ ਖੂਹ ਵਿੱਚ TMB ਸਬਸਟਰੇਟ ਦਾ 100μL (ਟੇਬਲ 1 ਦੇਖੋ) ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ, ELISA ਪਲੇਟ ਨੂੰ ਸੀਲ ਕਰੋ, ਅਤੇ ਹਨੇਰੇ ਵਿੱਚ 25±3℃ 'ਤੇ 15 ਮਿੰਟ ਲਈ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕਰੋ।
5.ਹਰੇਕ ਖੂਹ ਵਿੱਚ 100μL ਸਟਾਪ ਘੋਲ ਪਾਓ।
6.ਮਾਈਕ੍ਰੋਪਲੇਟ ਰੀਡਰ ਨਾਲ 450/650nm ਦੀ ਤਰੰਗ-ਲੰਬਾਈ 'ਤੇ ਸਮਾਈ ਨੂੰ ਮਾਪੋ।
7.SoftMax ਜਾਂ ਬਰਾਬਰ ਦੇ ਸੌਫਟਵੇਅਰ ਦੁਆਰਾ ਡੇਟਾ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕਰੋ।ਚਾਰ-ਪੈਰਾਮੀਟਰ ਲੌਜਿਸਟਿਕ ਰਿਗਰੈਸ਼ਨ ਮਾਡਲ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਮਿਆਰੀ ਕਰਵ ਨੂੰ ਪਲਾਟ ਕਰੋ।
ਮਿਆਰੀ ਕਰਵ ਉਦਾਹਰਨ
ਨੋਟ: ਜੇਕਰ ਨਮੂਨੇ ਵਿੱਚ ਐਚਸੀਪੀ ਦੀ ਤਵੱਜੋ ਮਿਆਰੀ ਕਰਵ ਦੀ ਉਪਰਲੀ ਸੀਮਾ ਤੋਂ ਵੱਧ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਜਾਂਚ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਇਸਨੂੰ ਪਤਲੇ ਬਫਰ ਨਾਲ ਸਹੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਪਤਲਾ ਕਰਨ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।
ਨੋਟਸ
ਸਟਾਪ ਹੱਲ 2M ਸਲਫਿਊਰਿਕ ਐਸਿਡ ਹੈ, ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਛਿੜਕਣ ਤੋਂ ਬਚਣ ਲਈ ਧਿਆਨ ਨਾਲ ਸੰਭਾਲੋ!
