ਮਾਊਸ ਜੀਨੋਟਾਈਪਿੰਗ ਕਿੱਟ
ਬਿੱਲੀ ਨੰਬਰ: HCR2021A
ਇਹ ਉਤਪਾਦ ਇੱਕ ਕਿੱਟ ਹੈ ਜੋ ਮਾਊਸ ਜੀਨੋਟਾਈਪਾਂ ਦੀ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਪਛਾਣ ਕਰਨ ਲਈ ਤਿਆਰ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਕਰੂਡ ਐਕਸਟਰੈਕਸ਼ਨ ਅਤੇ ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਸਿਸਟਮ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ।ਉਤਪਾਦ ਨੂੰ ਲਾਈਸਿਸ ਬਫਰ ਅਤੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨੇਜ਼ ਕੇ ਦੁਆਰਾ ਸਧਾਰਨ ਕਲੀਵੇਜ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਮਾਊਸ ਦੀ ਪੂਛ, ਕੰਨ, ਪੈਰਾਂ ਅਤੇ ਹੋਰ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਤੋਂ ਸਿੱਧੇ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਸਾਰਣ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਕੋਈ ਰਾਤੋ-ਰਾਤ ਪਾਚਨ, ਫੀਨੋਲ-ਕਲੋਰੋਫਾਰਮ ਐਕਸਟਰੈਕਸ਼ਨ ਜਾਂ ਕਾਲਮ ਸ਼ੁੱਧੀਕਰਨ ਨਹੀਂ, ਜੋ ਕਿ ਸਧਾਰਨ ਹੈ ਅਤੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਦੇ ਸਮੇਂ ਨੂੰ ਘੱਟ ਕਰਦਾ ਹੈ।ਉਤਪਾਦ 2kb ਤੱਕ ਦੇ ਟੀਚੇ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਅਤੇ 3 ਜੋੜਿਆਂ ਦੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੇ ਨਾਲ ਮਲਟੀਪਲੈਕਸ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਲਈ ਢੁਕਵਾਂ ਹੈ।2×ਮਾਊਸ ਟਿਸ਼ੂ ਡਾਇਰੈਕਟ ਪੀਸੀਆਰ ਮਿਕਸ ਵਿੱਚ ਜੈਨੇਟਿਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਇੰਜਨੀਅਰਡ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼, ਐਮ.ਜੀ.2+, dNTPs ਅਤੇ ਉੱਚ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਅਤੇ ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਸਹਿਣਸ਼ੀਲਤਾ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਬਫਰ ਸਿਸਟਮ, ਤਾਂ ਜੋ PCR ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਨੂੰ ਟੈਂਪਲੇਟ ਅਤੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਜੋੜ ਕੇ ਅਤੇ ਉਤਪਾਦ ਨੂੰ 1× ਤੱਕ ਰੀਹਾਈਡਰੇਟ ਕਰਕੇ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕੇ।ਇਸ ਉਤਪਾਦ ਦੇ ਨਾਲ ਵਧਾਏ ਗਏ ਪੀਸੀਆਰ ਉਤਪਾਦ ਦੇ 3′ ਸਿਰੇ 'ਤੇ ਇੱਕ ਪ੍ਰਮੁੱਖ "A" ਅਧਾਰ ਹੈ ਅਤੇ ਸ਼ੁੱਧੀਕਰਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਟੀਏ ਕਲੋਨਿੰਗ ਲਈ ਸਿੱਧਾ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਕੰਪੋਨੈਂਟਸ
| ਕੰਪੋਨੈਂਟ | ਆਕਾਰ |
| 2×ਮਾਊਸ ਟਿਸ਼ੂ ਡਾਇਰੈਕਟ ਪੀਸੀਆਰ ਮਿਕਸ | 5×1.0mL |
| ਲਾਇਸਿਸ ਬਫਰ | 2×20 ਮਿ.ਲੀ |
| ਪ੍ਰੋਟੀਨੇਸ ਕੇ | 800μL |
ਸਟੋਰੇਜ ਦੀਆਂ ਸ਼ਰਤਾਂ
ਉਤਪਾਦਾਂ ਨੂੰ 2 ਸਾਲਾਂ ਲਈ -25~-15℃ 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।ਪਿਘਲਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਲਾਈਸਿਸ ਬਫਰ ਨੂੰ ਥੋੜ੍ਹੇ ਸਮੇਂ ਲਈ ਮਲਟੀਪਲ ਵਰਤੋਂ ਲਈ 2~8℃ 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮਿਲਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨ
ਇਹ ਉਤਪਾਦ ਮਾਊਸ ਨਾਕਆਊਟ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ, ਟ੍ਰਾਂਸਜੇਨਿਕ ਖੋਜ, ਜੀਨੋਟਾਈਪਿੰਗ ਆਦਿ ਲਈ ਢੁਕਵਾਂ ਹੈ।
ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ
1.ਸਧਾਰਨ ਕਾਰਵਾਈ: ਜੀਨੋਮਿਕ ਡੀਐਨਏ ਕੱਢਣ ਦੀ ਕੋਈ ਲੋੜ ਨਹੀਂ;
2.ਵਾਈਡ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨ: ਵੱਖ ਵੱਖ ਮਾਊਸ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਦੇ ਸਿੱਧੇ ਪ੍ਰਸਾਰ ਲਈ ਢੁਕਵਾਂ।
ਹਦਾਇਤਾਂ
1.ਜੀਨੋਮਿਕ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਰਿਹਾਈ
1) ਲਾਈਸੇਟ ਦੀ ਤਿਆਰੀ
ਟਿਸ਼ੂ ਲਾਈਸੇਟ ਲਾਈਜ਼ ਕੀਤੇ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਮਾਊਸ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ (ਟਿਸ਼ੂ ਲਾਈਸੇਟ ਨੂੰ ਖੁਰਾਕ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਸਾਈਟ 'ਤੇ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਵਰਤੋਂ ਲਈ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮਿਲਾਇਆ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ), ਅਤੇ ਇੱਕ ਨਮੂਨੇ ਲਈ ਲੋੜੀਂਦੇ ਰੀਐਜੈਂਟਸ ਦਾ ਅਨੁਪਾਤ ਹੇਠ ਲਿਖੇ ਅਨੁਸਾਰ ਹੈ:
| ਕੰਪੋਨੈਂਟਸ | ਵਾਲੀਅਮ (μL) |
| ਪ੍ਰੋਟੀਨੇਸ ਕੇ | 4 |
| ਲਾਇਸਿਸ ਬਫਰ | 200 |
2) ਨਮੂਨਾ ਦੀ ਤਿਆਰੀ ਅਤੇ ਲਾਇਸਿਸ
ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ
| ਦੀ ਕਿਸਮਟਿਸ਼ੂ | ਸਿਫ਼ਾਰਸ਼ੀ ਵਾਲੀਅਮ |
| ਮਾਊਸ ਪੂਛ | 1-3 ਮਿਲੀਮੀਟਰ |
| ਮਾਊਸ ਕੰਨ | 2-5 ਮਿਲੀਮੀਟਰ |
| ਮਾਊਸ ਟੋ | 1-2 ਟੁਕੜੇ |
ਸਾਫ਼ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਟਿਊਬਾਂ ਵਿੱਚ ਮਾਊਸ ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਉਚਿਤ ਮਾਤਰਾ ਵਿੱਚ ਲਓ, ਹਰੇਕ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ 200μL ਤਾਜ਼ੇ ਟਿਸ਼ੂ ਲਾਈਸੇਟ ਪਾਓ, ਵੌਰਟੈਕਸ ਅਤੇ ਸ਼ੇਕ ਕਰੋ, ਫਿਰ 30 ਮਿੰਟ ਲਈ 55 ℃ 'ਤੇ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕਰੋ, ਅਤੇ ਫਿਰ 3 ਮਿੰਟ ਲਈ 98 ℃ 'ਤੇ ਗਰਮ ਕਰੋ।
3) ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਗੇਸ਼ਨ
ਲਾਈਸੇਟ ਨੂੰ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਹਿਲਾਓ ਅਤੇ 5 ਮਿੰਟ ਲਈ 12,000 rpm 'ਤੇ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਕਰੋ।ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਨੂੰ ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਲਈ ਨਮੂਨੇ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਜੇਕਰ ਸਟੋਰੇਜ ਲਈ ਟੈਂਪਲੇਟ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ, ਤਾਂ ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਨੂੰ ਕਿਸੇ ਹੋਰ ਨਿਰਜੀਵ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਕਰੋ ਅਤੇ 2 ਹਫ਼ਤਿਆਂ ਲਈ -20℃ 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕਰੋ।
2.ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਸਾਰਣ
2×ਮਾਊਸ ਟਿਸ਼ੂ ਡਾਇਰੈਕਟ ਪੀਸੀਆਰ ਮਿਕਸ ਨੂੰ -20℃ ਤੋਂ ਹਟਾਓ ਅਤੇ ਬਰਫ਼ 'ਤੇ ਪਿਘਲਾਓ, ਉਲਟਾ ਮਿਕਸ ਕਰੋ ਅਤੇ ਹੇਠਾਂ ਦਿੱਤੀ ਸਾਰਣੀ (ਬਰਫ਼ 'ਤੇ ਕੰਮ ਕਰੋ) ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਤਿਆਰ ਕਰੋ:
| ਕੰਪੋਨੈਂਟਸ | 25μLਸਿਸਟਮ | 50μLਸਿਸਟਮ | ਅੰਤਮ ਇਕਾਗਰਤਾ |
| 2×ਮਾਊਸ ਟਿਸ਼ੂ ਡਾਇਰੈਕਟ ਪੀਸੀਆਰ ਮਿਕਸ | 12.5μL | 25μL | 1× |
| ਪ੍ਰਾਈਮਰ 1 (10μM) | 1.0μL | 2.0μL | 0.4μM |
| ਪ੍ਰਾਈਮਰ 2 (10μM) | 1.0μL | 2.0μL | 0.4μM |
| ਕਲੀਵੇਜ ਉਤਪਾਦa | ਲੋੜ ਅਨੁਸਾਰ | ਲੋੜ ਅਨੁਸਾਰ |
|
| ddH2O | 25μL ਤੱਕ | 50μL ਤੱਕ |
|
ਨੋਟ:
a) ਜੋੜੀ ਗਈ ਮਾਤਰਾ ਸਿਸਟਮ ਦੇ 1/10 ਤੋਂ ਵੱਧ ਨਹੀਂ ਹੋਣੀ ਚਾਹੀਦੀ, ਅਤੇ ਜੇਕਰ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਜੋੜਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਸਾਰ ਨੂੰ ਰੋਕਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਸਿਫ਼ਾਰਿਸ਼ ਕੀਤੀਆਂ ਪੀਸੀਆਰ ਸ਼ਰਤਾਂ
| ਸਾਈਕਲ ਕਦਮ | ਟੈਂਪ | ਸਮਾਂ | ਸਾਈਕਲ |
| ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਵਿਕਾਰ | 94℃ | 5 ਮਿੰਟ | 1 |
| ਵਿਕਾਰ | 94℃ | 30 ਸਕਿੰਟ | 35-40 |
| ਐਨੀਲਿੰਗa | Tm+3~5℃ | 30 ਸਕਿੰਟ | |
| ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ | 72℃ | 30 ਸਕਿੰਟ/ਕੇ.ਬੀ | |
| ਅੰਤਮ ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ | 72℃ | 5 ਮਿੰਟ | 1 |
| - | 4℃ | ਫੜੋ | - |
ਨੋਟ:
a) ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ: ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੇ Tm ਮੁੱਲ ਦੇ ਸੰਦਰਭ ਵਿੱਚ, ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਨੂੰ ਪ੍ਰਾਈਮਰ +3~5℃ ਦੇ ਛੋਟੇ Tm ਮੁੱਲ 'ਤੇ ਸੈੱਟ ਕਰਨ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।
ਆਮ ਸਮੱਸਿਆਵਾਂ ਅਤੇ ਹੱਲ
1.ਕੋਈ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਪੱਟੀਆਂ ਨਹੀਂ
1) ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ lysis ਉਤਪਾਦ.ਟੈਂਪਲੇਟ ਦੀ ਸਭ ਤੋਂ ਢੁਕਵੀਂ ਮਾਤਰਾ ਚੁਣੋ, ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸਿਸਟਮ ਦੇ 1/10 ਤੋਂ ਵੱਧ ਨਹੀਂ;
2) ਬਹੁਤ ਵੱਡਾ ਨਮੂਨਾ ਆਕਾਰ.ਲਾਈਸੇਟ ਨੂੰ 10 ਵਾਰ ਪਤਲਾ ਕਰੋ ਅਤੇ ਫਿਰ ਵਧਾਓ, ਜਾਂ ਨਮੂਨੇ ਦੇ ਆਕਾਰ ਨੂੰ ਘਟਾਓ ਅਤੇ ਰੀ-ਲੀਸਿਸ ਕਰੋ;
3) ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਨਮੂਨੇ ਤਾਜ਼ੇ ਨਹੀਂ ਹਨ।ਤਾਜ਼ੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਨਮੂਨੇ ਵਰਤਣ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ;
4) ਮਾੜੀ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਗੁਣਵੱਤਾ।ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੀ ਗੁਣਵੱਤਾ ਦੀ ਤਸਦੀਕ ਕਰਨ ਅਤੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਲਈ ਜੀਨੋਮਿਕ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ।
2.ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਵਾਧਾ
1) ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਹੈ ਅਤੇ ਚੱਕਰ ਨੰਬਰ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਹੈ।ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਨੂੰ ਵਧਾਓ ਅਤੇ ਚੱਕਰਾਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਘਟਾਓ;
2) ਟੈਂਪਲੇਟ ਇਕਾਗਰਤਾ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਹੈ।ਟੈਂਪਲੇਟ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਘਟਾਓ ਜਾਂ ਐਂਪਲੀਫੀਕੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਟੈਂਪਲੇਟ ਨੂੰ 10 ਵਾਰ ਪਤਲਾ ਕਰੋ;
3) ਮਾੜੀ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ।ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾਓ।
ਨੋਟਸ
1.ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਗੰਦਗੀ ਤੋਂ ਬਚਣ ਲਈ, ਕਈ ਨਮੂਨੇ ਲੈਣ ਵਾਲੇ ਟੂਲ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ ਜਾਣੇ ਚਾਹੀਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ ਜੇਕਰ ਵਾਰ-ਵਾਰ ਵਰਤੋਂ ਦੀ ਲੋੜ ਹੋਵੇ ਤਾਂ ਹਰੇਕ ਨਮੂਨੇ ਤੋਂ ਬਾਅਦ 2% ਸੋਡੀਅਮ ਹਾਈਪੋਕਲੋਰਾਈਟ ਘੋਲ ਜਾਂ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਕਲੀਨਰ ਨਾਲ ਟੂਲਾਂ ਦੀ ਸਤਹ ਨੂੰ ਸਾਫ਼ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
2.ਮਾਊਸ ਦੇ ਤਾਜ਼ੇ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨ ਦੀ ਸਿਫ਼ਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਨਹੀਂ ਹੋਣੀ ਚਾਹੀਦੀ ਤਾਂ ਜੋ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਨਤੀਜਿਆਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਨਾ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕੇ।
3.ਲਾਈਸਿਸ ਬਫਰ ਨੂੰ ਵਾਰ-ਵਾਰ ਫ੍ਰੀਜ਼-ਪੰਘਣ ਤੋਂ ਬਚਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਥੋੜ੍ਹੇ ਸਮੇਂ ਲਈ ਮਲਟੀਪਲ ਵਰਤੋਂ ਲਈ 2~8℃ 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਜੇ ਘੱਟ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਵਰਖਾ ਹੋ ਸਕਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਵਰਤੋਂ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਭੰਗ ਹੋ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।
4.ਪੀਸੀਆਰ ਮਿਕਸ ਨੂੰ ਅਕਸਰ ਫ੍ਰੀਜ਼-ਪੰਘਣ ਤੋਂ ਬਚਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਥੋੜ੍ਹੇ ਸਮੇਂ ਲਈ ਵਾਰ-ਵਾਰ ਵਰਤੋਂ ਲਈ 4℃ 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
5.ਇਹ ਉਤਪਾਦ ਕੇਵਲ ਵਿਗਿਆਨਕ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਖੋਜ ਲਈ ਹੈ ਅਤੇ ਇਸਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਲੀਨਿਕਲ ਨਿਦਾਨ ਜਾਂ ਇਲਾਜ ਵਿੱਚ ਨਹੀਂ ਕੀਤੀ ਜਾਣੀ ਚਾਹੀਦੀ।
