DNase I (Rnase Free)(5u/ul)
ਬਿੱਲੀ ਨੰ: HC4007A
DNase I (Deoxyribonuclease I) ਇੱਕ ਐਂਡੋਡੀਓਕਸੀਰੀਬੋਨਿਊਕਲੀਜ਼ ਹੈ ਜੋ ਸਿੰਗਲ- ਜਾਂ ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਹਜ਼ਮ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਇਹ 5'-ਟਰਮੀਨਲ 'ਤੇ ਫਾਸਫੇਟ ਸਮੂਹਾਂ ਅਤੇ 3'-ਟਰਮੀਨਲ 'ਤੇ ਹਾਈਡ੍ਰੋਕਸਿਲ ਦੇ ਨਾਲ ਮੋਨੋਡੌਕਸੀਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡਸ ਜਾਂ ਸਿੰਗਲ- ਜਾਂ ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਓਲੀਗੋਡਿਓਕਸੀਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡਸ ਪੈਦਾ ਕਰਨ ਲਈ ਫਾਸਫੋਡੀਏਸਟਰ ਬਾਂਡਾਂ ਨੂੰ ਪਛਾਣਦਾ ਅਤੇ ਤੋੜਦਾ ਹੈ।DNase I ਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀ Ca 'ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦੀ ਹੈ2+ਅਤੇ ਦਵੰਦ ਧਾਤੂ ਆਇਨਾਂ ਜਿਵੇਂ ਕਿ Mn ਦੁਆਰਾ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ2+ਅਤੇ Zn2+.5 mM Ca2+ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਨੂੰ ਹਾਈਡੋਲਿਸਿਸ ਤੋਂ ਬਚਾਉਂਦਾ ਹੈ।ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਵਿੱਚ ਐਮ.ਜੀ2+, ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਕਿਸੇ ਵੀ ਸਟ੍ਰੈਂਡ 'ਤੇ ਕਿਸੇ ਵੀ ਸਾਈਟ ਨੂੰ ਬੇਤਰਤੀਬੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪਛਾਣ ਅਤੇ ਕੱਟ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਮਾਨ ਦੀ ਹਾਜ਼ਰੀ ਵਿਚ ਸ2+, ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਦੋਹਰੇ ਤਾਰਾਂ ਨੂੰ ਇੱਕੋ ਸਮੇਂ ਪਛਾਣਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ 1-2 ਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡ ਫੈਲਣ ਵਾਲੇ ਫਲੈਟ ਸਿਰੇ ਵਾਲੇ ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜੇ ਜਾਂ ਸਟਿੱਕੀ ਸਿਰੇ ਵਾਲੇ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਲਗਭਗ ਇੱਕੋ ਥਾਂ 'ਤੇ ਕਲੀਵ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਕੰਪੋਨੈਂਟਸ
| ਨਾਮ | 0.1KU | 1KU | 5 ਕੇ.ਯੂ | 50 ਕੇ.ਯੂ |
| DNase I, RNase-ਮੁਕਤ | 20μL | 200μL | 1 ਮਿ.ਲੀ | 10 ਮਿ.ਲੀ |
| 10×DNase I ਬਫਰ | 1 ਮਿ.ਲੀ | 1 ਮਿ.ਲੀ | 5 × 1 ਮਿ.ਲੀ | 5 × 10 ਮਿ.ਲੀ |
ਸਟੋਰੇਜ਼ ਹਾਲਾਤ
-25℃~-15℃ ਸਟੋਰੇਜ਼ ਲਈ;ਆਈਸ ਪੈਕ ਦੇ ਅਧੀਨ ਆਵਾਜਾਈ.
ਹਦਾਇਤਾਂ
1. ਹੇਠਾਂ ਦਿੱਤੇ ਅਨੁਪਾਤ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ RNase-ਮੁਕਤ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਹੱਲ ਤਿਆਰ ਕਰੋ:
| ਕੰਪੋਨੈਂਟ | ਵਾਲੀਅਮ |
| ਆਰ.ਐਨ.ਏ | X µg |
| 10 × DNase I ਬਫਰ | 1μL |
| DNase I, RNase-ਮੁਕਤ (5U/μL) | 1 U ਪ੍ਰਤੀ µg RNA① |
| ddH2O | 10μL ਤੱਕ |
ਨੋਟ: ① DNase I ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰੋ ਜਿਸਨੂੰ RNA ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ ਜੋੜਨ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ।
2. 15 ਮਿੰਟ ਲਈ 37 ℃;
3. 2.5mM~5mM ਦੀ ਅੰਤਮ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਵਿੱਚ 0.5M EDTA ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ, ਅਤੇ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ 10 ਮਿੰਟ ਲਈ 65℃ 'ਤੇ ਗਰਮ ਕਰੋ।ਨਮੂਨੇ ਨੂੰ ਸਿੱਧੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਅਗਲੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨਪ੍ਰਯੋਗ
ਯੂਨਿਟ ਪਰਿਭਾਸ਼ਾ
ਇੱਕ ਯੂਨਿਟ ਨੂੰ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਵਜੋਂ ਪਰਿਭਾਸ਼ਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ ਜੋ pBR322 ਦੇ 1µg ਨੂੰ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਘਟਾ ਦੇਵੇਗਾ।37 ℃ 'ਤੇ 10 ਮਿੰਟਾਂ ਵਿੱਚ ਡੀ.ਐਨ.ਏ.
ਗੁਣਵੱਤਾ ਕੰਟਰੋਲ
RNase:DNase I ਦਾ 5U 1.6µg MS2 RNA ਦੇ ਨਾਲ 37℃ 'ਤੇ 4 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ ਕੋਈ ਗਿਰਾਵਟ ਨਹੀਂ ਪੈਦਾ ਕਰਦਾਐਗਰੋਜ਼ ਜੈੱਲ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰਸਿਸ ਦੁਆਰਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ.
ਨੋਟਸ
1. ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਆਪਣੇ ਆਪ 0.5MEDTA ਤਿਆਰ ਕਰੋ।
2. RNA ਦੇ ਪ੍ਰਤੀ µg 1U DNase I ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਜੇਕਰ RNA 1µg ਤੋਂ ਘੱਟ ਹੈ, ਤਾਂ ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ 1U DNase I ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ।
3. ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਓਪਰੇਸ਼ਨ ਦੌਰਾਨ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਨੂੰ ਬਰਫ਼ 'ਤੇ ਰੱਖੋ।
