ਡੀਐਨਏ ਐਕਸਟਰੈਕਸ਼ਨ ਮਿੰਨੀ ਕਿੱਟ
ਇਹ ਕਿੱਟ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਬਫਰ ਸਿਸਟਮ ਅਤੇ ਸਿਲਿਕਾ ਜੈੱਲ ਕਾਲਮ ਸ਼ੁੱਧੀਕਰਨ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਨੂੰ ਅਪਣਾਉਂਦੀ ਹੈ, ਜੋ TAE ਜਾਂ TBE ਐਗਰੋਸ ਜੈੱਲ ਦੀਆਂ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਤੋਂ 70 bp - 20 kb DNA ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਮੁੜ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰ ਸਕਦੀ ਹੈ।ਡੀਐਨਏ ਸੋਸ਼ਣ ਕਾਲਮ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਤੌਰ 'ਤੇ ਉੱਚ-ਲੂਣ ਵਾਲੀ ਸਥਿਤੀ ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਸੋਖ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਕਿੱਟ ਪੀਸੀਆਰ ਉਤਪਾਦਾਂ, ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀਆਂ ਜਾਂ ਹੋਰ ਤਰੀਕਿਆਂ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਕੱਚੇ ਡੀਐਨਏ ਉਤਪਾਦਾਂ ਤੋਂ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਸਿੱਧੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸ਼ੁੱਧ ਕਰ ਸਕਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ, ਹੋਰ ਜੈਵਿਕ ਮਿਸ਼ਰਣਾਂ, ਅਜੈਵਿਕ ਲੂਣ ਆਇਨਾਂ ਅਤੇ ਓਲੀਗੋਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਵਰਗੀਆਂ ਅਸ਼ੁੱਧੀਆਂ ਨੂੰ ਹਟਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।ਇਹ ਸੁਨਿਸ਼ਚਿਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ ਕਿ ਸ਼ੁੱਧੀਕਰਨ 10-15 ਮਿੰਟ ਦੇ ਅੰਦਰ ਪੂਰਾ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ.ਸ਼ੁੱਧ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਸਿੱਧੇ ਲਿਗੇਸ਼ਨ, ਟ੍ਰਾਂਸਫਾਰਮੇਸ਼ਨ, ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਪਾਚਨ, ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ, ਪੀਸੀਆਰ, ਸੀਕਵੈਂਸਿੰਗ, ਮਾਈਕ੍ਰੋਇਨਜੈਕਸ਼ਨ ਆਦਿ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਸਟੋਰੇਜ਼ ਹਾਲਾਤ
-15 ~ -25 ℃ 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕਰੋ ਅਤੇ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਟ੍ਰਾਂਸਪੋਰਟ ਕਰੋ।
ਕੰਪੋਨੈਂਟਸ
| ਕੰਪੋਨੈਂਟਸ | (100 rxns) |
| ਬਫਰ ਜੀ.ਡੀ.ਪੀ | 80 ਮਿ.ਲੀ |
| ਬਫਰ GW | 2 × 20 ਮਿ.ਲੀ |
| ਇਲੂਸ਼ਨ ਬਫਰ | 20 ਮਿ.ਲੀ |
| FastPure DNA ਮਿੰਨੀ ਕਾਲਮ-ਜੀ | 100 |
ਬਫਰ GDP:ਡੀਐਨਏ ਬਾਈਡਿੰਗ ਬਫਰ।
ਬਫਰ GW:ਧੋਣ ਵਾਲਾ ਬਫਰ;ਵਰਤੋਂ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਬੋਤਲ 'ਤੇ ਦਰਸਾਏ ਵਾਲੀਅਮ ਦੁਆਰਾ ਪੂਰਨ ਈਥਾਨੋਲ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ।
ਇਲੂਸ਼ਨ ਬਫਰ:ਇਲੂਸ਼ਨ.
FastPure DNA ਮਿੰਨੀ ਕਾਲਮ-G:ਡੀਐਨਏ ਸੋਸ਼ਣ ਕਾਲਮ।
ਸੰਗ੍ਰਹਿ ਟਿਊਬਾਂ 2 ਮਿ.ਲੀ.ਫਿਲਟਰੇਟ ਲਈ ਸੰਗ੍ਰਹਿ ਟਿਊਬ.
ਤਿਆਰ ਸਮੱਗਰੀ
1.5 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਨਿਰਜੀਵ ਟਿਊਬ, ਪੂਰਨ ਈਥਾਨੌਲ ਅਤੇ ਆਈਸੋਪ੍ਰੋਪਾਨੋਲ (ਜਦੋਂ ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜਾ ≤100 ਬੀਪੀ, 1 ਵਾਲੀਅਮ ਜੋੜੋ
isopropanol 1 ਵਾਲੀਅਮ ਜੈੱਲ), ਪਾਣੀ ਦਾ ਇਸ਼ਨਾਨ.
ਪ੍ਰਯੋਗ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ
ਵਰਤੋਂ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਟੈਗ 'ਤੇ ਦਰਸਾਏ ਅਨੁਸਾਰ ਬਫਰ GW ਨੂੰ ਪਤਲਾ ਕਰਨ ਲਈ 80 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਈਥਾਨੌਲ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ, ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕਰੋ।
ਵਿਧੀ
1. ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕਰਮ ਹੱਲ
ਜੈੱਲ ਐਕਸਟਰੈਕਸ਼ਨ ਸਕੀਮ: ਬਰਾਬਰ ਵਾਲੀਅਮ ਬਫਰ ਜੀਡੀਪੀ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਹੱਲ ਰਿਕਵਰੀ ਸਕੀਮ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ:5 ਵਾਰ ਵਾਲੀਅਮ ਬਫਰ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ
2. GDP ਜੈੱਲ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰੋ (100 μl ਬਰਾਬਰ 100 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ)
ਜੈੱਲ ਭੰਗ
3. 50 ~ 55 'ਤੇ ਪਹਿਲਾਂ ਤੋਂ ਹੀਟ ਕਰੋ℃
4. ਬੰਨ੍ਹ ਧੋਵੋ
ਬਫਰ GDP ਦਾ 300 μL ਜੋੜੋ*
700 μL ਬਫਰ GW ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ
700 μL ਬਫਰ GW ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ
5. ਐਲੂਟ
20 - 30μL ਇਲੂਸ਼ਨ ਬਫਰ ਜਾਂ ਡੀਓਨਾਈਜ਼ਡ ਪਾਣੀ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ
ਨੋਟ* ਇਸ ਕਦਮ ਦੇ ਬਿਨਾਂ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਤਰਲ ਰਿਕਵਰੀ
ਜੈੱਲ ਕੱਢਣ ਦਾ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮ
1. ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਵੰਡਣ ਲਈ ਡੀਐਨਏ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਯੂਵੀ ਰੋਸ਼ਨੀ ਦੇ ਹੇਠਾਂ ਐਗਰੋਜ਼ ਜੈੱਲ ਤੋਂ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਦੀ ਸਿੰਗਲ ਸਟ੍ਰਿਪ ਨੂੰ ਐਕਸਾਈਜ਼ ਕਰੋ।ਜੈੱਲ ਦੀ ਸਪੱਸ਼ਟ ਨਮੀ ਨੂੰ ਜਜ਼ਬ ਕਰਨ ਲਈ ਸੋਖਕ ਕਾਗਜ਼ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਜਿੰਨਾ ਸੰਭਵ ਹੋ ਸਕੇ ਵਾਧੂ ਐਗਰੋਸ ਨੂੰ ਹਟਾ ਕੇ ਜੈੱਲ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਦੇ ਆਕਾਰ ਨੂੰ ਘੱਟ ਤੋਂ ਘੱਟ ਕਰੋ।ਇਸਦੀ ਮਾਤਰਾ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰਨ ਲਈ ਜੈੱਲ ਦੇ ਟੁਕੜੇ (ਮਾਈਕ੍ਰੋਸੈਂਟਰੀਫਿਊਜ ਟਿਊਬ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ) ਦਾ ਤੋਲ ਕਰੋ: 100 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ ਜੈਲਸਲਾਈਸ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਲਗਭਗ 100 μL ਹੈ, ਇਹ ਮੰਨਦੇ ਹੋਏ ਕਿ ਘਣਤਾ 1g/ml ਹੈ।
2. ਬਰਾਬਰ ਵਾਲੀਅਮ ਬਫਰ GDP ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ, 7-10 ਮਿੰਟ ਲਈ 50~55℃ 'ਤੇ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕਰੋ (ਜੈੱਲ ਦੇ ਆਕਾਰ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ, ਜੈੱਲ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਭੰਗ ਹੋਣ ਤੱਕ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਹੋਣ ਦੇ ਸਮੇਂ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਕਰੋ)।ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕਰਨ ਦੌਰਾਨ ਟਿਊਬ ਨੂੰ 2 ਵਾਰ ਉਲਟਾਓ।
Δ ਬਫਰ ਜੀਡੀਪੀ ਦੇ 1-3 ਖੰਡਾਂ ਦਾ ਜੋੜ ਡੀਐਨਏ ਰਿਕਵਰੀ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਤ ਨਹੀਂ ਕਰੇਗਾ।ਜੇ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਨੂੰ <100 bp ਮੁੜ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਬਫਰ ਜੀਡੀਪੀ ਦੇ 3 ਭਾਗਾਂ ਨੂੰ ਜੋੜਨ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ;ਜਦੋਂ ਜੈੱਲ ਦਾ ਟੁਕੜਾ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਘੁਲ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਆਈਸੋਪ੍ਰੋਪਾਨੋਲ ਦੀ 1 ਮਾਤਰਾ ਪਾਓ ਅਤੇ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮਿਲਾਓ, ਫਿਰ ਅਗਲੇ ਪੜਾਅ 'ਤੇ ਜਾਰੀ ਰੱਖੋ।
3. ਨਮੂਨੇ ਨੂੰ ਟਿਊਬ ਦੇ ਹੇਠਾਂ ਲਿਆਉਣ ਲਈ ਥੋੜ੍ਹੇ ਸਮੇਂ ਲਈ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਕਰੋ, 2 ਮਿ.ਲੀ. ਕਲੈਕਸ਼ਨ ਟਿਊਬਾਂ ਵਿੱਚ ਫਾਸਟਪਿਊਰ ਡੀਐਨਏ ਮਿੰਨੀ ਕਾਲਮ-ਜੀ ਪਾਓ, ਧਿਆਨ ਨਾਲ ਘੋਲ ਨੂੰ ਵੱਧ ਤੋਂ ਵੱਧ 700 μL ਇੱਕ ਵਾਰ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਕਰੋ।
ਫਿਲਟਰੇਸ਼ਨ ਕਾਲਮਾਂ ਦਾ ਸਮਾਂ, 30-60 ਸਕਿੰਟ ਲਈ 12,000 rpm (13,800 X g) 'ਤੇ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ।
4. ਫਿਲਟਰੇਟ ਨੂੰ ਰੱਦ ਕਰੋ ਅਤੇ ਕਾਲਮ ਵਿੱਚ ਬਫਰ GDP ਦਾ 300 μL ਜੋੜੋ, ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 1 ਮਿੰਟ ਲਈ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕਰੋ, 30-60 ਸਕਿੰਟ ਲਈ 12,000 rpm (13,800 X g) 'ਤੇ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਕਰੋ।
5. ਫਿਲਟਰੇਟ ਨੂੰ ਰੱਦ ਕਰੋ ਅਤੇ 30-60 ਸਕਿੰਟ ਲਈ 12,000 rpm (13,800 X g) 'ਤੇ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ, ਕਾਲਮ ਵਿੱਚ ਬਫਰ GW ਦਾ 700 μL (ਜਾਂਚ ਕਰੋ ਕਿ ਕੀ ਪੂਰਣ ਈਥਾਨੋਲ ਪਹਿਲਾਂ ਹੀ ਸ਼ਾਮਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ!) ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ।
Δ ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਸ਼ੋਸ਼ਣ ਕਾਲਮ ਦੀ ਕੰਧ ਦੇ ਆਲੇ ਦੁਆਲੇ ਬਫਰ GW ਜੋੜੋ, ਜਾਂ ਬਫਰ GW ਬੈਕ ਕਵਰ ਨੂੰ ਜੋੜੋ ਅਤੇ ਟਿਊਬ ਦੀ ਕੰਧ 'ਤੇ ਲੂਣ ਨੂੰ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਨਾਲ ਫਲੱਸ਼ ਕਰਨ ਵਿੱਚ ਮਦਦ ਕਰਨ ਲਈ ਇਸਨੂੰ 2 - 3 ਵਾਰ ਉਲਟਾ ਮਿਕਸ ਕਰੋ।
6. ਕਦਮ 5 ਦੁਹਰਾਓ।
Δ ਦੋ ਵਾਰ ਬਫਰ GW ਨਾਲ ਫਲੱਸ਼ਿੰਗ ਇਹ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾ ਸਕਦੀ ਹੈ ਕਿ ਲੂਣ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਹਟਾ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਹੈ ਅਤੇ ਬਾਅਦ ਦੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ 'ਤੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨੂੰ ਖਤਮ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ।
7. ਫਿਲਟਰੇਟ ਨੂੰ ਰੱਦ ਕਰੋ ਅਤੇ ਖਾਲੀ ਕਾਲਮ ਨੂੰ 12,000 rpm (13,800 X g) 'ਤੇ 2 ਮਿੰਟ ਲਈ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਕਰੋ।
8. ਕਾਲਮ ਨੂੰ ਇੱਕ ਸਾਫ਼ 1.5 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸੈਂਟਰੀਫਿਊਜ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ ਪਾਓ, ਕਾਲਮ ਝਿੱਲੀ ਦੇ ਕੇਂਦਰ ਵਿੱਚ 20 - 30 μL ਇਲੂਸ਼ਨ ਬਫਰ ਪਾਓ, 2 ਮਿੰਟ ਲਈ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕਰੋ, ਅਤੇ ਫਿਰ 12,000 rpm (13,800 X g) ਲਈ 12,000 X ਮਿੰਟ ਲਈ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਕਰੋ।ਕਾਲਮ ਨੂੰ ਰੱਦ ਕਰੋ, ਪ੍ਰਾਪਤ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ -20 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕਰੋ।
Δ ਸਟੈਪ 8 ਦੇ ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਨੂੰ ਦੁਬਾਰਾ ਈਲੂਟ ਕਰਨ ਲਈ ਕਾਲਮ ਵਿੱਚ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਕਰਨਾ ਅਤੇ ਈਲਿਊਸ਼ਨ ਬਫਰ ਨੂੰ 55 ਤੱਕ ਪ੍ਰੀਹੀਟ ਕਰਨਾ (ਜਦੋਂ DNA ਫ੍ਰੈਗਮੈਂਟ >3 kb) ਰਿਕਵਰੀ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਵਿੱਚ ਮਦਦਗਾਰ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਪੀਸੀਆਰ ਉਤਪਾਦ ਰਿਕਵਰੀ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮ
ਇਹ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ ਪੀਸੀਆਰ ਉਤਪਾਦਾਂ, ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਅਤੇ ਹੋਰ ਡੀਐਨਏ ਕੱਚੇ ਉਤਪਾਦਾਂ (ਜੈਨੇਟਿਕ ਡੀਐਨਏ ਸਮੇਤ) ਤੋਂ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਸ਼ੁੱਧ ਕਰਨ ਲਈ ਲਾਗੂ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।ਇਹ ਘੋਲ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡਸ, ਪ੍ਰਾਈਮਰ, ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਡਾਇਮਰ, ਨਮਕ ਦੇ ਅਣੂ, ਪਾਚਕ ਅਤੇ ਹੋਰ ਅਸ਼ੁੱਧੀਆਂ ਨੂੰ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨਾਲ ਹਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
1. ਸੰਖੇਪ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਪੀਸੀਆਰ ਉਤਪਾਦ, ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਹੱਲ, ਅਤੇ ਹੋਰ ਡੀਐਨਏ ਕੱਚੇ ਉਤਪਾਦ.ਪਾਈਪੇਟ ਨਾਲ ਉਹਨਾਂ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਦਾ ਅੰਦਾਜ਼ਾ ਲਗਾਓ ਅਤੇ ਇੱਕ ਜਰਮ 1.5 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਜਾਂ 2 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਕਰੋ।100 μL ਤੱਕ ਵਾਲੀਅਮ ਤੱਕ ddH2O ਜੋੜੋ;ਜਦੋਂ ਕਿ ਉੱਚ ਇਕਾਗਰਤਾ ਵਾਲੇ ਜੀਨੋਮਿਕ ਡੀਐਨਏ ਲਈ, ddH2O ਨਾਲ 300 μL ਤੱਕ ਪਤਲਾ ਕਰਨ ਨਾਲ ਰਿਕਵਰੀ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਵਿੱਚ ਸੁਧਾਰ ਕਰਨ ਵਿੱਚ ਮਦਦ ਮਿਲੇਗੀ।
2. ਬਫਰ ਜੀਡੀਪੀ ਦੇ 5 ਵੋਲਯੂਮ ਜੋੜੋ, ਉਲਟਾ ਜਾਂ ਵੌਰਟੈਕਸਿੰਗ ਦੁਆਰਾ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਰਲਾਓ।ਜੇਕਰ ਦਿਲਚਸਪੀ ਦਾ DNA ਟੁਕੜਾ> 100 bp, ਈਥਾਨੌਲ ਦੇ ਵਾਧੂ 1.5 ਵਾਲੀਅਮ (ਨਮੂਨੇ + ਬਫਰ GDP) ਜੋੜਨ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ।
3. ਕਾਲਮ ਨੂੰ ਵਾਪਸ ਕਲੈਕਸ਼ਨ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ ਪਾਓ, ਮਿਸ਼ਰਣ ਨੂੰ ਕਾਲਮ ਵਿੱਚ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਕਰੋ, 30 - 60 ਸਕਿੰਟ ਲਈ 12,000 rpm (13,800 ×g) 'ਤੇ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਕਰੋ।ਜੇਕਰ ਮਿਕਸਡ ਘੋਲ ਦੀ ਮਾਤਰਾ 700 µL ਹੈ, ਤਾਂ ਸੋਸ਼ਣ ਕਾਲਮ ਨੂੰ ਵਾਪਸ ਕਲੈਕਸ਼ਨ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ ਪਾਓ, ਬਾਕੀ ਬਚੇ ਘੋਲ ਨੂੰ ਸੋਸ਼ਣ ਕਾਲਮ ਵਿੱਚ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਕਰੋ, ਅਤੇ 30 - 60 ਸਕਿੰਟ ਲਈ 12,000 rpm (13,800 × g) 'ਤੇ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਕਰੋ।
4. ਅਗਲਾ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਨ 08- 1/ਜੈੱਲ ਐਕਸਟਰੈਕਸ਼ਨ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮ ਦੇ ਪੜਾਅ 5 - 8 ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ।
ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨਾਂ
TAE ਜਾਂ TBE ਐਗਰੋਸ ਜੈੱਲ ਦੀਆਂ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ;ਪੀਸੀਆਰ ਉਤਪਾਦ, ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀਆਂ ਜਾਂ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਤਰੀਕਿਆਂ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਹੋਰ ਕੱਚੇ ਡੀਐਨਏ ਉਤਪਾਦ।ਤੋਂ ਬਰਾਮਦ ਕੀਤੇ ਟੁਕੜੇ70 bp -20 kb.
ਨੋਟਸ
ਸਿਰਫ਼ ਖੋਜ ਲਈ ਵਰਤੋਂ।ਡਾਇਗਨੌਸਟਿਕ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆਵਾਂ ਵਿੱਚ ਵਰਤੋਂ ਲਈ ਨਹੀਂ।
1. ਵਰਤਣ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਟੈਗ 'ਤੇ ਦਰਸਾਏ ਅਨੁਸਾਰ ਬਫਰ GW ਨੂੰ ਪਤਲਾ ਕਰਨ ਲਈ 80 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਈਥਾਨੌਲ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ, ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕਰੋ।
2. ਜੇਕਰ ਘੱਟ-ਤਾਪਮਾਨ ਸਟੋਰੇਜ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਬਫਰ ਜੀਡੀਪੀ ਨੂੰ ਤੇਜ਼ ਕਰਨਾ ਆਸਾਨ ਹੈ, ਤਾਂ ਇਸਨੂੰ ਵਰਤੋਂ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਕੁਝ ਸਮੇਂ ਲਈ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਰੱਖਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਜੇ ਜਰੂਰੀ ਹੋਵੇ, ਤਾਂ ਇਸਨੂੰ 37 ℃ ਪਾਣੀ ਦੇ ਇਸ਼ਨਾਨ ਵਿੱਚ ਪਹਿਲਾਂ ਤੋਂ ਗਰਮ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਜਦੋਂ ਤੱਕ ਕਿ ਪੂਰਵ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਭੰਗ ਨਹੀਂ ਹੋ ਜਾਂਦਾ, ਅਤੇ ਫਿਰ ਇਸਨੂੰ ਮਿਲਾਉਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
3. ਪਾਣੀ ਦੇ ਨਹਾਉਣ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ ਨੂੰ ਪਹਿਲਾਂ ਤੋਂ 50 ~ 55℃ 'ਤੇ ਸੈੱਟ ਕਰੋ।
4. 08-1/ਜੈੱਲ ਐਕਸਟਰੈਕਸ਼ਨ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮ ਸਟੈਪ 1 ਵਿੱਚ, ਜੈੱਲ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਦੇ ਆਕਾਰ ਨੂੰ ਘੱਟ ਕਰਨ ਨਾਲ ਘੁਲਣ ਦੇ ਸਮੇਂ ਵਿੱਚ ਕਾਫ਼ੀ ਕਮੀ ਆਵੇਗੀ ਅਤੇ ਰਿਕਵਰੀ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਵਿੱਚ ਵਾਧਾ ਹੋਵੇਗਾ (ਲੀਨੀਅਰਾਈਜ਼ਡ ਡੀਐਨਏ ਹਾਈਡਰੋਲਾਈਜ਼ ਕਰਨ ਲਈ ਆਸਾਨੀ ਨਾਲ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਜਦੋਂ ਉੱਚ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਲਗਾਤਾਰ ਪ੍ਰਗਟ ਹੁੰਦਾ ਹੈ)।ਡੀਐਨਏ ਜੈੱਲ ਨੂੰ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਲਈ ਯੂਵੀ ਵਿੱਚ ਨਾ ਕੱਢੋ, ਕਿਉਂਕਿ ਅਲਟਰਾਵਾਇਲਟ ਰੋਸ਼ਨੀ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਨੁਕਸਾਨ ਪਹੁੰਚਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।
5. ਜੈੱਲ ਨੂੰ 08- 1/ਜੈੱਲ ਐਕਸਟਰੈਕਸ਼ਨ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮ ਸਟੈਪ 2 ਵਿੱਚ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਭੰਗ ਕਰੋ, ਨਹੀਂ ਤਾਂ DNA ਰਿਕਵਰੀ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਗੰਭੀਰ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਹੋਵੇਗੀ।
6. ਈਲੂਸ਼ਨ ਬਫਰ ਜਾਂ ddH2O ਨੂੰ 55℃ ਤੱਕ ਪ੍ਰੀਹੀਟ ਕਰੋ, ਜੋ ਕਿ DNA ਇਲੂਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨੂੰ ਬਿਹਤਰ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਮਦਦਗਾਰ ਹੈ।DNA ਨੂੰ 2.5 mM Tris-HCl, pH 7.0 - 8.5 ਦੇ ਐਲੂਐਂਟ ਵਿੱਚ ਸਟੋਰ ਕਰਨ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।
