ਪ੍ਰੋਟੀਨੇਜ਼ ਕੇ ਐਨਜੀਐਸ (ਪਾਊਡਰ)
ਬਿੱਲੀ ਨੰ: HC4507A
NGS Protease K ਉੱਚ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਗਤੀਵਿਧੀ ਅਤੇ ਵਿਆਪਕ ਸਬਸਟਰੇਟ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਵਾਲਾ ਇੱਕ ਸਥਿਰ ਸੀਰੀਨ ਪ੍ਰੋਟੀਜ਼ ਹੈ। ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਤਰਜੀਹੀ ਤੌਰ 'ਤੇ ਹਾਈਡ੍ਰੋਫੋਬਿਕ ਅਮੀਨੋ ਐਸਿਡ, ਗੰਧਕ ਵਾਲੇ ਅਮੀਨੋ ਐਸਿਡ ਅਤੇ ਖੁਸ਼ਬੂਦਾਰ ਅਮੀਨੋ ਐਸਿਡ ਦੇ ਸੀ-ਟਰਮੀਨਲ ਦੇ ਨਾਲ ਲੱਗਦੇ ਐਸਟਰ ਬਾਂਡ ਅਤੇ ਪੇਪਟਾਇਡ ਬਾਂਡਾਂ ਨੂੰ ਵਿਗਾੜਦਾ ਹੈ।ਇਸ ਲਈ, ਇਹ ਅਕਸਰ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਨੂੰ ਛੋਟੇ ਪੇਪਟਾਇਡਾਂ ਵਿੱਚ ਡੀਗਰੇਡ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।NGS Protease K ASP ਦੇ ਨਾਲ ਇੱਕ ਆਮ ਸੇਰੀਨ ਪ੍ਰੋਟੀਜ਼ ਹੈ39-ਉਸ ਦਾ69-ਸਰ224ਉਤਪ੍ਰੇਰਕ ਟ੍ਰਾਈਡ ਜੋ ਸੀਰੀਨ ਪ੍ਰੋਟੀਜ਼ ਲਈ ਵਿਲੱਖਣ ਹੈ, ਅਤੇ ਉਤਪ੍ਰੇਰਕ ਕੇਂਦਰ ਟੋ Ca ਨਾਲ ਘਿਰਿਆ ਹੋਇਆ ਹੈ2+ਸਥਿਰਤਾ ਲਈ ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਾਈਟਾਂ, ਸਥਿਤੀਆਂ ਦੀ ਇੱਕ ਵਿਸ਼ਾਲ ਸ਼੍ਰੇਣੀ ਦੇ ਅਧੀਨ ਉੱਚ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਬਣਾਈ ਰੱਖਣਾ।
ਨਿਰਧਾਰਨ
| ਦਿੱਖ | ਸਫੈਦ ਤੋਂ ਆਫ-ਵਾਈਟ ਅਮੋਰਫਸ ਪਾਊਡਰ, ਲਾਇਓਫਿਲਾਈਜ਼ਡ |
| ਖਾਸ ਗਤੀਵਿਧੀ | ≥40U/mg ਠੋਸ |
| DNase | ਕੋਈ ਪਤਾ ਨਹੀਂ ਲੱਗਾ |
| RNase | ਕੋਈ ਪਤਾ ਨਹੀਂ ਲੱਗਾ |
| ਬਾਇਓਬਰਡਨ | ≤50CFU/g ਠੋਸ |
| ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਦੀ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ | <5pg/mg ਠੋਸ |
ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ
| ਸਰੋਤ | ਟ੍ਰਿਟੀਰਾਚੀਅਮ ਐਲਬਮ |
| EC ਨੰਬਰ | 3.4.21.64(ਟ੍ਰੀਟੀਰਾਚੀਅਮ ਐਲਬਮ ਤੋਂ ਮੁੜ ਸੰਜੋਗ) |
| ਅਣੂ ਭਾਰ | 29kDa (SDS-PAGE) |
| ਆਈਸੋਇਲੈਕਟ੍ਰਿਕ ਪੁਆਇੰਟ | 7.81 ਚਿੱਤਰ.1 |
| ਸਰਵੋਤਮ pH | 7.0-12.0 (ਸਾਰੇ ਉੱਚ ਕਿਰਿਆ ਕਰਦੇ ਹਨ) ਚਿੱਤਰ 2 |
| ਸਰਵੋਤਮ ਤਾਪਮਾਨ | 65℃ ਚਿੱਤਰ.3 |
| pH ਸਥਿਰਤਾ | pH 4.5-12.5 (25℃,16h) ਚਿੱਤਰ 4 |
| ਥਰਮਲ ਸਥਿਰਤਾ | ਹੇਠਾਂ 50℃ (pH 8.0, 30min) ਚਿੱਤਰ.5 |
| ਸਟੋਰੇਜ਼ ਸਥਿਰਤਾ | 12 ਮਹੀਨਿਆਂ ਲਈ 25℃ 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਚਿੱਤਰ.6 |
| ਐਕਟੀਵੇਟਰ | SDS, ਯੂਰੀਆ |
| ਇਨਿਹਿਬਟਰਸ | ਡਾਇਸੋਪ੍ਰੋਪਾਈਲ ਫਲੋਰੋਫੋਸਫੇਟ;benzylsulfonyl ਫਲੋਰਾਈਡ |
ਸਟੋਰੇਜ ਦੀਆਂ ਸ਼ਰਤਾਂ
ਲਾਇਓਫਿਲਾਈਜ਼ਡ ਪਾਊਡਰ ਨੂੰ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਲਈ ਰੋਸ਼ਨੀ ਤੋਂ ਦੂਰ -25~-15 ℃ 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕਰੋ;ਭੰਗ ਹੋਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਪ੍ਰਕਾਸ਼ ਤੋਂ ਦੂਰ 2-8 ℃ ਤੇ ਥੋੜ੍ਹੇ ਸਮੇਂ ਲਈ ਸਟੋਰੇਜ ਲਈ ਢੁਕਵੀਂ ਮਾਤਰਾ ਵਿੱਚ ਅਲੀਕੋਟ ਜਾਂ ਰੌਸ਼ਨੀ ਤੋਂ ਦੂਰ -25~-15 ℃ 'ਤੇ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਦੀ ਸਟੋਰੇਜ।
ਸਾਵਧਾਨੀਆਂ
ਵਰਤੋਂ ਜਾਂ ਤੋਲਣ ਵੇਲੇ ਸੁਰੱਖਿਆ ਵਾਲੇ ਦਸਤਾਨੇ ਅਤੇ ਚਸ਼ਮੇ ਪਾਓ, ਅਤੇ ਵਰਤੋਂ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਹਵਾਦਾਰ ਰੱਖੋ।ਇਹ ਉਤਪਾਦ ਚਮੜੀ ਦੀ ਐਲਰਜੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਅਤੇ ਗੰਭੀਰ ਅੱਖਾਂ ਦੀ ਜਲਣ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਜੇਕਰ ਸਾਹ ਲਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਇਹ ਐਲਰਜੀ ਜਾਂ ਦਮੇ ਦੇ ਲੱਛਣਾਂ ਜਾਂ ਡਿਸਪਨੀਆ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਸਾਹ ਦੀ ਜਲਣ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣ ਸਕਦਾ ਹੈ.
ਯੂਨਿਟ ਦੀ ਪਰਿਭਾਸ਼ਾ
NGS Protease K ਦੀ ਇੱਕ ਇਕਾਈ ਨੂੰ ਮਿਆਰੀ ਨਿਰਧਾਰਨ ਹਾਲਤਾਂ ਅਧੀਨ 1 μmol L-tyrosine ਵਿੱਚ ਕੇਸੀਨ ਨੂੰ ਹਾਈਡ੍ਰੋਲਾਈਜ਼ ਕਰਨ ਲਈ ਲੋੜੀਂਦੇ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਵਜੋਂ ਪਰਿਭਾਸ਼ਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ।
ਰੀਐਜੈਂਟਸ ਦੀ ਤਿਆਰੀ
| ਰੀਏਜੈਂਟ | ਨਿਰਮਾਤਾ | ਕੈਟਾਲਾਗ |
| ਕੈਸੀਨ ਤਕਨੀਕੀਬੋਵਾਈਨ ਦੁੱਧ ਤੋਂ | ਸਿਗਮਾ ਐਲਡਰਿਕ | C7078 |
| NaOH | ਸਿਨੋਫਾਰਮ ਕੈਮੀਕਲReagent Co., Ltd. | 10019762 ਹੈ |
| NaH2PO4· 2 ਐੱਚ2O | ਸਿਨੋਫਾਰਮ ਕੈਮੀਕਲReagent Co., Ltd. | 20040718 ਹੈ |
| Na2HPO4 | ਸਿਨੋਫਾਰਮ ਕੈਮੀਕਲReagent Co., Ltd. | 20040618 ਹੈ |
| Trichloroacetic ਐਸਿਡ | ਸਿਨੋਫਾਰਮ ਕੈਮੀਕਲReagent Co., Ltd. | 80132618 ਹੈ |
| ਸੋਡੀਅਮ ਐਸੀਟੇਟ | ਸਿਨੋਫਾਰਮ ਕੈਮੀਕਲReagent Co., Ltd. | 10018818 ਹੈ |
| ਐਸੀਟਿਕ ਐਸਿਡ | ਸਿਨੋਫਾਰਮ ਕੈਮੀਕਲReagent Co., Ltd. | 10000218 |
| ਐਚ.ਸੀ.ਐਲ | ਸਿਨੋਫਾਰਮ ਕੈਮੀਕਲReagent Co., Ltd. | 10011018 ਹੈ |
| ਸੋਡੀਅਮ ਕਾਰਬੋਨੇਟ | ਸਿਨੋਫਾਰਮ ਕੈਮੀਕਲReagent Co., Ltd. | 10019260 ਹੈ |
| ਫੋਲੀਨ-ਫਿਨੋਲ | ਸੰਗੋਨ ਬਾਇਓਟੈਕ (ਸ਼ੰਘਾਈ)ਕੰ., ਲਿ. | A500467-0100 |
| ਐਲ-ਟਾਈਰੋਸਿਨ | ਸਿਗਮਾ | 93829 ਹੈ |
ਰੀਐਜੈਂਟ I:
ਸਬਸਟਰੇਟ: ਬੋਵਾਈਨ ਦੁੱਧ ਦੇ ਘੋਲ ਤੋਂ 1% ਕੈਸੀਨ: 0.1M ਸੋਡੀਅਮ ਫਾਸਫੇਟ ਘੋਲ, pH 8.0 ਦੇ 50 ਮਿ.ਲੀ. ਵਿੱਚ 1g ਬੋਵਾਈਨ ਮਿਲਕ ਕੈਸੀਨ ਨੂੰ ਘੋਲ ਦਿਓ, ਪਾਣੀ ਦੇ ਇਸ਼ਨਾਨ ਵਿੱਚ 65-70 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਤੇ 15 ਮਿੰਟ ਲਈ ਗਰਮ ਕਰੋ, ਹਿਲਾਓ ਅਤੇ ਘੁਲੋ, ਪਾਣੀ ਨਾਲ ਠੰਡਾ ਕਰੋ, ਇਸ ਦੁਆਰਾ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਕਰੋ। ਸੋਡੀਅਮ ਹਾਈਡ੍ਰੋਕਸਾਈਡ ਨੂੰ pH 8.0, ਅਤੇ 100ml ਵਿੱਚ ਪਤਲਾ ਕਰੋ।
ਰੀਐਜੈਂਟ II:
TCA ਘੋਲ: 0.1M ਟ੍ਰਾਈਕਲੋਰੋਐਸੀਟਿਕ ਐਸਿਡ, 0.2M ਸੋਡੀਅਮ ਐਸੀਟੇਟ ਅਤੇ 0.3M ਐਸੀਟਿਕ ਐਸਿਡ (ਵਜ਼ਨ 1.64 ਗ੍ਰਾਮ ਟ੍ਰਾਈਕਲੋਰੋਐਸੀਟਿਕ ਐਸਿਡ + 1.64 ਗ੍ਰਾਮ ਸੋਡੀਅਮ ਐਸੀਟੇਟ + 1.724 ਮਿਲੀਲਿਟਰ ਐਸੀਟਿਕ ਐਸਿਡ, 50 ਮਿਲੀਲਿਟਰ ਡੀਓਨਾਈਜ਼ਡ ਪਾਣੀ ਪਾਓ, ਪੀਐਚ 3 ਨਾਲ ਪੀ.ਐਚ.3.0 ਨਾਲ ਐਡਜਸਟ ਕਰੋ। 100 ਮਿ.ਲੀ.)
ਰੀਐਜੈਂਟ III:
0.4m ਸੋਡੀਅਮ ਕਾਰਬੋਨੇਟ ਘੋਲ (4.24g ਐਨਹਾਈਡ੍ਰਸ ਸੋਡੀਅਮ ਕਾਰਬੋਨੇਟ ਦਾ ਭਾਰ ਅਤੇ 100mL ਪਾਣੀ ਵਿੱਚ ਘੁਲਣਾ)
ਰੀਐਜੈਂਟ IV:
ਫੋਲਿਨ ਫਿਨੋਲ ਰੀਏਜੈਂਟ: ਡੀਓਨਾਈਜ਼ਡ ਪਾਣੀ ਨਾਲ 5 ਵਾਰ ਪਤਲਾ ਕਰੋ।
ਰੀਐਜੈਂਟ V:
ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਪਤਲਾ: 0.1 ਐਮ ਸੋਡੀਅਮ ਫਾਸਫੇਟ ਘੋਲ, pH 8.0।
ਰੀਐਜੈਂਟ VI:
L-ਟਾਇਰੋਸਿਨ ਸਟੈਂਡਰਡ ਹੱਲ: 0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 umol/ml L-tyrosine 0.2M HCl ਨਾਲ ਘੁਲਿਆ ਹੋਇਆ।
ਵਿਧੀ
1. ਯੂਵੀ-ਵਿਸ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਫੋਟੋਮੀਟਰ ਚਾਲੂ ਕਰੋ ਅਤੇ ਫੋਟੋਮੈਟ੍ਰਿਕ ਮਾਪ ਚੁਣੋ।
2. ਤਰੰਗ-ਲੰਬਾਈ ਨੂੰ 660nm ਦੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸੈੱਟ ਕਰੋ।
3. ਪਾਣੀ ਦੇ ਇਸ਼ਨਾਨ ਨੂੰ ਚਾਲੂ ਕਰੋ, ਤਾਪਮਾਨ ਨੂੰ 37 ℃ 'ਤੇ ਸੈੱਟ ਕਰੋ, ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਓ ਕਿ ਤਾਪਮਾਨ 3-5 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ ਬਦਲਿਆ ਨਾ ਹੋਵੇ।
4. 0.5mL ਸਬਸਟਰੇਟ ਨੂੰ ਇੱਕ 2mL ਸੈਂਟਰੀਫਿਊਜ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ 37℃ ਵਾਟਰ ਬਾਥ ਵਿੱਚ 10 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ ਪ੍ਰੀਹੀਟ ਕਰੋ।
5. 10 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ ਪ੍ਰੀਹੀਟਡ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ 0.5mL ਪਤਲੇ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਘੋਲ ਨੂੰ ਕੱਢੋ।ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਡਾਇਲੁਐਂਟ ਨੂੰ ਖਾਲੀ ਗਰੁੱਪ ਵਜੋਂ ਸੈੱਟ ਕਰੋ।
6. ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਤੋਂ ਤੁਰੰਤ ਬਾਅਦ 1.0 ਮਿ.ਲੀ. ਟੀ.ਸੀ.ਏ. ਰੀਐਜੈਂਟ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ।ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮਿਲਾਓ ਅਤੇ ਪਾਣੀ ਦੇ ਇਸ਼ਨਾਨ ਵਿੱਚ 30 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕਰੋ।
7. ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਗੇਟ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦਾ ਹੱਲ.
8. ਦਿੱਤੇ ਗਏ ਕ੍ਰਮ ਵਿੱਚ ਹੇਠਾਂ ਦਿੱਤੇ ਭਾਗਾਂ ਨੂੰ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ।
| ਰੀਏਜੈਂਟ | ਵਾਲੀਅਮ |
| ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ | 0.5 ਮਿ.ਲੀ |
| 0.4M ਸੋਡੀਅਮ ਕਾਰਬੋਨੇਟ | 2.5 ਮਿ.ਲੀ |
| ਫੋਲਿਨ ਫਿਨੋਲ ਰੀਏਜੈਂਟ | 0.5 ਮਿ.ਲੀ |
9. ਪਾਣੀ ਦੇ ਇਸ਼ਨਾਨ ਵਿੱਚ 37 ℃ ਵਿੱਚ 30 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕਰਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮਿਲਾਓ।
10. ਓ.ਡੀ660OD ਵਜੋਂ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ1;ਖਾਲੀ ਨਿਯੰਤਰਣ ਸਮੂਹ: OD ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਘੋਲ ਨੂੰ ਬਦਲਣ ਲਈ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਡਾਇਲੁਐਂਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ660OD ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ2, ΔOD=OD1-ਓ.ਡੀ2.
11. L-ਟਾਈਰੋਸਾਈਨ ਸਟੈਂਡਰਡ ਕਰਵ: 0.5mL ਵੱਖ-ਵੱਖ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ L-tyrosine ਘੋਲ, 2.5mL 0.4M ਸੋਡੀਅਮ ਕਾਰਬੋਨੇਟ, 0.5mL ਫੋਲਿਨ ਫਿਨੋਲ ਰੀਏਜੈਂਟ 5mL ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ, 30 ਮਿੰਟ ਲਈ 37℃ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕਰੋ, OD ਲਈ ਖੋਜੋ660L-ਟਾਈਰੋਸਾਈਨ ਦੀ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਲਈ, ਫਿਰ ਮਿਆਰੀ ਕਰਵ Y=kX+b ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ, ਜਿੱਥੇ Y L-ਟਾਈਰੋਸਿਨ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਹੈ, X OD ਹੈ600.
ਗਣਨਾ
2: ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਘੋਲ ਦੀ ਕੁੱਲ ਮਾਤਰਾ (mL)
0.5: ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਘੋਲ ਦੀ ਮਾਤਰਾ (mL)
0.5: ਕ੍ਰੋਮੋਜਨਿਕ ਨਿਰਧਾਰਨ (mL) ਵਿੱਚ ਵਰਤੀ ਜਾਂਦੀ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਤਰਲ ਮਾਤਰਾ
10: ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਦਾ ਸਮਾਂ (ਮਿੰਟ)
Df: ਪਤਲਾ ਮਲਟੀਪਲ
C: ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ (mg/mL)
ਅੰਕੜੇ
Fig.1 ਡੀਐਨਏ ਰਹਿੰਦ
| ਨਮੂਨਾ | ਐਵੇ C4 | ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਰਿਕਵਰੀ(pg/mg) | ਰਿਕਵਰੀ(%) | ਕੁੱਲ ਨਿਊਕਲੀਇਕ ਐਸਿਡ ( pg/mg) |
| ਪੀ.ਆਰ.ਕੇ | 24.66 | 2.23 | 83% | 2. 687 |
| PRK+STD2 | 18.723 | 126.728 | - | - |
| STD1 | 12.955 |
- |
- |
- |
| STD2 | 16 | |||
| STD3 | 19.125 | |||
| STD4 | 23.135 | |||
| STD5 | 26.625 | |||
| RNA-ਮੁਕਤ H2O | ਨਿਰਧਾਰਿਤ | - | - | - |
Fig.2 ਸਰਵੋਤਮ pH
Fig.3 ਸਰਵੋਤਮ ਤਾਪਮਾਨ
Fig.4 pH ਸਥਿਰਤਾ
Fig.5 ਥਰਮਲ ਸਥਿਰਤਾ
Fig.6 25℃ 'ਤੇ ਸਟੋਰੇਜ਼ ਸਥਿਰਤਾ
