5×Neoscript ਫਾਸਟ RT-qPCR ਪ੍ਰੀਮਿਕਸ ਪਲੱਸ-UNG
ਬਿੱਲੀ ਨੰਬਰ: HCB5142A
ਨਿਓਸਕ੍ਰਿਪਟ ਫਾਸਟ ਆਰਟੀ ਪ੍ਰੀਮਿਕਸ-ਯੂਐਨਜੀ (ਪ੍ਰੋਬ qRT-ਪੀਸੀਆਰ) ਇੱਕ ਬਹੁਤ ਹੀ ਸਥਿਰ ਇੱਕ-ਟਿਊਬ ਪੜਤਾਲ-ਅਧਾਰਤ ਮਿਸ਼ਰਣ ਹੈ ਜੋ ਇੱਕ-ਪੜਾਅ ਦੇ ਉਲਟ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਅਤੇ ਮਾਤਰਾਤਮਕ PCR (qRT-PCR) ਲਈ ਢੁਕਵਾਂ ਹੈ।ਇਹ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਅਤੇ ਪੜਤਾਲਾਂ ਦੇ ਪ੍ਰੀ-ਮਿਕਸਿੰਗ ਦਾ ਸਮਰਥਨ ਕਰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਘੱਟ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਤੱਕ ਸਟੋਰੇਜ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਸਥਿਰ ਰਹਿੰਦਾ ਹੈ।ਟੈਸਟ ਕੀਤੇ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਨਮੂਨੇ ਨੂੰ ਵਾਧੂ ਟਿਊਬ ਖੋਲ੍ਹਣ/ਪਾਇਪਿੰਗ ਓਪਰੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ, ਵਰਤਣ ਵੇਲੇ ਸਿੱਧਾ ਜੋੜਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਇਹ ਉਤਪਾਦ ਕੰਪੋਨੈਂਟ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਹੌਟ-ਸਟਾਰਟ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼, ਐਮ-ਐਮਐਲਵੀ, ਹੀਟ-ਲੇਬਲ ਯੂਰੇਸਿਲ ਡੀਐਨਏ ਗਲਾਈਕੋਸਾਈਲੇਜ਼ (ਟੀਐਸ-ਯੂਐਨਜੀ), ਆਰਨੇਜ਼ ਇਨ੍ਹੀਬੀਟਰ, ਐਮਜੀਸੀਐਲ2, dNTPs (dTTP ਦੀ ਬਜਾਏ dUTP ਨਾਲ), ਅਤੇ ਸਟੈਬੀਲਾਈਜ਼ਰ।ਜੈਨੇਟਿਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸੋਧੇ ਹੋਏ ਰੈਪਿਡ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟੇਜ ਅਤੇ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਨਾਲ, 20-40 ਮਿੰਟਾਂ ਦੇ ਅੰਦਰ ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਪੂਰਾ ਕਰਨਾ ਸੰਭਵ ਹੈ।ਇਹ ਰੀਐਜੈਂਟ qPCR ਲਈ ਐਂਟੀ-ਇਨਹਿਬੀਟਰੀ ਐਂਪਲੀਫੀਕੇਸ਼ਨ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਅਤੇ UNG ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਦੇ ਮਿਸ਼ਰਤ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਦੇ ਨਾਲ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਬਫਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦਾ ਹੈ।ਇਸ ਲਈ, ਇਹ ਟੀਚੇ ਵਾਲੇ ਜੀਨਾਂ ਦੀ ਚੰਗੀ ਐਂਪਲੀਫੀਕੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਪੀਸੀਆਰ ਦੀ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ ਅਤੇ ਐਰੋਸੋਲ ਪ੍ਰਦੂਸ਼ਣ ਕਾਰਨ ਹੋਣ ਵਾਲੇ ਗਲਤ ਪ੍ਰਸਾਰ ਨੂੰ ਰੋਕ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਇਹ ਰੀਐਜੈਂਟ ਐਪਲਾਈਡ ਬਾਇਓਸਿਸਟਮ, ਏਪੇਨਡੋਰਫ, ਬਾਇਓ-ਰੈਡ ਅਤੇ ਰੋਚੇ ਵਰਗੇ ਨਿਰਮਾਤਾਵਾਂ ਦੇ ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਪੀਸੀਆਰ ਯੰਤਰਾਂ ਦੇ ਅਨੁਕੂਲ ਹੈ।
ਕੰਪੋਨੈਂਟ
1.25×Neoscript ਫਾਸਟ RTase/UNG ਮਿਕਸ
2.5×Neoscript ਫਾਸਟ RT ਪ੍ਰੀਮਿਕਸ ਬਫਰ (dUTP)
ਸਟੋਰੇਜ ਦੀਆਂ ਸ਼ਰਤਾਂ
ਸਾਰੇ ਹਿੱਸਿਆਂ ਨੂੰ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਲਈ ਸਟੋਰੇਜ ਲਈ -20 ℃ ਅਤੇ 3 ਮਹੀਨਿਆਂ ਤੱਕ 4 ℃ ਤੇ ਰੱਖਿਆ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਵਰਤਣ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਪਿਘਲਾਉਣ ਅਤੇ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਰਲਾਓ।ਵਾਰ-ਵਾਰ ਫ੍ਰੀਜ਼-ਪੰਘਣ ਤੋਂ ਬਚੋ।
qRT-PCR ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਦੀ ਤਿਆਰੀ
| ਕੰਪੋਨੈਂਟਸ | 25μLਸਿਸਟਮ | 50μLਸਿਸਟਮ | ਅੰਤਮ ਇਕਾਗਰਤਾ |
| 5×Neoscript ਫਾਸਟ RT ਪ੍ਰੀਮਿਕਸ ਬਫਰ (dUTP) | 5μL | 10μL | 1× |
| 25×Neoscript ਫਾਸਟ RTase/UNG ਮਿਕਸ | 1μL | 2μL | 1× |
| 25×ਪ੍ਰਾਈਮਰ-ਪ੍ਰੋਬ ਮਿਕਸa | 1μL | 2μL | 1× |
| ਟੈਂਪਲੇਟ RNAb | - | - | - |
| ddH2O | 25μL ਤੱਕ | 50μL ਤੱਕ | - |
1) a. ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੀ ਅੰਤਮ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 0.2μM ਹੁੰਦੀ ਹੈ।ਬਿਹਤਰ ਨਤੀਜਿਆਂ ਲਈ, ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਨੂੰ 0.2-1μM ਦੀ ਰੇਂਜ ਦੇ ਅੰਦਰ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ, ਪੜਤਾਲ ਦੀ ਇਕਾਗਰਤਾ 0.1-0.3μM ਦੀ ਰੇਂਜ ਦੇ ਅੰਦਰ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।
2) b. ਇੱਕ ਤੇਜ਼ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ, ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਅਤੇ ਪੜਤਾਲਾਂ ਦੀ ਇਕਾਗਰਤਾ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਬਿਹਤਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਨਤੀਜੇ ਮਿਲ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਅਨੁਪਾਤ ਨੂੰ ਉਸ ਅਨੁਸਾਰ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।
3) ਵੱਖ-ਵੱਖ ਕਿਸਮਾਂ ਦੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਵਿੱਚ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਕਿਸਮਾਂ ਅਤੇ ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਦੀ ਸਮੱਗਰੀ ਅਤੇ ਟਾਰਗੇਟ ਜੀਨ ਦੀ ਕਾਪੀ ਨੰਬਰ ਸ਼ਾਮਲ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਅਸਲ ਸਥਿਤੀ ਦੁਆਰਾ ਵਿਚਾਰਿਆ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ.ਜੇ ਲੋੜ ਹੋਵੇ ਤਾਂ ਨਮੂਨੇ ਨੂੰ ਨਿਊਕਲੀਜ਼-ਮੁਕਤ ਪਾਣੀ ਜਾਂ TE ਬਫਰ ਨਾਲ ਪਤਲਾ ਕਰੋ।
ਪ੍ਰਤੀਕਰਮ ਸੀਹਾਲਾਤ
| ਨਿਯਮਤ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ | ਤੇਜ਼ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ | ||||||
| ਵਿਧੀ | ਟੈਂਪ | ਸਮਾਂ | ਸਾਈਕਲ | ਵਿਧੀ | ਟੈਂਪ | ਸਮਾਂ | ਸਾਈਕਲ |
| ਉਲਟਾ ਪ੍ਰਤੀਲਿਪੀ | 50℃ | 10-20 ਮਿੰਟ | 1 | ਉਲਟਾ ਪ੍ਰਤੀਲਿਪੀ | 50℃ | 5 ਮਿੰਟ | 1 |
| ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ | 95℃ | 1-5 ਮਿੰਟ | 1 | ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ | 95℃ | 30s | 1 |
| ਵਿਕਾਰ | 95℃ | 10-20 ਸਕਿੰਟ | 40-50 | ਵਿਕਾਰ | 95℃ | 1-3 ਸਕਿੰਟ | 40-50 |
| ਐਨੀਲਿੰਗ ਅਤੇ ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ | 56-64℃ | 20-60 | ਐਨੀਲਿੰਗ ਅਤੇ ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ | 56-64℃ | 3-20 ਸਕਿੰਟ | ||
ਗੁਣਵੱਤਾ ਕੰਟਰੋਲ
1.ਫੰਕਸ਼ਨ ਖੋਜ: ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ, ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਅਤੇ qPCR ਦੀ ਦੁਹਰਾਉਣਯੋਗਤਾ।
2.ਕੋਈ ਐਕਸੋਜੇਨਸ ਨਿਊਕਲੀਜ਼ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨਹੀਂ: ਕੋਈ ਐਕਸੋਜੇਨਸ ਐਂਡੋਨਿਊਕਲੀਜ਼ ਅਤੇ ਐਕਸੋਨਿਊਕਲੀਜ਼ ਪ੍ਰਦੂਸ਼ਣ ਨਹੀਂ।
ਨੋਟਸ
1.ਤੇਜ਼ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੀ ਪ੍ਰਸਾਰ ਦਰ 1kb/10s ਤੋਂ ਘੱਟ ਨਹੀਂ ਹੈ।ਵੱਖ-ਵੱਖ PCR ਯੰਤਰਾਂ ਵਿੱਚ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਹੀਟਿੰਗ ਅਤੇ ਕੂਲਿੰਗ ਸਪੀਡ, ਤਾਪਮਾਨ ਨਿਯੰਤਰਣ ਮੋਡ ਅਤੇ ਥਰਮਲ ਕੰਡਕਟੀਵਿਟੀ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ ਤੁਹਾਡੇ ਖਾਸ ਤੇਜ਼ ਪੀਸੀਆਰ ਯੰਤਰ ਦੇ ਨਾਲ ਸੁਮੇਲ ਵਿੱਚ ਤੁਹਾਡੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰ/ਪ੍ਰੋਬ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਅਤੇ ਰਨਿੰਗ ਵਿਧੀ ਦਾ ਅਨੁਕੂਲਤਾ ਜ਼ਰੂਰੀ ਹੈ।
2.ਇਹ ਉਤਪਾਦ ਵਿਆਪਕ ਉਪਯੋਗਤਾ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਇਹ ਉੱਚ-ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਅਣੂ ਨਿਦਾਨ ਲਈ ਢੁਕਵਾਂ ਹੈ।ਘੱਟ ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਵਾਲੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਲਈ ਜਾਂ 200 bp ਤੋਂ ਵੱਧ ਲੰਬੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਲਈ ਤਿੰਨ-ਪੜਾਅ ਵਾਲੇ PCR ਵਿਧੀ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।
3.ਕਿਉਂਕਿ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਐਂਪਲੀਕਨਾਂ ਵਿੱਚ dUTP ਦੀ ਵੱਖਰੀ ਉਪਯੋਗਤਾ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਅਤੇ UNG ਲਈ ਵੱਖਰੀ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਜੇਕਰ UNG ਸਿਸਟਮ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ ਖੋਜ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਘੱਟ ਜਾਂਦੀ ਹੈ ਤਾਂ ਰੀਐਜੈਂਟਸ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾਇਆ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।ਜੇਕਰ ਲੋੜ ਹੋਵੇ ਤਾਂ ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਤਕਨੀਕੀ ਸਹਾਇਤਾ ਲਈ ਸਾਡੇ ਨਾਲ ਸੰਪਰਕ ਕਰੋ।
4.ਕੈਰੀਓਵਰ ਪੀਸੀਆਰ ਉਤਪਾਦਾਂ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਤੋਂ ਬਚਣ ਲਈ, ਪ੍ਰਸਾਰਣ ਲਈ ਸਮਰਪਿਤ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਖੇਤਰ ਅਤੇ ਪਾਈਪੇਟ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।ਦਸਤਾਨੇ ਨਾਲ ਕੰਮ ਕਰੋ ਅਤੇ ਵਾਰ-ਵਾਰ ਬਦਲੋ ਅਤੇ ਐਮਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਪੀਸੀਆਰ ਟਿਊਬ ਨੂੰ ਨਾ ਖੋਲ੍ਹੋ।
