ਰਨੇਜ਼ ਇਨ੍ਹੀਬੀਟਰ (ਗਲਾਈਸਰੋਲ ਮੁਕਤ)
ਮੂਰੀਨ ਆਰਨੇਸ ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਇੱਕ ਰੀਕੌਂਬੀਨੈਂਟ ਮਿਊਰੀਨ ਆਰਨੇਸ ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਹੈ ਜੋ ਈਕੋਲੀ ਤੋਂ ਪ੍ਰਗਟ ਅਤੇ ਸ਼ੁੱਧ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ।ਇਹ ਗੈਰ-ਸਹਿਯੋਗੀ ਬੰਧਨ ਦੁਆਰਾ 1:1 ਅਨੁਪਾਤ ਵਿੱਚ RNase A, B ਜਾਂ C ਨਾਲ ਬੰਨ੍ਹਦਾ ਹੈ, ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ ਤਿੰਨ ਐਨਜ਼ਾਈਮਾਂ ਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਰੋਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ RNA ਨੂੰ ਪਤਨ ਤੋਂ ਬਚਾਉਂਦਾ ਹੈ।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਇਹ Aspergillus ਤੋਂ RNase 1, RNase T1, S1 ਨਿਊਕਲੀਜ਼, RNase H ਜਾਂ RNase ਦੇ ਵਿਰੁੱਧ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਨਹੀਂ ਹੈ।ਮੂਰੀਨ ਆਰਨੇਸ ਇਨ੍ਹੀਬੀਟਰ ਦੀ ਜਾਂਚ RT-PCR, RT-qPCR ਅਤੇ IVT mRNA ਦੁਆਰਾ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ, ਅਤੇ ਇਹ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਵਪਾਰਕ ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟਸ, ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਸ ਅਤੇ ਆਰਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਸ ਦੇ ਅਨੁਕੂਲ ਸੀ।
ਮਨੁੱਖੀ RNase ਇਨਿਹਿਬਟਰਸ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ, ਮਿਊਰੀਨ RNase ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਵਿੱਚ ਦੋ ਸਿਸਟੀਨ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਜੋ ਆਕਸੀਕਰਨ ਲਈ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਜੋ ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਨੂੰ ਅਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਕਰਨ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣਦਾ ਹੈ।ਜੋ ਇਸਨੂੰ DTT ਦੀ ਘੱਟ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ (1 mM ਤੋਂ ਘੱਟ) 'ਤੇ ਸਥਿਰ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ।ਇਹ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਇਸਨੂੰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਵਿੱਚ ਵਰਤਣ ਲਈ ਢੁਕਵੀਂ ਬਣਾਉਂਦੀ ਹੈ ਜਿੱਥੇ ਡੀਟੀਟੀ ਦੀ ਉੱਚ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੇ ਉਲਟ ਹੈ (ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਰੀਅਲ-ਟਾਈਮ RT-PCR)।
Aਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨ
ਇਸ ਉਤਪਾਦ ਨੂੰ ਕਿਸੇ ਵੀ ਪ੍ਰਯੋਗ ਵਿੱਚ ਵਿਆਪਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਜਿੱਥੇ RNA ਦੇ ਵਿਗਾੜ ਤੋਂ ਬਚਣ ਲਈ RNase ਦਖਲਅੰਦਾਜ਼ੀ ਸੰਭਵ ਹੈ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ:
1. ਫਸਟ-ਸਟ੍ਰੈਂਡ cDNA ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ, RT-PCR, RT-qPCR, ਆਦਿ;
2. ਇਨ-ਵਿਟਰੋ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ/ਅਨੁਵਾਦ (ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਵਿਟਰੋ ਵਿੱਚ ਵਾਇਰਲ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ);
3. RNA ਅਲੱਗ-ਥਲੱਗ ਅਤੇ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਦੇ ਦੌਰਾਨ RNase ਗਤੀਵਿਧੀ ਦੀ ਰੋਕਥਾਮ.
ਸਟੋਰੇਜ ਦੀਆਂ ਸ਼ਰਤਾਂ
-25～-15℃ 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕਰੋ;
ਫ੍ਰੀਜ਼-ਥੌਅ ਚੱਕਰ ≤ 5 ਵਾਰ;
1 ਸਾਲ ਲਈ ਵੈਧ।
ਯੂਨਿਟ ਦੀ ਪਰਿਭਾਸ਼ਾ
ਇੱਕ ਯੂਨਿਟ ਨੂੰ 50% ਤੱਕ RNase A ਦੇ 5 ng ਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ ਲੋੜੀਂਦੇ RNase Inhibitor ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਵਜੋਂ ਪਰਿਭਾਸ਼ਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ।
ਅਣੂ ਭਾਰ
RNase Inhibitor (Glycerol-free) ਇੱਕ 50 kDa ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਹੈ।
ਗੁਣਵੱਤਾ ਕੰਟਰੋਲ
Exonuclease ਸਰਗਰਮੀ:
1 μg λ-ਹਿੰਦ III ਡਾਈਜੈਸਟ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਨਾਲ 40 U ਦੇ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਨੂੰ 37 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 16 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕਰਨ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਜੈੱਲ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਦੁਆਰਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਡੀਐਨਏ ਦਾ ਕੋਈ ਖੋਜਣਯੋਗ ਗਿਰਾਵਟ ਨਹੀਂ ਹੋਇਆ।
ਐਂਡੋਨਿਊਕਲੀਜ਼ ਗਤੀਵਿਧੀ:
37°C 'ਤੇ 16 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ 1 μg λ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਨਾਲ 40 U ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਦੇ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਹੋਣ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਜੈੱਲ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਦੁਆਰਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਡੀਐਨਏ ਦਾ ਕੋਈ ਖੋਜਣਯੋਗ ਗਿਰਾਵਟ ਨਹੀਂ ਹੋਇਆ।
ਨਿਕਿੰਗ ਸਰਗਰਮੀ:
1 μg pBR322 ਦੇ ਨਾਲ 40 U ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਨੂੰ 37℃ 'ਤੇ 16 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕਰਨ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਜੈੱਲ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਦੁਆਰਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਡੀਐਨਏ ਦਾ ਕੋਈ ਖੋਜਣਯੋਗ ਗਿਰਾਵਟ ਨਹੀਂ ਹੋਇਆ।
RNase ਸਰਗਰਮੀ:
37℃ 'ਤੇ 4 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ 1.6 μg MS2 RNA ਦੇ ਨਾਲ 40 U ਦੇ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਦੇ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਹੋਣ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਜੈੱਲ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਦੁਆਰਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੇ ਗਏ RNA ਦਾ ਕੋਈ ਖੋਜਣਯੋਗ ਗਿਰਾਵਟ ਨਹੀਂ ਹੋਇਆ।
E.ਕੋਲੀ ਡੀਐਨਏ:
TaqMan qPCR ਦੁਆਰਾ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਦਾ 40 U ਖੋਜਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।E.coli DNA ≤ 0. 1pg/40U ਹੈ।
Notes
1. ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਸਰਗਰਮੀ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ ਹਿਲਾਓ ਜਾਂ ਹਿਲਾਓ ਨਾ।
2.RNase ਇਨਿਹਿਬਟਰ 25℃ ਤੋਂ 55℃ ਤੱਕ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨਾਂ ਤੇ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ≥65℃ ਤੇ ਅਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।
3. RNase H, RNase 1, ਅਤੇ RNase T1 ਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਰੋਕਿਆ ਨਹੀਂ ਗਿਆ ਹੈ।
4. RNase ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ pH ਸੀਮਾ ਚੌੜੀ ਹੈ (pH 5-9 'ਤੇ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ), pH 7-8 'ਤੇ ਵੱਧ ਤੋਂ ਵੱਧ ਗਤੀਵਿਧੀ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਿਤ ਕਰਦੀ ਹੈ।
