ਸਿੱਧੀ ਪੀਸੀਆਰ ਕਿੱਟ ਲਗਾਓ
ਬਿੱਲੀ ਨੰਬਰ: HCR2020A
ਪਲਾਂਟ ਡਾਇਰੈਕਟ ਪੀਸੀਆਰ ਕਿੱਟ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਪੱਤਿਆਂ, ਬੀਜਾਂ, ਆਦਿ ਦੇ ਸਿੱਧੇ ਪ੍ਰਸਾਰਣ ਲਈ ਢੁਕਵੀਂ ਹੈ, ਅਤੇ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੀ ਉੱਚ-ਥਰੂਪੁੱਟ ਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ ਲਈ ਵਰਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਵਿੱਚ ਪੋਲੀਸੈਕਰਾਈਡ ਅਤੇ ਪੌਲੀਫੇਨੋਲ ਸ਼ਾਮਲ ਨਹੀਂ ਹਨ।ਨਿਰਦੇਸ਼ਿਤ ਵਿਕਾਸ 'ਤੇ ਅਧਾਰਤ ਡਾਇਰੈਕਟ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਡੀਐਨਏ ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਪੌਦਿਆਂ ਵਿੱਚ ਪੀਸੀਆਰ ਇਨਿਹਿਬਟਰਾਂ ਲਈ ਵਧੀਆ ਸਹਿਣਸ਼ੀਲਤਾ ਹੈ।ਇਸ ਦੌਰਾਨ, ਇਹ ਉੱਚ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਨ ਨੂੰ ਬਰਕਰਾਰ ਰੱਖਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ 5 kb ਦੇ ਅੰਦਰ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਲਈ ਢੁਕਵਾਂ ਹੈ।ਕਿੱਟ ਵਿਚਲੇ ਵਿਲੱਖਣ ਲਾਈਸਿਸ ਬਫਰ ਏ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਤਾਜ਼ੇ ਜਾਂ ਜੰਮੇ ਹੋਏ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਨੂੰ ਲਾਈਜ਼ ਕਰਨ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।ਇਹ ਚਲਾਉਣਾ ਆਸਾਨ ਹੈ ਅਤੇ ਲਾਈਸੇਟ ਨੂੰ ਸ਼ੁੱਧੀਕਰਨ ਦੇ ਬਿਨਾਂ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਲਈ ਟੈਂਪਲੇਟ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਸਿਸਟਮ ਵਿੱਚ ਸੁਰੱਖਿਆ ਏਜੰਟ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਜੋ ਕੱਚੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੂੰ ਵਾਰ-ਵਾਰ ਠੰਢ ਅਤੇ ਪਿਘਲਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਵਧਾਉਣ ਦੇ ਯੋਗ ਬਣਾਉਂਦੇ ਹਨ।2 × ਪਲਾਂਟ ਡਾਇਰੈਕਟ ਮਾਸਟਰ ਮਿਕਸ ਨੂੰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਕਰਨ ਲਈ ਸਿਰਫ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਅਤੇ ਟੈਂਪਲੇਟਸ ਨੂੰ ਜੋੜਨ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਪਾਈਪਟਿੰਗ ਓਪਰੇਸ਼ਨਾਂ ਨੂੰ ਘਟਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਖੋਜ ਥ੍ਰੋਪੁੱਟ ਅਤੇ ਨਤੀਜਿਆਂ ਦੀ ਪੁਨਰ-ਉਤਪਾਦਨਯੋਗਤਾ ਵਿੱਚ ਸੁਧਾਰ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।
ਕੰਪੋਨੈਂਟਸ
| ਕੰਪੋਨੈਂਟਸ | 50 RXNS | 200 RXNS |
| 2 × ਪਲਾਂਟ ਡਾਇਰੈਕਟ ਮਾਸਟਰ ਮਿਕਸ | 1.25 ਮਿ.ਲੀ | 4×1.25 ਮਿ.ਲੀ |
| ਪਲਾਂਟ ਡਾਇਰੈਕਟ ਲਾਇਸਿਸ ਬਫਰ ਏ | 5 ਮਿ.ਲੀ | 20 ਮਿ.ਲੀ |
| ਪਲਾਂਟ ਡਾਇਰੈਕਟ ਲਾਈਸਿਸ ਬਫਰ ਬੀ* | 5 ਮਿ.ਲੀ | 20 ਮਿ.ਲੀ |
*ਪਲਾਂਟ ਡਾਇਰੈਕਟ ਲਾਈਸਿਸ ਬਫਰ ਬੀ ਇੱਕ ਵਿਕਲਪਿਕ ਰੀਐਜੈਂਟ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਨਮੂਨੇ ਦੇ ਸਟੋਰੇਜ ਸਮੇਂ ਨੂੰ ਲੰਮਾ ਕਰਨ ਲਈ ਪਲਾਂਟ ਡਾਇਰੈਕਟ ਲਾਈਸਿਸ ਬਫਰ ਏ ਨੂੰ ਬੇਅਸਰ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਇਹ ਅਸਲ ਸਥਿਤੀ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ.
ਸਟੋਰੇਜ ਦੀਆਂ ਸ਼ਰਤਾਂ
2 × ਪਲਾਂਟ ਡਾਇਰੈਕਟ ਮਾਸਟਰ ਮਿਕਸ, -30 ~ -15℃ 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕਰੋ ਅਤੇ ਵਾਰ-ਵਾਰ ਜੰਮਣ ਅਤੇ ਪਿਘਲਣ ਤੋਂ ਬਚੋ;ਪਲਾਂਟ ਡਾਇਰੈਕਟ ਲਾਇਸਿਸ ਬਫਰ, -30 ~ -15℃ ਜਾਂ 2 ~ 8℃ 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕਰੋ।
ਪ੍ਰਯੋਗ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ
ਨਮੂਨਾ ਪ੍ਰੋਸੈਸਿੰਗ-ਪੌਦੇ ਦੇ ਪੱਤੇ
ਸਿੱਧਾ ਤਰੀਕਾ:ਜਵਾਨ ਪੱਤਿਆਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ.ਇੱਕ ਛੋਟਾ ਅਤੇ ਇਕਸਾਰ ਨਮੂਨਾ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ 0.5 - 3 ਮਿਲੀਮੀਟਰ ਦੇ ਨਿਸ਼ਚਿਤ ਵਿਆਸ ਦੇ ਨਾਲ ਇੱਕ ਮੋਰੀ ਪੰਚ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ, ਅਤੇ ਫਿਰ ਸਿੱਧੇ ਨਮੂਨੇ ਨੂੰ ਪੀਸੀਆਰ ਸਿਸਟਮ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ (50 μl ਸਿਸਟਮ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ)।ਨੋਟ ਕਰੋ, ਇਹ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਓ ਕਿ ਨਮੂਨਾ ਪੀਸੀਆਰ ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਹੈ ਅਤੇ ਟਿਊਬ ਦੀਵਾਰ ਦੇ ਵਿਰੁੱਧ ਨਹੀਂ ਹੈ।ਜੇਕਰ ਡਾਇਰੈਕਟ ਪੀਸੀਆਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਲੰਬੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਅਤੇ ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਛੋਟੇ ਵਿਆਸ (0.5 - 1 ਮਿਲੀਮੀਟਰ) ਵਾਲੇ ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਇੱਕ ਟੈਂਪਲੇਟ ਦੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਬਿਹਤਰ ਨਤੀਜੇ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਵਿੱਚ ਮਦਦ ਕਰ ਸਕਦੀ ਹੈ।
ਪੀਸਣ ਵਾਲੀ ਲਿਸਿਸ ਵਿਧੀ:ਜਵਾਨ ਪੱਤਿਆਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ.ਪੱਤੇ ਦਾ ਇੱਕ ਛੋਟਾ ਟੁਕੜਾ (ਲਗਭਗ 1 - 3 ਮਿਲੀਮੀਟਰ ਵਿਆਸ ਵਿੱਚ) ਲਓ, ਇਸਨੂੰ 20 μl ਪਲਾਂਟ ਡਾਇਰੈਕਟ ਲਾਈਸਿਸ ਬਫਰ ਐਬ ਵਿੱਚ ਰੱਖੋ, ਅਤੇ ਇਸਨੂੰ ਜਿੰਨਾ ਸੰਭਵ ਹੋ ਸਕੇ ਪੀਸ ਲਓ (ਇਹ ਕਦਮ 100 μl ਪਾਈਪੇਟ ਟਿਪ ਨਾਲ ਪੱਤੇ ਨੂੰ ਨਿਚੋੜ ਕੇ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਨਮੂਨੇ ਨੂੰ ਮੈਸ਼ ਕਰਨ ਲਈ)।ਜੇਕਰ ਪੱਤੇ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਵੱਡੀ ਮਾਤਰਾ ਵਰਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ (7 ਮਿਲੀਮੀਟਰ ਤੋਂ ਵੱਧ ਨਾ ਹੋਵੇ), ਤਾਂ ਪਤਲੇ ਬਫਰ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ 50 μl ਤੱਕ ਵਧਾਓ।ਪੱਤੇ ਜ਼ਮੀਨ ਵਿੱਚ ਆਉਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਘੋਲ ਹਰਾ ਦਿਖਾਈ ਦੇਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।ਇੱਕ ਸੰਖੇਪ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਗੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਟੈਂਪਲੇਟਕ ਦੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪੀਸੀਆਰ ਸਿਸਟਮ ਵਿੱਚ ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਦਾ 1 μl ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ।
ਥਰਮਲ ਲਾਈਸਿਸ ਵਿਧੀ:ਜਵਾਨ ਪੱਤਿਆਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ.ਪੱਤੇ ਦਾ ਇੱਕ ਛੋਟਾ ਟੁਕੜਾ (ਲਗਭਗ 1 - 3 ਮਿਲੀਮੀਟਰ ਵਿਆਸ) ਲਓ, ਇਸਨੂੰ 20 μl ਪਲਾਂਟ ਡਾਇਰੈਕਟ ਲਾਈਸਿਸ ਬਫਰ ਏ ਵਿੱਚ ਰੱਖੋ, ਅਤੇ ਇਸਨੂੰ 5 - 10 ਮਿੰਟ ਲਈ 95 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ 'ਤੇ ਗਰਮ ਕਰੋ।ਲੀਸਿਸ ਦਾ ਸਮਾਂ ਉਹਨਾਂ ਪੱਤਿਆਂ ਲਈ ਉਚਿਤ ਢੰਗ ਨਾਲ ਵਧਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਨੂੰ ਲੀਜ਼ ਕਰਨਾ ਔਖਾ ਹੈ (20 ਮਿੰਟ ਤੋਂ ਵੱਧ ਨਹੀਂ)।ਜੇਕਰ ਪੱਤੇ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਵੱਡੀ ਮਾਤਰਾ ਵਰਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ (7 ਮਿਲੀਮੀਟਰ ਤੋਂ ਵੱਧ ਨਾ ਹੋਵੇ), ਤਾਂ ਪਤਲੇ ਬਫਰ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ 50 μl ਤੱਕ ਵਧਾਓ।ਗਰਮ ਕਰਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਥੋੜ੍ਹੇ ਸਮੇਂ ਲਈ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਕਰੋ, ਅਤੇ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਟੈਂਪਲੇਟਬ ਵਜੋਂ ਪੀਸੀਆਰ ਸਿਸਟਮ ਵਿੱਚ 1 μl ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ।
ਨਮੂਨਾ ਪ੍ਰੋਸੈਸਿੰਗ- ਬੀਜ ਬੀਜੋ
ਪੀਸਣ ਵਾਲੀ ਲਿਸਿਸ ਵਿਧੀ:5 ਮਿਲੀਮੀਟਰ ਦੇ ਵਿਆਸ ਵਾਲੇ ਬੀਜਾਂ ਨੂੰ ਕੱਟਣ ਲਈ ਇੱਕ ਸਕਾਲਪੈਲ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ, ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ ਪਲਾਂਟ ਡਾਇਰੈਕਟ ਲਾਈਸਿਸ ਬਫਰ ਏ ਦੇ 100 μl ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ, ਅਤੇ ਨਮੂਨੇ ਨੂੰ ਪਾਈਪੇਟ ਟਿਪ ਜਾਂ ਹੋਰ ਸਾਧਨਾਂ ਨਾਲ ਪੀਸ ਲਓ।ਥੋੜ੍ਹੇ ਸਮੇਂ ਲਈ ਵੌਰਟੇਕਸ ਅਤੇ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 3 - 5 ਮਿੰਟ ਲਈ ਖੜ੍ਹੇ ਰਹਿਣ ਦਿਓ।ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਓ ਕਿ ਬੀਜ ਦਾ ਨਮੂਨਾ ਪਤਲਾ ਬਫਰ ਵਿੱਚ ਡੁੱਬਿਆ ਹੋਇਆ ਹੈ।ਇੱਕ ਸੰਖੇਪ ਸੈਂਟਰੀਫਿਊਗੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਟੈਂਪਲੇਟ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਪੀਸੀਆਰ ਸਿਸਟਮ ਵਿੱਚ ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਦਾ 1 μl ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ।
ਥਰਮਲ ਲਾਈਸਿਸ ਵਿਧੀ:5 ਮਿਲੀਮੀਟਰ ਦੇ ਵਿਆਸ ਵਾਲੇ ਬੀਜਾਂ ਨੂੰ ਕੱਟਣ ਲਈ ਇੱਕ ਸਕਾਲਪੈਲ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ, ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ ਪਲਾਂਟ ਡਾਇਰੈਕਟ ਲਾਈਸਿਸ ਬਫਰ ਏ ਦੇ 100 μl ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ, ਅਤੇ 5 - 10 ਮਿੰਟ ਲਈ 95 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਤੇ ਗਰਮ ਕਰੋ।ਲੀਸਿਸ ਦਾ ਸਮਾਂ ਉਹਨਾਂ ਪੱਤਿਆਂ ਲਈ ਉਚਿਤ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਧਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਨੂੰ ਲੀਜ਼ ਕਰਨਾ ਮੁਸ਼ਕਲ ਹੁੰਦਾ ਹੈ (30 ਮਿੰਟ ਤੋਂ ਵੱਧ ਨਹੀਂ)।ਗਰਮ ਕਰਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਥੋੜ੍ਹੇ ਸਮੇਂ ਲਈ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਕਰੋ, ਅਤੇ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਟੈਂਪਲੇਟਬ ਵਜੋਂ ਪੀਸੀਆਰ ਸਿਸਟਮ ਵਿੱਚ 1 μl ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ।
aਕੈਚੀ ਜਾਂ ਹੋਰ ਸੰਦਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਢੁਕਵੇਂ ਆਕਾਰ ਦੇ ਨਮੂਨੇ ਕੱਟਣ ਲਈ ਵੀ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ;ਜੇਕਰ ਪੰਚ ਜਾਂ ਕੈਂਚੀ ਦੀ ਦੁਬਾਰਾ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ ਨਮੂਨਿਆਂ ਵਿਚਕਾਰ ਅੰਤਰ-ਦੂਸ਼ਣ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ ਹਰੇਕ ਵਰਤੋਂ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ 2% ਸੋਡੀਅਮ ਹਾਈਪੋਕਲੋਰਾਈਟ ਘੋਲ ਨਾਲ ਸਾਫ਼ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।
ਬੀ.ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਓ ਕਿ ਵਰਤੋਂ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਪਲਾਂਟ ਡਾਇਰੈਕਟ ਲਾਈਸਿਸ ਬਫਰ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਪਿਘਲ ਗਿਆ ਹੈ।ਜੇਕਰ ਬਫਰ ਲੇਸਦਾਰ ਹੈ ਜਾਂ ਇਸ ਵਿੱਚ ਛਾਲੇ ਹਨ, ਤਾਂ ਇਸਨੂੰ ਵਰਤਣ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਇਸਨੂੰ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਪਿਘਲਣ ਲਈ 37℃ 'ਤੇ ਗਰਮ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
c.ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਵਿੱਚ ਟੈਂਪਲੇਟ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਪੌਦਿਆਂ ਦੀ ਸਮੱਗਰੀ ਅਤੇ ਪਤਲੇ ਪਦਾਰਥਾਂ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਵਿੱਚ ਅੰਤਰ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਉਚਿਤ ਢੰਗ ਨਾਲ ਐਡਜਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਪਲਾਂਟ ਡਾਇਰੈਕਟ ਲਾਇਸਿਸ ਬਫਰ
ਇਸ ਉਤਪਾਦ ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਪਲਾਂਟ ਡਾਇਰੈਕਟ ਲਾਈਸਿਸ ਬਫਰ ਏ ਨੂੰ ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਦੇ ਜੀਨੋਮ ਨੂੰ ਛੱਡਣ ਲਈ ਸਖਤੀ ਨਾਲ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ ਅਤੇ ਕੱਚੇ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ 4℃ 'ਤੇ ਥੋੜ੍ਹੇ ਸਮੇਂ ਲਈ ਸਟੋਰੇਜ ਲਈ ਢੁਕਵਾਂ ਹੈ।ਜੇਕਰ ਨਮੂਨੇ ਨੂੰ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਲਈ ਸਟੋਰ ਕਰਨ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ (ਉਦਾਹਰਨ ਲਈ, 1 - 2 ਮਹੀਨੇ), ਤਾਂ ਇਹ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ ਕਿ ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਨੂੰ ਇੱਕ ਨਵੀਂ EP ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਕਰੋ ਅਤੇ ਇਸਨੂੰ -20℃ 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕਰੋ।ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੂੰ ਵਧੇਰੇ ਸਥਿਰਤਾ ਨਾਲ ਸਟੋਰ ਕਰਨ ਲਈ, ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਕੀਤੇ ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਵਿੱਚ ਪਲਾਂਟ ਡਾਇਰੈਕਟ ਲਾਈਸਿਸ ਬਫਰ ਬੀ ਦੀ ਬਰਾਬਰ ਮਾਤਰਾ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ, ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮਿਲਾਓ ਅਤੇ -20℃ 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕਰੋ।ਸਥਿਰ ਸਟੋਰੇਜ ਸਮਾਂ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਅਤੇ ਰਾਜਾਂ ਦੇ ਨਾਲ ਬਦਲਦਾ ਹੈ।
ਪ੍ਰਤੀਕਰਮ ਸਿਸਟਮ
| ddH2O | 20.0 μl ਤੱਕ | 50.0 μl ਤੱਕ |
| 2 × ਪਲਾਂਟ ਡਾਇਰੈਕਟ ਮਾਸਟਰ ਮਿਕਸa | 10.0 μl | 25.0 µ |
| ਪ੍ਰਾਈਮਰ 1 (10 µM) | 0.8 μl | 2.0 µl |
| ਪ੍ਰਾਈਮਰ 2 (10 µM)b | 0.8 μl | 2.0 µl |
| ਪੌਦੇ ਦੇ ਪੱਤੇ/ਕੱਚੇ ਐਬਸਟਰੈਕਟ ਦਾ ਨਮੂਨਾ(ਨਮੂਨਾ ਪ੍ਰੋਸੈਸਿੰਗ ਵੇਖੋ) | 0.5 - 3 ਮਿਲੀਮੀਟਰ ਪੱਤਾ ਡਿਸਕ/x µl | 0.5 - 3 ਮਿਲੀਮੀਟਰ ਪੱਤਾ ਡਿਸਕ/x µl |
aਇਸ ਵਿੱਚ ਐਮ.ਜੀ2+2 mM ਦੀ ਅੰਤਮ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 'ਤੇ।
ਬੀ.ਹਰੇਕ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਲਈ 0.4μM ਦੀ ਅੰਤਮ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੀ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਵਰਤੋਂ ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਵਧਾਉਂਦੀ ਹੈ।
c.ਵਰਤੇ ਗਏ ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਅਸਲ ਸਥਿਤੀ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਐਡਜਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ.ਕੱਚੇ ਲਾਈਜ਼ਡ ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਇੱਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਵਿੱਚ ਵਰਤੀ ਗਈ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੀ ਕੁੱਲ ਮਾਤਰਾ ਦੇ 2% - 20% ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਐਡਜਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨਾ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਅਸਫਲਤਾ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਪ੍ਰਤੀਕਰਮ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮ
| ਕਦਮ | ਤਾਪਮਾਨ | ਸਮਾਂ |
| ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਵਿਕਾਰ | 98℃ | 5 ਮਿੰਟ |
| ਵਿਕਾਰ | 95℃ | 10 ਸਕਿੰਟ |
| ਐਨੀਲਿੰਗ | 58 ~ 72℃ | 15 ਸਕਿੰਟ |
| ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ | 72℃ | 30 ਸਕਿੰਟ |
| ਅੰਤਮ ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ | 72℃ | 5 ਮਿੰਟ |
aਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਵਿਨਾਸ਼ਕਾਰੀ (98℃, 5 ਮਿੰਟ) ਪੌਦੇ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਲਿਸੀਸ ਨੂੰ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਜੀਨੋਮਿਕ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਜਾਰੀ ਕਰਦਾ ਹੈ ਜੋ ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਸਮਾਂ ਘਟਾਓ ਜਾਂ ਤਾਪਮਾਨ ਘਟਾਓ ਨਾ।
ਬੀ.ਇਸ ਨੂੰ ਪ੍ਰਾਈਮਰ Tm ਮੁੱਲ ਦੇ ਬਰਾਬਰ ਜਾਂ Tm ਮੁੱਲ ਤੋਂ 2 ~ 4℃ ਵੱਧ ਸੈੱਟ ਕਰਨ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਇਸ ਉਤਪਾਦ ਵਿੱਚ ਵਰਤਿਆ ਜਾਣ ਵਾਲਾ ਡਾਇਰੈਕਟ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਰਵਾਇਤੀ ਟਾਕ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਤੋਂ ਵੱਖਰਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਲਈ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਲੋੜਾਂ ਹਨ; ਉੱਚ ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਘਟਾ ਸਕਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਵਿੱਚ ਸੁਧਾਰ ਕਰ ਸਕਦੀ ਹੈ।ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਟੈਂਪਲੇਟਾਂ ਲਈ, ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਨੂੰ ਵਿਵਸਥਿਤ ਕਰਕੇ ਅਤੇ ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਸਮੇਂ ਨੂੰ ਲੰਮਾ ਕਰਕੇ ਕੁਸ਼ਲ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
c.ਜੇਕਰ ਐਂਪਲੀਫੀਕੇਸ਼ਨ ਉਤਪਾਦ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ≤1 kb ਹੈ, ਤਾਂ ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਸਮਾਂ 30 ਸਕਿੰਟ/kb 'ਤੇ ਸੈੱਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ;ਜੇਕਰ ਐਂਪਲੀਫੀਕੇਸ਼ਨ ਉਤਪਾਦ ਦੀ ਲੰਬਾਈ >1 kb ਹੈ, ਤਾਂ ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਸਮਾਂ 60 ਸਕਿੰਟ/kb 'ਤੇ ਸੈੱਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ।
d.ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਨਮੂਨਿਆਂ ਜਾਂ ਘੱਟ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਉਪਜ ਵਾਲੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਲਈ, ਚੱਕਰਾਂ ਦੀ ਸੰਖਿਆ ਨੂੰ ਉਚਿਤ ਤੌਰ 'ਤੇ 40 -50 ਚੱਕਰਾਂ ਤੱਕ ਵਧਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨਾਂ
ਇਹ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਦੇ ਸਿੱਧੇ ਪ੍ਰਸਾਰਣ ਅਤੇ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੀ ਉੱਚ-ਥਰੂਪੁੱਟ ਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ ਲਈ ਲਾਗੂ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਪੋਲੀਸੈਕਰਾਈਡ ਅਤੇ ਪੌਲੀਫੇਨੋਲ ਸ਼ਾਮਲ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।
ਨੋਟਸ
ਸਿਰਫ਼ ਖੋਜ ਲਈ ਵਰਤੋਂ।ਡਾਇਗਨੌਸਟਿਕ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆਵਾਂ ਵਿੱਚ ਵਰਤੋਂ ਲਈ ਨਹੀਂ।
1. ਕਰੂਡ ਪਲਾਂਟ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਜਾਂ ਡਾਇਰੈਕਟ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਲਈ, ਪ੍ਰਯੋਗ ਸ਼ੁਰੂ ਕਰਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਸ਼ੁੱਧ ਜੀਨੋਮਿਕ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਨਿਯੰਤਰਣ ਵਜੋਂ ਵਰਤਣ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ ਤਾਂ ਜੋ ਇਹ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਇਆ ਜਾ ਸਕੇ ਕਿ ਸਿਸਟਮ, ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਅਤੇ ਓਪਰੇਸ਼ਨ ਸਹੀ ਹਨ।
2. ਇਸ ਕਿੱਟ ਵਿੱਚ ਵਰਤੀ ਗਈ ਡਾਇਰੈਕਟ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਵਿੱਚ ਮਜ਼ਬੂਤ ਪਰੂਫ ਰੀਡਿੰਗ ਗਤੀਵਿਧੀ ਹੈ।ਜੇ ਟੀਏ ਕਲੋਨਿੰਗ ਕਰਨ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ, ਤਾਂ ਐਡੀਨਾਈਨ ਜੋੜਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਸ਼ੁੱਧ ਕਰਨ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।
3. ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਗਾਈਡੈਂਸ:
aਇਹ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ ਕਿ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੇ 3′ ਸਿਰੇ 'ਤੇ ਆਖਰੀ ਅਧਾਰ G ਜਾਂ C ਹੋਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।
ਬੀ.ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੇ 3′ ਸਿਰੇ 'ਤੇ ਆਖਰੀ 8 ਅਧਾਰਾਂ ਵਿੱਚ ਲਗਾਤਾਰ ਬੇਮੇਲ ਹੋਣ ਤੋਂ ਬਚਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।c.ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੇ 3′ ਸਿਰੇ 'ਤੇ ਵਾਲਪਿਨ ਬਣਤਰਾਂ ਤੋਂ ਬਚੋ।
d.ਫਾਰਵਰਡ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਅਤੇ ਰਿਵਰਸ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੇ Tm ਮੁੱਲ ਵਿੱਚ ਅੰਤਰ 1℃ ਤੋਂ ਵੱਧ ਨਹੀਂ ਹੋਣੇ ਚਾਹੀਦੇ ਹਨ ਅਤੇ Tm ਮੁੱਲ ਨੂੰ 60 ~ 72℃ ਤੱਕ ਐਡਜਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ (Tm ਮੁੱਲ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰਨ ਲਈ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਪ੍ਰੀਮੀਅਰ 5 ਦੀ ਸਿਫ਼ਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ)।
ਈ.ਵਾਧੂ ਵਾਧੂ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਕ੍ਰਮ ਜੋ ਟੈਮਪਲੇਟ ਨਾਲ ਮੇਲ ਨਹੀਂ ਖਾਂਦੇ, ਪ੍ਰਾਈਮਰ Tm ਮੁੱਲ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ ਸ਼ਾਮਲ ਨਹੀਂ ਕੀਤੇ ਜਾਣੇ ਚਾਹੀਦੇ ਹਨ।
fਇਹ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ ਕਿ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੀ GC ਸਮੱਗਰੀ 40% -60% ਹੋਵੇ।
gਪ੍ਰਾਈਮਰ ਵਿੱਚ A, G, C ਅਤੇ T ਦੀ ਸਮੁੱਚੀ ਵੰਡ ਸੰਭਵ ਤੌਰ 'ਤੇ ਬਰਾਬਰ ਹੋਣੀ ਚਾਹੀਦੀ ਹੈ।ਉੱਚ GC ਜਾਂ AT ਸਮੱਗਰੀ ਵਾਲੇ ਖੇਤਰਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨ ਤੋਂ ਬਚੋ।
h.ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੇ ਅੰਦਰ ਜਾਂ ਦੋ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ 5 ਜਾਂ ਵੱਧ ਬੇਸਾਂ ਦੇ ਪੂਰਕ ਕ੍ਰਮਾਂ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਤੋਂ ਬਚੋ ਅਤੇ ਦੋ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੇ 3′ ਸਿਰੇ 'ਤੇ 3 ਜਾਂ ਵੱਧ ਬੇਸਾਂ ਦੇ ਪੂਰਕ ਕ੍ਰਮਾਂ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਤੋਂ ਬਚੋ।
i.ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਰਨ ਲਈ NCBI BLAST ਫੰਕਸ਼ਨ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ।
