ਪ੍ਰੋਟੀਨੇਜ਼ K mNGS (ਤਰਲ)
ਪ੍ਰੋਟੀਨੇਜ਼ ਕੇ ਵਿਆਪਕ ਸਬਸਟਰੇਟ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਦੇ ਨਾਲ ਇੱਕ ਸਥਿਰ ਸੀਰੀਨ ਪ੍ਰੋਟੀਜ਼ ਹੈ।ਇਹ ਡਿਟਰਜੈਂਟ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਵਿੱਚ ਵੀ ਦੇਸੀ ਰਾਜ ਵਿੱਚ ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਨੂੰ ਘਟਾਉਂਦਾ ਹੈ।ਕ੍ਰਿਸਟਲ ਅਤੇ ਅਣੂ ਬਣਤਰ ਦੇ ਅਧਿਐਨਾਂ ਤੋਂ ਸਬੂਤ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਇੱਕ ਸਰਗਰਮ ਸਾਈਟ ਕੈਟੇਲੀਟਿਕ ਟ੍ਰਾਈਡ (ਏਐਸਪੀ) ਵਾਲੇ ਸਬਟਿਲਿਸਿਨ ਪਰਿਵਾਰ ਨਾਲ ਸਬੰਧਤ ਹੈ39-ਉਸ ਦਾ69-ਸਰ224).ਕਲੀਵੇਜ ਦੀ ਪ੍ਰਮੁੱਖ ਸਾਈਟ ਬਲੌਕ ਕੀਤੇ ਅਲਫ਼ਾ ਅਮੀਨੋ ਸਮੂਹਾਂ ਦੇ ਨਾਲ ਅਲੀਫੈਟਿਕ ਅਤੇ ਐਰੋਮੈਟਿਕ ਅਮੀਨੋ ਐਸਿਡ ਦੇ ਕਾਰਬੋਕਸਾਈਲ ਸਮੂਹ ਦੇ ਨਾਲ ਲੱਗਦੇ ਪੇਪਟਾਇਡ ਬਾਂਡ ਹੈ।ਇਹ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਇਸਦੀ ਵਿਆਪਕ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ.ਇਹ ਪ੍ਰੋਟੀਨੇਸ ਕੇ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਤੌਰ 'ਤੇ mNGS ਲਈ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ।ਦੂਜੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨੇਸ ਕੇ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ, ਇਸ ਵਿੱਚ ਉਸੇ ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਨ ਦੇ ਨਾਲ ਘੱਟ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਗੰਦਗੀ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਡਾਊਨਸਟ੍ਰੀਮ mNGS ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਬਿਹਤਰ ਢੰਗ ਨਾਲ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਸਟੋਰੇਜ ਦੀਆਂ ਸ਼ਰਤਾਂ
2 ਸਾਲ ਲਈ 2-8℃
ਨਿਰਧਾਰਨ
| ਦਿੱਖ | ਰੰਗਹੀਣ ਤੋਂ ਹਲਕਾ ਭੂਰਾ ਤਰਲ |
| ਸਰਗਰਮੀ | ≥800 U/ml |
| ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ | ≥20 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ/ਮਿਲੀ |
| ਨਿਕਸੇ | ਕੋਈ ਪਤਾ ਨਹੀਂ ਲੱਗਾ |
| DNase | ਕੋਈ ਪਤਾ ਨਹੀਂ ਲੱਗਾ |
| RNase | ਕੋਈ ਪਤਾ ਨਹੀਂ ਲੱਗਾ |
ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ
| EC ਨੰਬਰ | 3.4.21.64(ਟ੍ਰੀਟੀਰਾਚੀਅਮ ਐਲਬਮ ਤੋਂ ਮੁੜ ਸੰਜੋਗ) |
| ਆਈਸੋਇਲੈਕਟ੍ਰਿਕ ਪੁਆਇੰਟ | 7.81 |
| ਸਰਵੋਤਮ pH | 7.0- 12.0 ਚਿੱਤਰ 1 |
| ਸਰਵੋਤਮ ਤਾਪਮਾਨ | 65 ℃ ਚਿੱਤਰ 2 |
| pH ਸਥਿਰਤਾ | pH 4.5- 12.5 (25 ℃, 16 h) ਚਿੱਤਰ 3 |
| ਥਰਮਲ ਸਥਿਰਤਾ | ਹੇਠਾਂ 50 ℃ (pH 8.0, 30 ਮਿੰਟ) ਚਿੱਤਰ 4 |
| ਸਟੋਰੇਜ਼ ਸਥਿਰਤਾ | 25 ℃ 'ਤੇ 12 ਮਹੀਨਿਆਂ ਲਈ 90% ਤੋਂ ਵੱਧ ਗਤੀਵਿਧੀ |
| ਐਕਟੀਵੇਟਰ | SDS, ਯੂਰੀਆ |
| ਇਨਿਹਿਬਟਰਸ | ਡਾਇਸੋਪ੍ਰੋਪਾਈਲ ਫਲੋਰੋਫੋਸਫੇਟ;phenylmethylsulfonyl ਫਲੋਰਾਈਡ |
ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨਾਂ
1. ਜੈਨੇਟਿਕ ਡਾਇਗਨੌਸਟਿਕ ਕਿੱਟ
2. RNA ਅਤੇ DNA ਕੱਢਣ ਵਾਲੀਆਂ ਕਿੱਟਾਂ
3. ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਤੋਂ ਗੈਰ-ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਭਾਗਾਂ ਨੂੰ ਕੱਢਣਾ, ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੀਆਂ ਅਸ਼ੁੱਧੀਆਂ ਦਾ ਨਿਘਾਰ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਡੀ.ਐਨ.ਏ.ਟੀਕੇ ਅਤੇ ਹੈਪਰੀਨ ਦੀ ਤਿਆਰੀ
4. ਪਲਸਡ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰਸਿਸ ਦੁਆਰਾ ਕ੍ਰੋਮੋਸੋਮ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਤਿਆਰੀ
5. ਪੱਛਮੀ ਧੱਬਾ
6. ਵਿਟਰੋ ਨਿਦਾਨ ਵਿੱਚ ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਗਲਾਈਕੋਸਾਈਲੇਟਿਡ ਐਲਬਿਊਮਿਨ ਰੀਐਜੈਂਟਸ
ਸਾਵਧਾਨੀਆਂ
ਵਰਤੋਂ ਜਾਂ ਤੋਲਣ ਵੇਲੇ ਸੁਰੱਖਿਆ ਵਾਲੇ ਦਸਤਾਨੇ ਅਤੇ ਚਸ਼ਮੇ ਪਾਓ, ਅਤੇ ਵਰਤੋਂ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਹਵਾਦਾਰ ਰੱਖੋ।ਇਹ ਉਤਪਾਦ ਚਮੜੀ ਦੀ ਐਲਰਜੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਅਤੇ ਗੰਭੀਰ ਅੱਖਾਂ ਦੀ ਜਲਣ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਜੇਕਰ ਸਾਹ ਲਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਇਹ ਐਲਰਜੀ ਜਾਂ ਦਮੇ ਦੇ ਲੱਛਣਾਂ ਜਾਂ ਡਿਸਪਨੀਆ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਸਾਹ ਦੀ ਜਲਣ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣ ਸਕਦਾ ਹੈ.
ਯੂਨਿਟ ਦੀ ਪਰਿਭਾਸ਼ਾ
ਇੱਕ ਯੂਨਿਟ (U) ਨੂੰ 1 μmol ਪੈਦਾ ਕਰਨ ਲਈ ਕੈਸੀਨ ਨੂੰ ਹਾਈਡ੍ਰੋਲਾਈਜ਼ ਕਰਨ ਲਈ ਲੋੜੀਂਦੇ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਵਜੋਂ ਪਰਿਭਾਸ਼ਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈਹੇਠ ਲਿਖੀਆਂ ਸ਼ਰਤਾਂ ਅਧੀਨ ਟਾਈਰੋਸਿਨ ਪ੍ਰਤੀ ਮਿੰਟ।
ਰੀਐਜੈਂਟਸ ਦੀ ਤਿਆਰੀ
ਰੀਏਜੈਂਟ I: 1 ਗ੍ਰਾਮ ਦੁੱਧ ਕੈਸੀਨ ਨੂੰ 0.1M ਸੋਡੀਅਮ ਫਾਸਫੇਟ ਘੋਲ (pH 8.0) ਦੇ 50ml ਵਿੱਚ ਘੁਲਿਆ ਗਿਆ, 65-70 ℃ ਪਾਣੀ ਵਿੱਚ 15 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ ਉਬਾਲਿਆ ਗਿਆ, ਹਿਲਾ ਕੇ ਅਤੇ ਘੁਲਿਆ ਗਿਆ, ਪਾਣੀ ਦੁਆਰਾ ਠੰਢਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ, ਸੋਡੀਅਮ ਹਾਈਡ੍ਰੋਕਸਾਈਡ ਦੁਆਰਾ pH 8.0 ਵਿੱਚ ਐਡਜਸਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ, ਅਤੇ ਫਿਕਸ ਵਾਲੀਅਮ 100 ਮਿ.ਲੀ.
ਰੀਐਜੈਂਟ II: 0.1M ਟ੍ਰਾਈਕਲੋਰੋਸੈਟਿਕ ਐਸਿਡ, 0.2M ਸੋਡੀਅਮ ਐਸੀਟੇਟ, 0.3M ਐਸੀਟਿਕ ਐਸਿਡ।
ਰੀਐਜੈਂਟ III: 0.4M Na2CO3ਦਾ ਹੱਲ.
ਰੀਐਜੈਂਟ IV: ਫੋਰਿੰਟ ਰੀਐਜੈਂਟ ਨੂੰ 5 ਵਾਰ ਸ਼ੁੱਧ ਪਾਣੀ ਨਾਲ ਪੇਤਲਾ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।
ਰੀਏਜੈਂਟ V: ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਪਤਲਾ: 0.1M ਸੋਡੀਅਮ ਫਾਸਫੇਟ ਘੋਲ (pH 8.0)।
ਰੀਐਜੈਂਟ VI: ਟਾਈਰੋਸਿਨ ਘੋਲ: 0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 umol/ml ਟਾਈਰੋਸਿਨ 0.2 ਨਾਲ ਘੁਲਿਆ ਹੋਇਆM HCl.
ਵਿਧੀ
1. 0.5 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਰੀਐਜੈਂਟ I ਨੂੰ 37℃ ਤੱਕ ਪਹਿਲਾਂ ਤੋਂ ਗਰਮ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, 0.5ml ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਘੋਲ ਪਾਓ, ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਰਲਾਓ, ਅਤੇ ਇੰਕੂਵੇਟ ਕਰੋ10 ਮਿੰਟ ਲਈ 37℃।
2. ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ 1 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਰੀਐਜੈਂਟ II ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ, ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮਿਲਾਓ, ਅਤੇ 30 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕਰਨਾ ਜਾਰੀ ਰੱਖੋ।
3. ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਗੇਟ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦਾ ਹੱਲ.
4. 0.5ml ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਲਓ, 2.5ml ਰੀਐਜੈਂਟ III, 0.5ml ਰੀਐਜੈਂਟ IV ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ, ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮਿਲਾਓ ਅਤੇ 37℃ 'ਤੇ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕਰੋ।30 ਮਿੰਟ ਲਈ.
5. ਓ.ਡੀ660OD ਵਜੋਂ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ1;ਖਾਲੀ ਕੰਟਰੋਲ ਗਰੁੱਪ: 0.5ml ਰੀਐਜੈਂਟ V ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਨੂੰ ਬਦਲਣ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈOD ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ ਹੱਲ660OD ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ2, ΔOD=OD1-ਓ.ਡੀ2.
6. L-ਟਾਈਰੋਸਾਈਨ ਸਟੈਂਡਰਡ ਕਰਵ: 0.5mL ਵੱਖ-ਵੱਖ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ L-ਟਾਈਰੋਸਾਈਨ ਘੋਲ, 2.5mL ਰੀਏਜੈਂਟ III, 5mL ਸੈਂਟਰੀਫਿਊਜ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ 0.5mL ਰੀਐਜੈਂਟ IV, 30 ਮਿੰਟ ਲਈ 37℃ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕਰੋ, OD ਲਈ ਖੋਜੋ660L-ਟਾਈਰੋਸਾਈਨ ਦੀ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਲਈ, ਫਿਰ ਮਿਆਰੀ ਕਰਵ Y=kX+b ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ, ਜਿੱਥੇ Y L-ਟਾਈਰੋਸਿਨ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਹੈ, X OD ਹੈ600.
ਗਣਨਾ
2: ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਘੋਲ ਦੀ ਕੁੱਲ ਮਾਤਰਾ (mL)
0.5: ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਘੋਲ ਦੀ ਮਾਤਰਾ (mL)
0.5: ਕ੍ਰੋਮੋਜਨਿਕ ਨਿਰਧਾਰਨ (mL) ਵਿੱਚ ਵਰਤੀ ਜਾਂਦੀ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਤਰਲ ਮਾਤਰਾ
10: ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਦਾ ਸਮਾਂ (ਮਿੰਟ)
Df: ਪਤਲਾ ਮਲਟੀਪਲ
C: ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ (mg/mL)
ਹਵਾਲੇ
1. Wieger U & Hilz H. FEBS Lett.(1972);23:77.
2. ਵਾਈਗਰ ਯੂ ਐਂਡ ਹਿਲਜ਼ ਐੱਚ. ਬਾਇਓਕੈਮ।ਬਾਇਓਫਿਜ਼.Res.ਕਮਿਊਨ।(1971);44:513.
3. ਹਿਲਜ਼, ਐੱਚ.ਅਤੇ ਬਾਕੀ.,ਯੂਰੋ.ਜੇ. ਬਾਇਓਕੈਮ(1975);56:103-108.
4. ਸੈਮਬਰੂਕ ਜੇet al., ਅਣੂ ਕਲੋਨਿੰਗ: ਇੱਕ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾ ਮੈਨੂਅਲ, ਦੂਜਾ ਐਡੀਸ਼ਨ, ਕੋਲਡ ਸਪਰਿੰਗ ਹਾਰਬਰਲੈਬਾਰਟਰੀ ਪ੍ਰੈਸ, ਕੋਲਡ ਸਪਰਿੰਗ ਹਾਰਬਰ (1989)।
ਅੰਕੜੇ
ਅੰਜੀਰ.1 ਸਰਵੋਤਮ pH
100mm ਬਫਰ ਹੱਲ: pH6.0-8.0, ਨਾ-ਫਾਸਫੇਟ;pH8.0-9.0, Tris-HCl;pH9.0-12.5, Glycine-NaOH. ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ: 1mg/mL
Fig.2 ਸਰਵੋਤਮ ਤਾਪਮਾਨ
20 ਐਮਐਮ ਕੇ-ਫਾਸਫੇਟ ਬਫਰ pH 8.0 ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ।ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ: 1 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ / ਮਿ.ਲੀ
Fig.3 pH ਸਥਿਰਤਾ
25 ℃, 50 ਐਮਐਮ ਬਫਰ ਹੱਲ ਦੇ ਨਾਲ 16 h-ਇਲਾਜ: pH 4.5- 5.5, ਐਸੀਟੇਟ;pH 6.0-8.0, ਨਾ-ਫਾਸਫੇਟ;pH 8.0-9.0, ਟ੍ਰਿਸ-ਐਚ.ਸੀ.ਐਲ.pH 9.0- 12.5, Glycine-NaOH.ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ: 1 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ / ਮਿ.ਲੀ
Fig.4 ਥਰਮਲ ਸਥਿਰਤਾ
50 ਐਮਐਮ ਟ੍ਰਿਸ-ਐਚਸੀਐਲ ਬਫਰ, pH 8.0 ਨਾਲ 30 ਮਿੰਟ-ਇਲਾਜ।ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ: 1 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ / ਮਿ.ਲੀ
Fig.5 ਸਟੋਰੇਜ਼ ਸਥਿਰਤਾty at 25℃
