Rnase ਇਨਿਹਿਬਟਰ
ਮੂਰੀਨ ਆਰਨੇਸ ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਇੱਕ ਰੀਕੌਂਬੀਨੈਂਟ ਮਿਊਰੀਨ ਆਰਨੇਸ ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਹੈ ਜੋ ਈਕੋਲੀ ਤੋਂ ਪ੍ਰਗਟ ਅਤੇ ਸ਼ੁੱਧ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ।ਇਹ ਗੈਰ-ਸਹਿਯੋਗੀ ਬੰਧਨ ਦੁਆਰਾ 1:1 ਅਨੁਪਾਤ ਵਿੱਚ RNase A, B ਜਾਂ C ਨਾਲ ਬੰਨ੍ਹਦਾ ਹੈ, ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ ਤਿੰਨ ਐਨਜ਼ਾਈਮਾਂ ਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਰੋਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ RNA ਨੂੰ ਪਤਨ ਤੋਂ ਬਚਾਉਂਦਾ ਹੈ।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਇਹ Aspergillus ਤੋਂ RNase 1, RNase T1, S1 ਨਿਊਕਲੀਜ਼, RNase H ਜਾਂ RNase ਦੇ ਵਿਰੁੱਧ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਨਹੀਂ ਹੈ।ਮੂਰੀਨ ਆਰਨੇਸ ਇਨ੍ਹੀਬੀਟਰ ਦੀ ਜਾਂਚ RT-PCR, RT-qPCR ਅਤੇ IVT mRNA ਦੁਆਰਾ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ, ਅਤੇ ਇਹ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਵਪਾਰਕ ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟਸ, ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਸ ਅਤੇ ਆਰਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਸ ਦੇ ਅਨੁਕੂਲ ਸੀ।
ਮਨੁੱਖੀ RNase ਇਨਿਹਿਬਟਰਸ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ, ਮਿਊਰੀਨ RNase ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਵਿੱਚ ਦੋ ਸਿਸਟੀਨ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਜੋ ਆਕਸੀਕਰਨ ਲਈ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਜੋ ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਨੂੰ ਅਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਕਰਨ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣਦਾ ਹੈ।ਜੋ ਇਸਨੂੰ DTT ਦੀ ਘੱਟ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ (1 mM ਤੋਂ ਘੱਟ) 'ਤੇ ਸਥਿਰ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ।ਇਹ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਇਸਨੂੰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਵਿੱਚ ਵਰਤਣ ਲਈ ਢੁਕਵੀਂ ਬਣਾਉਂਦੀ ਹੈ ਜਿੱਥੇ ਡੀਟੀਟੀ ਦੀ ਉੱਚ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੇ ਉਲਟ ਹੈ (ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਰੀਅਲ-ਟਾਈਮ RT-PCR)।
Aਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨ
ਇਸ ਉਤਪਾਦ ਨੂੰ ਕਿਸੇ ਵੀ ਪ੍ਰਯੋਗ ਵਿੱਚ ਵਿਆਪਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਜਿੱਥੇ RNA ਦੇ ਵਿਗਾੜ ਤੋਂ ਬਚਣ ਲਈ RNase ਦਖਲਅੰਦਾਜ਼ੀ ਸੰਭਵ ਹੈ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ:
1.cDNA, RT-PCR, RT-qPCR, ਆਦਿ ਦੇ ਪਹਿਲੇ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਦਾ ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ।
2.ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਟ੍ਰਾਂਸਲੇਸ਼ਨ/ਅਨੁਵਾਦ (ਜਿਵੇਂ, ਵਿਟਰੋ ਵਾਇਰਲ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਵਿੱਚ) ਦੌਰਾਨ ਆਰਐਨਏ ਨੂੰ ਪਤਨ ਤੋਂ ਬਚਾਉਂਦਾ ਹੈ।
3.ਆਰਐਨਏ ਵੱਖ ਹੋਣ ਅਤੇ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਆਰਨੇਜ਼ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦੀ ਰੋਕਥਾਮ.
ਸਟੋਰੇਜ ਦੀਆਂ ਸ਼ਰਤਾਂ
ਉਤਪਾਦ ਨੂੰ -25～-15 ℃ 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, 2 ਸਾਲਾਂ ਲਈ ਵੈਧ ਹੈ।
ਸਟੋਰੇਜ ਬਫਰ
50 mM KCl, 20 mM HEPES-KOH (pH 7.6, 25 ℃), 8 mM DTT ਅਤੇ 50% ਗਲਾਈਸਰੋਲ।
ਯੂਨਿਟ ਦੀ ਪਰਿਭਾਸ਼ਾ
ਰਿਬੋਨਿਊਕਲੀਜ਼ ਏ ਦੇ 5ng ਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ 50% ਦੁਆਰਾ ਰੋਕਣ ਲਈ ਲੋੜੀਂਦੇ ਮਿਊਰੀਨ RNase ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਇੱਕ ਯੂਨਿਟ (U) ਵਜੋਂ ਪਰਿਭਾਸ਼ਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦਾ ਅਣੂ ਭਾਰ
ਮੂਰੀਨ ਆਰਨੇਸ ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਦਾ ਅਣੂ ਭਾਰ 50 kDa ਹੈ।
ਗੁਣਵੱਤਾ ਕੰਟਰੋਲ
Exonuclease ਸਰਗਰਮੀ:
16 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ 37℃ 'ਤੇ 1 μg λ -ਹਿੰਦ III ਡਾਈਜੈਸਟ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਨਾਲ 40 U ਦਾ ਮਿਊਰੀਨ ਆਰਨੇਸ ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਐਗਰੋਸ ਜੈੱਲ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਦੁਆਰਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੇ ਅਨੁਸਾਰ ਕੋਈ ਵੀ ਗਿਰਾਵਟ ਨਹੀਂ ਦਿੰਦਾ।
ਐਂਡੋਨਿਊਕਲੀਜ਼ ਗਤੀਵਿਧੀ:
16 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ 37℃ 'ਤੇ 1μg λ DNA ਦੇ ਨਾਲ 40 U ਦੇ ਮਿਊਰੀਨ ਆਰਨੇਜ਼ ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਐਗਰੋਸ ਜੈੱਲ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਦੁਆਰਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੇ ਅਨੁਸਾਰ ਕੋਈ ਵੀ ਗਿਰਾਵਟ ਨਹੀਂ ਦਿੰਦਾ।
ਨਿਕਿੰਗ ਸਰਗਰਮੀ:
16 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ 37℃ 'ਤੇ 1μg pBR322 ਦੇ ਨਾਲ murine RNase ਇਨ੍ਹੀਬੀਟਰ ਦਾ 40U ਐਗਰੋਸ ਜੈੱਲ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਦੁਆਰਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੇ ਅਨੁਸਾਰ ਕੋਈ ਗਿਰਾਵਟ ਨਹੀਂ ਦਿੰਦਾ।
RNase ਸਰਗਰਮੀ:
37℃ 'ਤੇ 4h ਲਈ 1.6μg MS2 RNA ਦੇ ਨਾਲ ਮਿਊਰੀਨ RNase ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਦਾ 40U ਐਗਰੋਸ ਜੈੱਲ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਦੁਆਰਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੇ ਅਨੁਸਾਰ ਕੋਈ ਵੀ ਗਿਰਾਵਟ ਨਹੀਂ ਦਿੰਦਾ।
E.ਕੋਲੀ ਡੀਐਨਏ:
E. coli 16S rRNA ਟਿਕਾਣੇ ਲਈ ਖਾਸ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੇ ਨਾਲ TaqMan qPCR ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਈ. ਕੋਲੀ ਜੀਨੋਮਿਕ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਲਈ 40 ਯੂ ਮੂਰੀਨ ਆਰਨੇਸ ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਈ. ਕੋਲੀ ਜੀਨੋਮਿਕ ਡੀਐਨਏ ਗੰਦਗੀ ≤ 0.1 pg/40 U ਹੈ।
Notes
1. ਹਿੰਸਕ ਓਸੀਲੇਸ਼ਨ ਜਾਂ ਹਿਲਾਉਣਾ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਨੂੰ ਅਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲਤਾ ਵੱਲ ਲੈ ਜਾਵੇਗਾ।
2. ਇਸ ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਦੀ ਸਰਵੋਤਮ ਤਾਪਮਾਨ ਰੇਂਜ 25-55 ℃ ਸੀ, ਅਤੇ ਇਹ 65 ℃ ਅਤੇ ਇਸ ਤੋਂ ਵੱਧ 'ਤੇ ਅਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਸੀ।
3. RNase H, RNase 1 ਅਤੇ RNase T1 ਦੀਆਂ ਗਤੀਵਿਧੀਆਂ ਨੂੰ ਮਿਊਰੀਨ RNase ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਦੁਆਰਾ ਰੋਕਿਆ ਨਹੀਂ ਗਿਆ ਸੀ।
4. RNase ਗਤੀਵਿਧੀ ਦੀ ਰੋਕਥਾਮ pH (pH 5-9 ਸਾਰੇ ਸਰਗਰਮ ਸਨ) ਦੀ ਇੱਕ ਵਿਸ਼ਾਲ ਸ਼੍ਰੇਣੀ ਵਿੱਚ ਪਾਈ ਗਈ ਸੀ, ਅਤੇ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਗਤੀਵਿਧੀ pH 7-8 'ਤੇ ਦੇਖੀ ਗਈ ਸੀ।
5.ਕਿਉਂਕਿ ਰਿਬੋਨਿਊਕਲੀਜ਼ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਿਨਾਸ਼ਕਾਰੀ ਹਾਲਤਾਂ ਵਿੱਚ ਸਰਗਰਮੀ ਨੂੰ ਬਰਕਰਾਰ ਰੱਖਦੇ ਹਨ, ਇਸ ਲਈ RNase ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਅਣੂਆਂ ਨੂੰ ਵਿਗਾੜਨ ਤੋਂ ਬਚਣ ਲਈ ਧਿਆਨ ਰੱਖਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ ਜੋ ਰਿਬੋਨਿਊਕਲੀਜ਼ ਨਾਲ ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਹਨ।ਸਰਗਰਮ ਰਾਈਬੋਨਿਊਕਲੀਜ਼ ਦੀ ਰਿਹਾਈ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ, 50 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਤੋਂ ਵੱਧ ਤਾਪਮਾਨ ਅਤੇ ਯੂਰੀਆ ਜਾਂ ਹੋਰ ਡੀਨੈਚਰਿੰਗ ਏਜੰਟਾਂ ਦੀ ਉੱਚ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਤੋਂ ਪਰਹੇਜ਼ ਕਰਨਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।
