ਮਲਟੀਪਲੈਕਸ ਇੱਕ ਕਦਮ RT-qPCR ਪ੍ਰੀਮਿਕਸ-UNG
ਬਿੱਲੀ ਨੰਬਰ: HCB5145A
ਮਲਟੀਪਲੈਕਸ ਵਨ ਸਟੈਪ ਆਰਟੀ-ਕਿਊਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰੋਬ ਕਿੱਟ (ਯੂਡੀਜੀ ਪਲੱਸ) ਇੱਕ ਮਲਟੀਪਲੈਕਸ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਪੀਸੀਆਰ ਕਿੱਟ ਹੈ ਜੋ ਕਿ ਆਰਐਨਏ 'ਤੇ ਆਧਾਰਿਤ ਹੈ।ਪ੍ਰਯੋਗ ਦੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਵਿੱਚ, ਉਲਟ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਅਤੇ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਪੀਸੀਆਰ ਇੱਕੋ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ, ਜਿਸ ਨੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਕਾਰਵਾਈ ਨੂੰ ਸਰਲ ਬਣਾਇਆ ਅਤੇ ਗੰਦਗੀ ਦੇ ਜੋਖਮ ਨੂੰ ਘਟਾਇਆ।ਇਸ ਕਿੱਟ ਵਿੱਚ, ਪਹਿਲੇ ਸਟ੍ਰੈਂਡ cDNA ਨੂੰ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨਾਲ ਤਾਪ-ਰੋਧਕ ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟੇਜ ਦੁਆਰਾ ਸੰਸ਼ਲੇਸ਼ਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਹੌਟਸਟਾਰਟ ਟੈਗ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੁਆਰਾ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਧਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਕਿੱਟ ਵਿੱਚ ਮੁੱਖ ਤੌਰ 'ਤੇ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਐਮਪੀ ਬਫਰ, ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਮਿਸ਼ਰਣ, ਆਦਿ ਸ਼ਾਮਲ ਹੁੰਦੇ ਹਨ। ਬਫਰ ਹੱਲ ਵਿੱਚ ਪਹਿਲਾਂ ਹੀ ਐਮ.ਜੀ.2+ਅਤੇ dNTP.ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਉਹ ਕਾਰਕ ਜੋ ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਰੋਕ ਸਕਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਮਲਟੀਪਲ qPCR ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਦੀ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨੂੰ ਬਿਹਤਰ ਬਣਾ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਜੋੜੇ ਗਏ ਹਨ, ਜੋ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾ ਸਕਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਮਲਟੀਪਲ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਨੂੰ ਪੂਰਾ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ।dUTP/UDG ਸਿਸਟਮ ਨੂੰ ਐਰੋਸੋਲ ਗੰਦਗੀ ਦੇ ਜੋਖਮ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਰੋਕਣ ਲਈ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।
ਕੰਪੋਨੈਂਟਸ
1. ਬਫਰ
2. ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਮਿਕਸ
ਨਿਰਧਾਰਨ
| ਹਾਟ ਸਟਾਰਟ | ਬਿਲਟ-ਇਨ ਗਰਮ ਸ਼ੁਰੂਆਤ |
| ਖੋਜ ਵਿਧੀ | ਪ੍ਰਾਈਮਰ-ਪ੍ਰੋਬ ਖੋਜ |
| ਪੀਸੀਆਰ ਵਿਧੀ | ਇੱਕ ਕਦਮ RT-qPCR |
| ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ | ਟਾਕ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ |
| ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਕਿਸਮ | ਡੀ.ਐਨ.ਏ |
ਸਟੋਰੇਜ ਦੀਆਂ ਸ਼ਰਤਾਂ
ਉਤਪਾਦ ਨੂੰ ਸੁੱਕੀ ਬਰਫ਼ ਨਾਲ ਭੇਜਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਇਸਨੂੰ 1 ਸਾਲ ਲਈ -25~-15℃ 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਇਸ ਨੂੰ ਅਕਸਰ ਬਚਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈਜੰਮਣਾ-ਪਿਘਲਣਾ.ਇਹ ਵੱਖਰੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਬਚਾਉਣ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ.
ਹਦਾਇਤਾਂ
1.ਪ੍ਰਤੀਕਰਮ ਸਿਸਟਮ
| ਕੰਪੋਨੈਂਟਸ | ਵਾਲੀਅਮ (μL) | ਅੰਤਮ ਇਕਾਗਰਤਾ |
| 2 × MP ਬਫਰ | 12.5 | 1× |
| ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਮਿਕਸ | 1 | - |
| ਪ੍ਰਾਈਮਰ/ਪ੍ਰੋਬ ਮਿਸ਼ਰਣ (2.5 μM) | 3 | 0.3μM |
| ਟੈਂਪਲੇਟ RNA | 1-10 | - |
| RNase ਮੁਫ਼ਤ H2O | 25 ਤੱਕ | - |
ਨੋਟ:
ਵਰਤੋਂ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮਿਲਾਉਣਾ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਓ, ਹਿੰਸਕ ਵਾਈਬ੍ਰੇਸ਼ਨ ਦੇ ਕਾਰਨ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਬੁਲਬਲੇ ਤੋਂ ਬਚੋ।
aਪ੍ਰਾਈਮਰ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ: ਮਲਟੀਪਲੈਕਸ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਸਮੇਤ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਮਿਸ਼ਰਣ, ਸਥਿਤੀ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ ਸਰਵੋਤਮ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 0.l ਅਤੇ 1.0μM ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਬੀ.ਪ੍ਰੋਬ ਇਕਾਗਰਤਾ: ਮਲਟੀਪਲੈਕਸ ਪ੍ਰੋਬ ਲੇਬਲਿੰਗ ਫਰਕ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਗਰੁੱਪ ਸਮੇਤ ਪ੍ਰੋਬ ਮਿਸ਼ਰਣ, ਸਥਿਤੀ 'ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦਾ ਹੈ ਕਿ ਸਰਵੋਤਮ ਜਾਂਚ ਇਕਾਗਰਤਾ 0.05 ਅਤੇ 0.5μM ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਹੋ ਸਕਦੀ ਹੈ।
c.ਟੈਂਪਲੇਟ ਪਤਲਾ ਕਰਨਾ: qPCR ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਹੈ ਅਤੇ ਇਸ ਨੂੰ ਟੈਂਪਲੇਟ ਨੂੰ ਪਤਲਾ ਕਰਨ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਕੰਟਰੋਲ Ct ਮੁੱਲ 20 ਅਤੇ 35 ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਢੁਕਵਾਂ ਹੈ।
d.ਸਿਸਟਮ ਦੀ ਤਿਆਰੀ: ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਨਿਊਕਲੀਜ਼ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ ਦੇ ਬਿਨਾਂ ਅਲਟਰਾ ਕਲੀਨ ਵਰਕਿੰਗ ਟੇਬਲ, ਅਤੇ ਪਾਈਪਟਰ ਅਤੇ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ ਤਿਆਰ ਕਰੋ;ਫਿਲਟਰ ਤੱਤ ਦੇ ਨਾਲ ਬੰਦੂਕ ਦੇ ਸਿਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਕਰਾਸ ਗੰਦਗੀ ਅਤੇ ਐਰੋਸੋਲ ਗੰਦਗੀ ਤੋਂ ਬਚੋ।
2. ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਸਾਈਕਲਿੰਗਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ
| ਸਾਈਕਲ ਕਦਮ | ਟੈਂਪ | ਸਮਾਂ | ਸਾਈਕਲ |
| ਉਲਟਾ ਪ੍ਰਤੀਲਿਪੀ | 50℃a | 20 ਮਿੰਟ | 1 |
| ਅਰੰਭਕ-ਵਿਕਾਰ | 95℃ | 5 ਮਿੰਟ | 1 |
| ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ | 95℃ | 15 ਸਕਿੰਟ |
40-45 |
| 60℃ b | 30 ਸਕਿੰਟ c |
ਨੋਟ:
aਉਲਟਾ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ: ਤਾਪਮਾਨ 42°C ਜਾਂ 50°C ਦੀ ਚੋਣ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਬੀ.ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ: ਤਾਪਮਾਨ ਨੂੰ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਕੀਤੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੇ Tm ਮੁੱਲ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਐਡਜਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।
c.ਫਲੋਰਸੈਂਸ ਸਿਗਨਲ ਪ੍ਰਾਪਤੀ: ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਇੰਸਟ੍ਰੂਮੈਂਟ ਮੈਨੂਅਲ ਦੀਆਂ ਜ਼ਰੂਰਤਾਂ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਸੈਟ ਕਰੋ।
ਨੋਟਸ
ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਆਪਣੀ ਸਿਹਤ ਅਤੇ ਸੁਰੱਖਿਆ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਜ਼ਰੂਰੀ PPE, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਲੈਬ ਕੋਟ ਅਤੇ ਦਸਤਾਨੇ ਪਹਿਨੋ।
