ਇੱਕ ਕਦਮ RT-qPCR SYBR ਗ੍ਰੀਨ ਪ੍ਰੀਮਿਕਸ
ਬਿੱਲੀ ਨੰਬਰ: HCB5140A
ਵਨ ਸਟੈਪ RT-qPCR ਸਾਈਬਰ ਗ੍ਰੀਨ ਪ੍ਰੀਮਿਕਸ SYBR ਗ੍ਰੀਨ I ਡਾਈ 'ਤੇ ਆਧਾਰਿਤ ਫਲੋਰਸੈਂਸ ਮਾਪ ਲਈ ਹੈ।ਜੀਨ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ, ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਅਤੇ qPCR ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਨੂੰ ਇੱਕ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ ਪੂਰਾ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਵਾਰ-ਵਾਰ ਕੈਪ-ਓਪਨਿੰਗ ਅਤੇ ਪਾਈਪਟਿੰਗ ਓਪਰੇਸ਼ਨਾਂ ਦੀ ਲੋੜ ਨੂੰ ਖਤਮ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਪਰਖ ਦੀ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਵਿੱਚ ਬਹੁਤ ਸੁਧਾਰ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਗੰਦਗੀ ਦੇ ਜੋਖਮ ਨੂੰ ਘਟਾਉਂਦਾ ਹੈ।RNA ਨਮੂਨਿਆਂ ਲਈ, ਕਿੱਟ ਕੁਸ਼ਲ ਸੀਡੀਐਨਏ ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਲਈ ਗਰਮੀ-ਰੋਧਕ ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟੇਜ ਅਤੇ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਵਾਧਾ ਲਈ ਹੌਟਸਟਾਰਟ ਟਾਕ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਨੂੰ ਨਿਯੁਕਤ ਕਰਦੀ ਹੈ।ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਬਫਰ ਸਿਸਟਮ ਦੇ ਤਹਿਤ, ਕਿੱਟ ਦੀ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਪ੍ਰਗਟ ਕੀਤੇ ਟੀਚਿਆਂ ਲਈ 0.1 pg ਅਤੇ ਮੱਧਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪ੍ਰਗਟ ਕੀਤੇ ਟੀਚਿਆਂ ਲਈ 1 pg ਤੱਕ ਹੋ ਸਕਦੀ ਹੈ।ਇਹ ਕਿੱਟ ਡੀਐਨਏ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੇ ਪ੍ਰਸਾਰ ਅਤੇ ਮਾਤਰਾ ਲਈ ਢੁਕਵੀਂ ਹੈ।ਇਹ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਪੌਦਿਆਂ ਅਤੇ ਜਾਨਵਰਾਂ ਦੇ ਨਮੂਨਿਆਂ, ਸੈੱਲਾਂ ਅਤੇ ਸੂਖਮ ਜੀਵਾਂ ਤੋਂ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਦੀ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਖੋਜ ਅਤੇ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਸਮਰੱਥ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ।
ਕੰਪੋਨੈਂਟਸ
| No | ਨਾਮ | ਵਾਲੀਅਮ | ਵਾਲੀਅਮ |
| 1 | ਐਡਵਾਂਸਡ ਬਫਰ | 250 μL | 2×1.25 ਮਿ.ਲੀ |
| 2 | ਐਡਵਾਂਸਡ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਮਿਕਸ | 20 μL | 200 μL |
| 3 | RNase ਮੁਫ਼ਤ ਐੱਚ2O | 250 μL | 2×1.25 ਮਿ.ਲੀ |
ਸਟੋਰੇਜ ਦੀਆਂ ਸ਼ਰਤਾਂ
ਇਸ ਉਤਪਾਦ ਨੂੰ 1 ਸਾਲ ਲਈ ਰੋਸ਼ਨੀ ਤੋਂ ਦੂਰ -25~-15℃ 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।
ਹਦਾਇਤਾਂ
1. ਪ੍ਰਤੀਕਰਮ ਸਿਸਟਮ ਸੰਰਚਨਾd
| ਕੰਪੋਨੈਂਟਸ | ਵਾਲੀਅਮ (μL) | ਵਾਲੀਅਮ (μL) | ਅੰਤਮ ਇਕਾਗਰਤਾ |
| ਐਡਵਾਂਸਡ ਬਫਰ | 12.5 | 25 | 1× |
| ਐਡਵਾਂਸਡ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਮਿਕਸ | 1 | 2 | - |
| ਫਾਰਵਰਡ ਪ੍ਰਾਈਮਰ (10 μmol/L)a | 0.5 | 1 | 0.2 μmol/L |
| ਉਲਟਾ ਪ੍ਰਾਈਮਰ (10 μmol/L)a | 0.5 | 1 | 0.2 μmol/L |
| RNA ਟੈਂਪਲੇਟb | X | X | - |
| RNase ਮੁਫ਼ਤ ਐੱਚ2ਓc | 25 ਤੱਕ | 50 ਤੱਕ | - |
ਨੋਟ:
1) ਏ.ਟੀਉਸ ਦੀ ਅੰਤਮ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 0.2 μmol/L ਸੀ, ਜਿਸ ਨੂੰ 0.1 ਅਤੇ 1μmol/L ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਵੀ ਢੁਕਵਾਂ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
2) ਬੀ.1pg-1μg ਦੀ ਰੇਂਜ ਵਿੱਚ ਕੁੱਲ RNA ਦੇ ਨਾਲ, ਰੀਐਜੈਂਟ ਬਹੁਤ ਹੀ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਹੈ, ਅਤੇ ਮਨੁੱਖੀ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੀ ਜਾਂਚ ਨੇ 1 pg-100 ng ਦਾ ਇੱਕ ਅਨੁਕੂਲ ਇੰਪੁੱਟ ਦਿਖਾਇਆ, ਜੋ ਕਿ 15-30 ਦੀ ਰੇਂਜ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਸਮੁੱਚੇ Ct ਮੁੱਲ ਲਈ ਉਚਿਤ ਹੈ।
3) ਸੀ.ਟੀਚਾ ਜੀਨ ਪ੍ਰਸਾਰਣ ਦੀ ਵੈਧਤਾ ਅਤੇ ਪ੍ਰਜਨਨਯੋਗਤਾ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਣ ਲਈ 20μL ਜਾਂ 50μL ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।
4) ਡੀ.ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਅਤਿ-ਸਾਫ਼ ਬੈਂਚ ਵਿੱਚ ਤਿਆਰ ਕਰੋ ਅਤੇ ਨਿਊਕਲੀਜ਼ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ-ਮੁਕਤ ਟਿਪਸ ਅਤੇ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਟਿਊਬਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ;ਫਿਲਟਰ ਕਾਰਤੂਸ ਵਾਲੇ ਟਿਪਸ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਕਰਾਸ ਗੰਦਗੀ ਅਤੇ ਐਰੋਸੋਲ ਗੰਦਗੀ ਤੋਂ ਬਚੋ।
2.ਪ੍ਰਤੀਕਰਮ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮ
| ਸਾਈਕਲ ਕਦਮ | ਟੈਂਪ | ਸਮਾਂ | ਸਾਈਕਲ |
| ਉਲਟਾ ਪ੍ਰਤੀਲਿਪੀ | 50℃a | 6 ਮਿੰਟ | 1 |
| ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਵਿਕਾਰ | 95℃ | 5 ਮਿੰਟ | 1 |
| ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ | 95℃ | 15 ਸਕਿੰਟ | 40 |
| 60℃b | 30 ਸਕਿੰਟ | ||
| ਪਿਘਲਣ ਵਾਲੀ ਕਰਵ ਅਵਸਥਾ | ਇੰਸਟ੍ਰੂਮੈਂਟ ਡਿਫੌਲਟ | 1 | |
ਨੋਟ:
1) ਏ.ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਤਾਪਮਾਨ ਨੂੰ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਲੋੜਾਂ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ 50-55 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਚੁਣਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਡੀਐਨਏ ਨਮੂਨਿਆਂ ਲਈ, ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਨੂੰ ਛੱਡਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
2) ਬੀ.ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਮਾਮਲਿਆਂ ਵਿੱਚ ਐਨੀਲਿੰਗ/ਐਕਸਟੇਂਸ਼ਨ ਤਾਪਮਾਨ ਨੂੰ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਟੀਐਮ ਮੁੱਲ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਐਡਜਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, 60°C ਦੀ ਸਿਫ਼ਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।
ਨੋਟਸ
1. ਇਹ ਉਤਪਾਦ ਸਿਰਫ਼ ਖੋਜ ਵਰਤੋਂ ਲਈ ਹੈ।
2. ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਆਪਣੀ ਸੁਰੱਖਿਆ ਲਈ, ਲੈਬ ਕੋਟ ਅਤੇ ਡਿਸਪੋਜ਼ੇਬਲ ਦਸਤਾਨੇ ਨਾਲ ਕੰਮ ਕਰੋ।
