ਰੋਬਸਟਾਰਟ ਟਾਕ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼
ਰੋਬਸਟਾਰਟ ਟਾਕ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਇੱਕ ਗਰਮ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਹੈ।ਇਹ ਉਤਪਾਦ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਦੀ ਤਿਆਰੀ ਅਤੇ ਪ੍ਰਸਾਰਣ ਦੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਜਾਂ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਐਗਰੀਗੇਸ਼ਨ ਦੇ ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਐਨੀਲਿੰਗ ਕਾਰਨ ਹੋਣ ਵਾਲੀ ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਨੂੰ ਬਿਹਤਰ ਤਰੀਕੇ ਨਾਲ ਰੋਕ ਨਹੀਂ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਇਸ ਲਈ, ਇਸਦੀ ਸ਼ਾਨਦਾਰ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਹੈ ਅਤੇ ਘੱਟ ਤਵੱਜੋ ਵਾਲੇ ਟੈਂਪਲੇਟਾਂ ਦੇ ਪ੍ਰਸਾਰ ਲਈ ਵਧੇਰੇ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਇਹ ਮਲਟੀਪਲੈਕਸਡ ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਲਈ ਢੁਕਵਾਂ ਹੈ।ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਇਸ ਉਤਪਾਦ ਦੀ ਬਹੁਤ ਵਧੀਆ ਵਰਤੋਂਯੋਗਤਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਕਿਸਮਾਂ ਦੀਆਂ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਵਿੱਚ ਸਥਿਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਨਤੀਜੇ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਜਾ ਸਕਦੇ ਹਨ।
ਕੰਪੋਨੈਂਟਸ
1.5 U/μL ਰੋਬਸਟਾਰਟ ਟਾਕ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼
2.10 × PCR ਬਫਰ II (Mg²+ ਮੁਫ਼ਤ) (ਵਿਕਲਪਿਕ)
3.25 mM MgCl2(ਵਿਕਲਪਿਕ)
* 10 × PCR ਬਫਰ II (Mg²+ ਮੁਫ਼ਤ) ਵਿੱਚ dNTP ਅਤੇ Mg²+ ਸ਼ਾਮਲ ਨਹੀਂ ਹਨ, ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ dNTP ਅਤੇ MgCl ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ2ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਨੂੰ ਤਿਆਰ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ.
ਸਿਫ਼ਾਰਿਸ਼ ਕੀਤੀਆਂ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨਾਂ
1.ਤੇਜ਼ ਵਾਧਾ.
2.ਮਲਟੀਪਲ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ.
3.ਖੂਨ, ਫੰਬੇ, ਅਤੇ ਹੋਰ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦਾ ਸਿੱਧਾ ਪ੍ਰਸਾਰਣ।
4.ਸਾਹ ਦੀਆਂ ਬਿਮਾਰੀਆਂ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣਾ.
ਸਟੋਰੇਜ ਦੀ ਸਥਿਤੀ
-20 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਲਈ ਸਟੋਰੇਜ ਲਈ, ਵਰਤੋਂ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮਿਲਾਇਆ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ, ਵਾਰ-ਵਾਰ ਜੰਮਣ ਤੋਂ ਪਰਹੇਜ਼ ਕਰੋ।
*ਜੇਕਰ ਫਰਿੱਜ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਵਰਖਾ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਇਹ ਆਮ ਗੱਲ ਹੈ;ਮਿਸ਼ਰਣ ਅਤੇ ਵਰਤੋਂ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ ਨੂੰ ਸੰਤੁਲਿਤ ਕਰਨ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।
ਯੂਨਿਟ ਪਰਿਭਾਸ਼ਾ
ਇੱਕ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਇਕਾਈ (U) ਨੂੰ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਵਜੋਂ ਪਰਿਭਾਸ਼ਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ ਜੋ 10 nmol ਡੀਆਕਸਾਈਰਾਈਬੋਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡ ਨੂੰ ਐਸਿਡ-ਅਘੁਲਣਸ਼ੀਲ ਪਦਾਰਥ ਵਿੱਚ 74°C 'ਤੇ 30 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ ਟੈਂਪਲੇਟ/ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਵਜੋਂ ਐਕਟੀਵੇਟਿਡ ਸੈਲਮਨ ਸਪਰਮ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰਦਾ ਹੈ।
ਗੁਣਵੱਤਾ ਕੰਟਰੋਲ
1.SDS-PAGE ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਟਿਕ ਸ਼ੁੱਧਤਾ 98% ਤੋਂ ਵੱਧ।
2.ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ, ਬੈਚ-ਟੂ-ਬੈਚ ਕੰਟਰੋਲ, ਸਥਿਰਤਾ।
3.ਕੋਈ ਐਕਸੋਜੇਨਸ ਨਿਊਕਲੀਜ਼ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨਹੀਂ, ਕੋਈ ਐਕਸੋਜੇਨਸ ਐਂਡੋਨਿਊਕਲੀਜ਼ ਜਾਂ ਐਕਸੋਨਿਊਕਲੀਜ਼ ਗੰਦਗੀ ਨਹੀਂ
ਹਦਾਇਤਾਂ
ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਸੈੱਟਅੱਪ
| ਕੰਪੋਨੈਂਟਸ | ਵਾਲੀਅਮ (μL) | ਅੰਤਮ ਇਕਾਗਰਤਾ |
| 10 × PCR ਬਫਰ II (Mg²+ ਮੁਫ਼ਤ)a | 5 | 1× |
| dNTPs (10mm ਹਰੇਕ dNTP) | 1 | 200 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 | 1-4 ਮਿ.ਮੀ |
| ਰੋਬਸਟਾਰਟ ਟਾਕ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ (5U/μL) | 0.25-0.5 | 1.25-2.5 ਯੂ |
| 25 × ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਮਿਕਸਬੀ | 2 | 1× |
| ਟੈਂਪਲੇਟ | - | 1 μg/ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ |
| ddH2O | ਨੂੰ 50 | - |
ਨੋਟ:
1) ਏ.ਬਫਰ ਵਿੱਚ dNTP ਅਤੇ Mg²+ ਸ਼ਾਮਲ ਨਹੀਂ ਹਨ, ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ dNTP ਅਤੇ MgCl ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ2ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਨੂੰ ਤਿਆਰ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ.
2) ਬੀ.ਜੇਕਰ qPCR/qRT-PCR ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਪੜਤਾਲਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਵਿੱਚ ਜੋੜਿਆ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ, 0.2 μM ਦੀ ਇੱਕ ਅੰਤਮ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਚੰਗੇ ਨਤੀਜੇ ਦੇਵੇਗੀ;ਜੇਕਰ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਦੀ ਕਾਰਗੁਜ਼ਾਰੀ ਮਾੜੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਨੂੰ 0.2-1 μM ਦੀ ਰੇਂਜ ਵਿੱਚ ਐਡਜਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਪੜਤਾਲ ਦੀ ਤਵੱਜੋ ਨੂੰ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 0.1-0.3 μM ਦੀ ਰੇਂਜ ਵਿੱਚ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਅਤੇ ਪੜਤਾਲ ਦੇ ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਸੁਮੇਲ ਨੂੰ ਲੱਭਣ ਲਈ ਇਕਾਗਰਤਾ ਗਰੇਡੀਐਂਟ ਪ੍ਰਯੋਗ ਕੀਤੇ ਜਾ ਸਕਦੇ ਹਨ।
ਥਰਮਲ ਸਾਈਕਲਿੰਗ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ
| ਨਿਯਮਤ ਪੀ.ਸੀ.ਆਰਪ੍ਰਕਿਰਿਆ | |||
| ਕਦਮ | ਤਾਪਮਾਨ | ਸਮਾਂ | ਸਾਈਕਲ |
| ਪ੍ਰੀ-ਡੈਨਚਰੇਸ਼ਨ | 95℃ | 1-5 ਮਿੰਟ | 1 |
| ਵਿਕਾਰ | 95℃ | 10-20 ਸਕਿੰਟ | 40-50 |
| ਐਨੀਲਿੰਗ / ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ | 56-64℃ | 20-60 ਸਕਿੰਟ | |
| ਤੇਜ਼ ਪੀ.ਸੀ.ਆਰਪ੍ਰਕਿਰਿਆ | |||
| ਕਦਮ | ਤਾਪਮਾਨ | ਸਮਾਂ | ਸਾਈਕਲ |
| ਪ੍ਰੀ-ਡੈਨਚਰੇਸ਼ਨ | 95℃ | 30 ਸਕਿੰਟ | 1 |
| ਵਿਕਾਰ | 95℃ | 1-5 ਸਕਿੰਟ | 40-45 |
| ਐਨੀਲਿੰਗ / ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ | 56-64℃ | 5-20 ਸਕਿੰਟ | |
ਨੋਟਸ
1.ਤੇਜ਼ DNA ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੀ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਦਰ 1 kb/10 s ਤੋਂ ਘੱਟ ਨਹੀਂ ਹੋਣੀ ਚਾਹੀਦੀ।ਤਾਪਮਾਨ ਵਧਣ ਅਤੇ ਡਿੱਗਣ ਦੀ ਦਰ, ਤਾਪਮਾਨ ਨਿਯੰਤਰਣ ਮੋਡ ਅਤੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਪੀਸੀਆਰ ਯੰਤਰਾਂ ਦੀ ਤਾਪ ਸੰਚਾਲਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਬਹੁਤ ਵੱਖਰੀ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਇਸਲਈ ਖਾਸ ਤੇਜ਼ ਪੀਸੀਆਰ ਯੰਤਰਾਂ ਲਈ ਅਨੁਕੂਲ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਸਥਿਤੀਆਂ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾਉਣ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।
2.ਸਿਸਟਮ ਉੱਚ ਵਿਸ਼ਿਸ਼ਟਤਾ ਅਤੇ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਦੇ ਨਾਲ ਬਹੁਤ ਅਨੁਕੂਲ ਹੈ।
3.ਉੱਚ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਪੀਸੀਆਰ ਖੋਜ ਰੀਐਜੈਂਟਸ ਵਜੋਂ ਵਰਤਣ ਲਈ ਉਚਿਤ ਹੈ, ਅਤੇ ਮਲਟੀਪਲੈਕਸ ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਵਿੱਚ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
4.5′→3′ ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਗਤੀਵਿਧੀ, 5′→3′ exonuclease ਗਤੀਵਿਧੀ;ਕੋਈ 3′→5′ exonuclease ਗਤੀਵਿਧੀ;ਕੋਈ ਪਰੂਫ ਰੀਡਿੰਗ ਫੰਕਸ਼ਨ ਨਹੀਂ।
5.ਪੀਸੀਆਰ ਅਤੇ ਆਰਟੀ-ਪੀਸੀਆਰ ਦੀ ਗੁਣਾਤਮਕ ਅਤੇ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਜਾਂਚ ਲਈ ਉਚਿਤ।
6.ਪੀਸੀਆਰ ਉਤਪਾਦ ਦਾ 3′ ਸਿਰਾ A ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਨੂੰ ਸਿੱਧਾ ਟੀ ਵੈਕਟਰ ਵਿੱਚ ਕਲੋਨ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
7.ਘੱਟ ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਵਾਲੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਲਈ ਜਾਂ 200 bp ਤੋਂ ਲੰਬੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਲਈ ਤਿੰਨ-ਪੜਾਅ ਵਿਧੀ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।
