ਜੰਗਲੀ ਟਾਕ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼
ਟਾਕ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਥਰਮਸ ਐਕੁਆਟਿਕਸ YT-1 ਤੋਂ ਇੱਕ ਥਰਮੋਸਟਬਲ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਹੈ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਇੱਕ 5′→3′ ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਗਤੀਵਿਧੀ ਅਤੇ ਇੱਕ 5′ ਫਲੈਪ ਐਂਡੋਨਿਊਕਲੀਜ਼ ਗਤੀਵਿਧੀ ਹੈ।
ਕੰਪੋਨੈਂਟਸ
| ਕੰਪੋਨੈਂਟ | HC1010ਏ-01 | HC1010ਏ-02 | HC1010ਏ-03 | HC1010ਏ-04 |
| 10× ਟਾਕ ਬਫਰ | 2×1 ਮਿ.ਲੀ | 2×10 ਮਿ.ਲੀ | 2×50 ਮਿ.ਲੀ | 5×200 ਮਿ.ਲੀ |
| ਟਾਕ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ (5 U/μL) | 0.1 ਮਿ.ਲੀ | 1 ਮਿ.ਲੀ | 5 ਮਿ.ਲੀ | 5×10 ਮਿ.ਲੀ |
ਸਟੋਰੇਜ ਦੀ ਸਥਿਤੀ
0°C ਦੇ ਹੇਠਾਂ ਆਵਾਜਾਈ ਅਤੇ -25°C~-15°C 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾਵੇ।
ਯੂਨਿਟ ਪਰਿਭਾਸ਼ਾ
ਇੱਕ ਇਕਾਈ ਨੂੰ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਵਜੋਂ ਪਰਿਭਾਸ਼ਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ ਜੋ 75°C 'ਤੇ 30 ਮਿੰਟਾਂ ਵਿੱਚ ਐਸਿਡ ਅਘੁਲਣਸ਼ੀਲ ਪਦਾਰਥ ਵਿੱਚ 15 nmol dNTP ਨੂੰ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰਦਾ ਹੈ।
ਗੁਣਵੱਤਾ ਕੰਟਰੋਲ
1.ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਪਰਖ (SDS-PAGE):Taq DNA ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੀ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ≥95% SDS-PAGE ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੁਆਰਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।
2.Endonuclease ਗਤੀਵਿਧੀ:37 ℃ 'ਤੇ 16 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ 1 μg λDNA ਦੇ ਨਾਲ ਘੱਟੋ ਘੱਟ 5 U ਟਾਕ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੇ ਅਨੁਸਾਰ ਕੋਈ ਖੋਜਣਯੋਗ ਗਿਰਾਵਟ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦੀ।
3.Exonuclease ਗਤੀਵਿਧੀ:37 ℃ 'ਤੇ 16 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ 1 μg λ -ਹਿੰਦ Ⅲ ਡਾਇਜੈਸਟ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਨਾਲ ਘੱਟੋ ਘੱਟ 5 U ਟਾਕ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੇ ਅਨੁਸਾਰ ਕੋਈ ਖੋਜਣਯੋਗ ਗਿਰਾਵਟ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦੀ।
4.ਨਿੱਕੇਸ ਗਤੀਵਿਧੀ:1 μg pBR322 DNA ਨਾਲ 37°C ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 16 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ ਘੱਟੋ-ਘੱਟ 5 U Taq DNA ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੇ ਅਨੁਸਾਰ ਕੋਈ ਖੋਜਣਯੋਗ ਗਿਰਾਵਟ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦੀ।
5.RNase ਗਤੀਵਿਧੀ:37°C 'ਤੇ 16 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ 1.6 μg MS2 RNA ਦੇ ਨਾਲ ਘੱਟੋ-ਘੱਟ 5 U Taq DNA ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੇ ਅਨੁਸਾਰ ਕੋਈ ਖੋਜਣਯੋਗ ਗਿਰਾਵਟ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦੀ।
6.ਈ. ਕੋਲੀDNA:Taq DNA ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੇ 5 U ਨੂੰ E. ਕੋਲੀ 16S rRNA ਟਿਕਾਣੇ ਲਈ ਖਾਸ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੇ ਨਾਲ TaqMan qPCR ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ E. ਕੋਲੀ ਜੀਨੋਮਿਕ DNA ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਲਈ ਸਕ੍ਰੀਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ।ਈ. ਕੋਲੀ ਜੀਨੋਮਿਕ ਡੀਐਨਏ ਗੰਦਗੀ ≤1 ਕਾਪੀ ਹੈ।
7.ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫੀਕੇਸ਼ਨ (5.0 kb ਲਾਂਬਡਾ ਡੀਐਨਏ)- ਇੱਕ 50 µL ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਜਿਸ ਵਿੱਚ 5 ਐਨਜੀ ਲੈਂਬਡਾ ਡੀਐਨਏ ਹੈ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ 5 ਯੂਨਿਟ ਟਾਕ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫੀਕੇਸ਼ਨ ਦੇ 25 ਚੱਕਰਾਂ ਲਈ ਸੰਭਾਵਿਤ 5.0 kb ਉਤਪਾਦ ਹਨ।
ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਸੈੱਟਅੱਪ
| ਕੰਪੋਨੈਂਟਸ | ਵਾਲੀਅਮ |
| ਟੈਂਪਲੇਟ ਡੀਐਨਏa | ਵਿਕਲਪਿਕ |
| 10 μM ਫਾਰਵਰਡ ਪ੍ਰਾਈਮਰ | 1 μL |
| 10 μM ਰਿਵਰਸ ਪ੍ਰਾਈਮਰ | 1 μL |
| dNTP ਮਿਕਸ (10mm ਹਰੇਕ) | 1 μL |
| 10×Taq ਬਫਰ | 5 μL |
| ਟਾਕ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ਬੀ | 0.25 μL |
| ਨਿਊਕਲੀਜ਼-ਮੁਕਤ ਪਾਣੀ | 50 μL ਤੱਕ |
ਨੋਟ:
1) ਵੱਖ-ਵੱਖ ਟੈਂਪਲੇਟਾਂ ਦੀ ਸਰਵੋਤਮ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਇਕਾਗਰਤਾ ਵੱਖਰੀ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।ਹੇਠ ਦਿੱਤੀ ਸਾਰਣੀ 50 μL ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਦੀ ਸਿਫ਼ਾਰਿਸ਼ ਕੀਤੀ ਟੈਮਪਲੇਟ ਵਰਤੋਂ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੀ ਹੈ।
| ਡੀ.ਐਨ.ਏ | ਦੀ ਰਕਮ |
| ਜੀਨੋਮਿਕ | 1 ng-1 μg |
| ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਜਾਂ ਵਾਇਰਲ | 1 ਪੀ.ਜੀ.-1 ਐਨ.ਜੀ |
2) ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨਾਂ ਵਿੱਚ Taq DNA ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੀ ਸਰਵੋਤਮ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 0.25 µL~1 µL ਤੱਕ ਹੋ ਸਕਦੀ ਹੈ।
ਪ੍ਰਤੀਕਰਮਪ੍ਰੋਗਰਾਮ
| ਕਦਮ | ਤਾਪਮਾਨ(°C) | ਸਮਾਂ | ਸਾਈਕਲ |
| ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਵਿਕਾਰa | 95 ℃ | 5 ਮਿੰਟ | - |
| ਵਿਕਾਰ | 95 ℃ | 15-30 ਸਕਿੰਟ | 30-35 ਚੱਕਰ |
| ਐਨੀਲਿੰਗਬੀ | 60 ℃ | 15 ਐੱਸ | |
| ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ | 72 ℃ | 1kb/ਮਿੰਟ | |
| ਅੰਤਮ ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ | 72 ℃ | 5 ਮਿੰਟ | - |
ਨੋਟ:
1) ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਵਿਨਾਸ਼ਕਾਰੀ ਸਥਿਤੀ ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਲਈ ਢੁਕਵੀਂ ਹੈ ਅਤੇ ਟੈਂਪਲੇਟ ਬਣਤਰ ਦੀ ਗੁੰਝਲਤਾ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਸੋਧਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਜੇਕਰ ਟੈਂਪਲੇਟ ਢਾਂਚਾ ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਹੈ, ਤਾਂ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਵਿਨਾਸ਼ਕਾਰੀ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨੂੰ ਬਿਹਤਰ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਪ੍ਰੀ-ਡਿਨੈਚੂਰੇਸ਼ਨ ਸਮਾਂ 5 - 10 ਮਿੰਟ ਤੱਕ ਵਧਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
2) ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਨੂੰ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੇ Tm ਮੁੱਲ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਐਡਜਸਟ ਕਰਨ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੇ Tm ਮੁੱਲ ਨਾਲੋਂ 3~ 5 ℃ ਘੱਟ ਸੈੱਟ ਹੁੰਦਾ ਹੈ;ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਟੈਂਪਲੇਟਾਂ ਲਈ, ਕੁਸ਼ਲ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਨੂੰ ਵਿਵਸਥਿਤ ਕਰਨਾ ਅਤੇ ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਸਮਾਂ ਵਧਾਉਣਾ ਜ਼ਰੂਰੀ ਹੈ।
