ਯੂਨੀਵਰਸਲ SYBR GREEN qPCR ਪ੍ਰੀਮਿਕਸ (ਨੀਲਾ)
ਬਿੱਲੀ ਨੰ: HCB5041B
ਯੂਨੀਵਰਸਲ ਬਲੂ qPCR ਮਾਸਟਰ ਮਿਕਸ (ਡਾਈ ਬੇਸਡ) 2×ਰੀਅਲ-ਟਾਈਮ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਲਈ ਇੱਕ ਪ੍ਰੀ-ਸੋਲਿਊਸ਼ਨ ਹੈ ਜੋ ਉੱਚ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਅਤੇ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਦੁਆਰਾ ਦਰਸਾਈ ਗਈ ਹੈ, ਰੰਗ ਵਿੱਚ ਨੀਲਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਨਮੂਨਾ ਜੋੜ ਟਰੇਸਿੰਗ ਦਾ ਪ੍ਰਭਾਵ ਹੈ।ਕੋਰ ਕੰਪੋਨੈਂਟ ਟਾਕ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਤਿਆਰੀ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਐਨੀਲਿੰਗ ਦੇ ਕਾਰਨ ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਰੋਕਣ ਲਈ ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਹਾਟ ਸਟਾਰਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦਾ ਹੈ।ਇਸ ਦੇ ਨਾਲ ਹੀ, ਫਾਰਮੂਲਾ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੀ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨੂੰ ਬਿਹਤਰ ਬਣਾਉਣ ਅਤੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਜੀਸੀ ਸਮਗਰੀ (30 ~ 70%) ਦੇ ਨਾਲ ਜੀਨਾਂ ਦੇ ਪ੍ਰਸਾਰਣ ਨੂੰ ਬਰਾਬਰ ਕਰਨ ਲਈ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਕਾਰਕਾਂ ਨੂੰ ਜੋੜਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਜੋ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਪੀਸੀਆਰ ਇੱਕ ਵਿਆਪਕ ਮਾਤਰਾ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਵਧੀਆ ਰੇਖਿਕ ਸਬੰਧ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰ ਸਕੇ। ਖੇਤਰ.ਇਸ ਉਤਪਾਦ ਵਿੱਚ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ROX ਪੈਸਿਵ ਰੈਫਰੈਂਸ ਡਾਈ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ qPCR ਯੰਤਰਾਂ 'ਤੇ ਲਾਗੂ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।ਵੱਖ-ਵੱਖ ਯੰਤਰਾਂ 'ਤੇ ROX ਦੀ ਇਕਾਗਰਤਾ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਕਰਨਾ ਜ਼ਰੂਰੀ ਨਹੀਂ ਹੈ।ਪਰਿਵਰਤਨ ਲਈ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਨੂੰ ਤਿਆਰ ਕਰਨ ਲਈ ਸਿਰਫ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਅਤੇ ਟੈਂਪਲੇਟਸ ਨੂੰ ਜੋੜਨਾ ਜ਼ਰੂਰੀ ਹੈ.
ਕੰਪੋਨੈਂਟਸ
ਯੂਨੀਵਰਸਲ ਬਲੂ qPCR ਮਾਸਟਰ ਮਿਕਸ
ਸਟੋਰੇਜ਼ ਹਾਲਾਤ
ਉਤਪਾਦ ਨੂੰ ਆਈਸ ਪੈਕ ਨਾਲ ਭੇਜਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਇਸਨੂੰ 18 ਮਹੀਨਿਆਂ ਲਈ -25℃~-15℃ ਵਿੱਚ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਨੂੰ ਸਟੋਰ ਕਰਨ ਜਾਂ ਤਿਆਰ ਕਰਨ ਵੇਲੇ ਤੇਜ਼ ਰੋਸ਼ਨੀ ਕਿਰਨਾਂ ਤੋਂ ਬਚਣਾ ਜ਼ਰੂਰੀ ਹੈ।
ਨਿਰਧਾਰਨ
| ਧਿਆਨ ਟਿਕਾਉਣਾ | 2× |
| ਖੋਜ ਵਿਧੀ | SYBR |
| ਪੀਸੀਆਰ ਵਿਧੀ | qPCR |
| ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ | ਟਾਕ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ |
| ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਕਿਸਮ | ਡੀ.ਐਨ.ਏ |
| ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨ ਉਪਕਰਣ | ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ qPCR ਯੰਤਰ |
| ਉਤਪਾਦ ਦੀ ਕਿਸਮ | ਰੀਅਲ-ਟਾਈਮ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਮਾਤਰਾਤਮਕ PCR ਲਈ SYBR ਪ੍ਰੀਮਿਕਸ |
| (ਅਰਜ਼ੀ) ਨੂੰ ਲਾਗੂ ਕਰੋ | ਜੀਨ ਸਮੀਕਰਨ |
ਹਦਾਇਤਾਂ
1. ਪ੍ਰਤੀਕਰਮ ਪ੍ਰਣਾਲੀ
| ਕੰਪੋਨੈਂਟਸ | ਵੌਲੋਮ(μL) | ਵੌਲੋਮ(μL) | ਅੰਤਮ ਇਕਾਗਰਤਾ |
| ਯੂਨੀਵਰਸਲ SYBR ਗ੍ਰੀਨ qPCR ਪ੍ਰੀਮਿਕਸ | 25 | 10 | 1× |
| ਫਾਰਵਰਡ ਪ੍ਰਾਈਮਰ (10μmol/L) | 1 | 0.4 | 0.2μmol/L |
| ਰਿਵਰਸ ਪ੍ਰਾਈਮਰ (10μmol/L) | 1 | 0.4 | 0.2μmol/L |
| ਡੀ.ਐਨ.ਏ | X | X | |
| ddH2O | 50 ਤੱਕ | 20 ਤੱਕ | - |
[ਨੋਟ]: ਜ਼ੋਰਦਾਰ ਹਿੱਲਣ ਤੋਂ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਬੁਲਬੁਲੇ ਤੋਂ ਬਚਣ ਲਈ ਵਰਤੋਂ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮਿਲਾਓ।
a) ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ: ਅੰਤਮ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 0.2μmol/L ਹੈ, ਅਤੇ ਇਸਨੂੰ 0.1 ਅਤੇ 1.0μmol/L ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਵੀ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
b) ਟੈਂਪਲੇਟ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ: ਜੇਕਰ ਟੈਂਪਲੇਟ undiluted cDNA ਸਟਾਕ ਹੱਲ ਹੈ, ਤਾਂ ਵਰਤੀ ਗਈ ਮਾਤਰਾ qPCR ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੀ ਕੁੱਲ ਮਾਤਰਾ ਦੇ 1/10 ਤੋਂ ਵੱਧ ਨਹੀਂ ਹੋਣੀ ਚਾਹੀਦੀ।
c) ਟੈਂਪਲੇਟ ਪਤਲਾ: cDNA ਸਟਾਕ ਘੋਲ ਨੂੰ 5-10 ਵਾਰ ਪਤਲਾ ਕਰਨ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਜੋੜੀ ਗਈ ਟੈਂਪਲੇਟ ਦੀ ਸਰਵੋਤਮ ਮਾਤਰਾ ਬਿਹਤਰ ਹੁੰਦੀ ਹੈ ਜਦੋਂ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ Ct ਮੁੱਲ 20-30 ਚੱਕਰ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।
d) ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ: ਟੀਚੇ ਦੇ ਜੀਨ ਪ੍ਰਸਾਰਣ ਦੀ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ੀਲਤਾ ਅਤੇ ਦੁਹਰਾਉਣਯੋਗਤਾ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਣ ਲਈ 20μL ਜਾਂ 50μL ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।
e) ਸਿਸਟਮ ਦੀ ਤਿਆਰੀ: ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਸੁਪਰ ਕਲੀਨ ਬੈਂਚ ਵਿੱਚ ਤਿਆਰ ਕਰੋ ਅਤੇ ਟਿਪਸ ਅਤੇ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਟਿਊਬਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਨਿਊਕਲੀਜ਼ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ ਦੇ ਕਰੋ;ਫਿਲਟਰ ਕਾਰਤੂਸ ਦੇ ਨਾਲ ਟਿਪਸ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ.ਕਰਾਸ ਗੰਦਗੀ ਅਤੇ ਐਰੋਸੋਲ ਗੰਦਗੀ ਤੋਂ ਬਚੋ।
2.ਪ੍ਰਤੀਕਰਮ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮ
ਮਿਆਰੀ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮ
| ਸਾਈਕਲ ਕਦਮ | ਟੈਂਪ | ਸਮਾਂ | ਸਾਈਕਲ |
| ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਵਿਕਾਰ | 95℃ | 2 ਮਿੰਟ | 1 |
| ਵਿਕਾਰ | 95℃ | 10 ਸਕਿੰਟ | 40 |
| ਐਨੀਲਿੰਗ/ਐਕਸਟੈਨਸ਼ਨ | 60℃ | 30 ਸਕਿੰਟ★ | |
| ਪਿਘਲਣ ਵਾਲੀ ਕਰਵ ਅਵਸਥਾ | ਇੰਸਟ੍ਰੂਮੈਂਟ ਡਿਫੌਲਟ | 1 | |
ਤੇਜ਼ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮ
| ਸਾਈਕਲ ਕਦਮ | ਟੈਂਪ | ਸਮਾਂ | ਸਾਈਕਲ |
| ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਵਿਕਾਰ | 95℃ | 30 ਸਕਿੰਟ | 1 |
| ਵਿਕਾਰ | 95℃ | 3 ਸਕਿੰਟ | 40 |
| ਐਨੀਲਿੰਗ/ਐਕਸਟੈਨਸ਼ਨ | 60℃ | 20 ਸਕਿੰਟ★ | |
| ਪਿਘਲਣ ਵਾਲੀ ਕਰਵ ਅਵਸਥਾ | ਇੰਸਟ੍ਰੂਮੈਂਟ ਡਿਫੌਲਟ | 1 | |
[ਨੋਟ]: ਤੇਜ਼ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮ ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਜੀਨਾਂ ਲਈ ਢੁਕਵਾਂ ਹੈ, ਅਤੇ ਵਿਅਕਤੀਗਤ ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਸੈਕੰਡਰੀ ਬਣਤਰ ਵਾਲੇ ਜੀਨਾਂ ਲਈ ਮਿਆਰੀ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮਾਂ ਦੀ ਕੋਸ਼ਿਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।
a) ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਅਤੇ ਸਮਾਂ: ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਅਤੇ ਟਾਰਗੇਟ ਜੀਨ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਕਰੋ।
b) ਫਲੋਰਸੈਂਸ ਸਿਗਨਲ ਪ੍ਰਾਪਤੀ (★): ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਯੰਤਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਲਈ ਨਿਰਦੇਸ਼ਾਂ ਵਿੱਚ ਲੋੜਾਂ ਅਨੁਸਾਰ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਨੂੰ ਸੈੱਟ ਕਰੋ।
c) ਮੈਲਟਿੰਗ ਕਰਵ: ਇੰਸਟ੍ਰੂਮੈਂਟ ਡਿਫੌਲਟ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮ ਨੂੰ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
3. ਨਤੀਜਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ
ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਲਈ ਘੱਟੋ-ਘੱਟ ਤਿੰਨ ਜੈਵਿਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀਆਂ ਦੀ ਲੋੜ ਸੀ।ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕਰਵ ਅਤੇ ਪਿਘਲਣ ਵਾਲੀ ਕਰਵ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕਰਨ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।
3.1 ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕਰਵ:
ਸਟੈਂਡਰਡ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕਰਵ S-ਆਕਾਰ ਦਾ ਹੈ।ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਸਭ ਤੋਂ ਸਹੀ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਜਦੋਂ Ct ਮੁੱਲ 20 ਅਤੇ 30 ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਆਉਂਦਾ ਹੈ। ਜੇਕਰ Ct ਮੁੱਲ 10 ਤੋਂ ਘੱਟ ਹੈ, ਤਾਂ ਟੈਮਪਲੇਟ ਨੂੰ ਪਤਲਾ ਕਰਨਾ ਅਤੇ ਦੁਬਾਰਾ ਟੈਸਟ ਕਰਨਾ ਜ਼ਰੂਰੀ ਹੈ।ਜਦੋਂ Ct ਮੁੱਲ 30-35 ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਟੈਂਪਲੇਟ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਜਾਂ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣਾ ਜ਼ਰੂਰੀ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਜੋ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਵਿੱਚ ਸੁਧਾਰ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕੇ ਅਤੇ ਨਤੀਜੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੀ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਇਆ ਜਾ ਸਕੇ।ਜਦੋਂ Ct ਮੁੱਲ 35 ਤੋਂ ਵੱਧ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਟੈਸਟ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਗਿਣਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਜੀਨ ਦੇ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਨਹੀਂ ਕਰ ਸਕਦੇ, ਪਰ ਗੁਣਾਤਮਕ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
3.2 ਪਿਘਲਣ ਦੀ ਵਕਰ:
ਪਿਘਲਣ ਵਾਲੀ ਵਕਰ ਦੀ ਸਿੰਗਲ ਸਿਖਰ ਇਹ ਦਰਸਾਉਂਦੀ ਹੈ ਕਿ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਚੰਗੀ ਹੈ ਅਤੇ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ;ਜੇਕਰ ਪਿਘਲਣ ਵਾਲੀ ਕਰਵ ਡਬਲ ਜਾਂ ਮਲਟੀਪਲ ਪੀਕ ਦਿਖਾਉਂਦੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਨਹੀਂ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਪਿਘਲਣ ਵਾਲੀ ਵਕਰ ਦੋਹਰੀ ਚੋਟੀਆਂ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਇਹ ਨਿਰਣਾ ਕਰਨਾ ਜ਼ਰੂਰੀ ਹੈ ਕਿ ਕੀ ਗੈਰ-ਟਾਰਗੇਟ ਪੀਕ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਡਾਈਮਰ ਹੈ ਜਾਂ ਡੀਐਨਏ ਐਗਰੋਸ ਜੈੱਲ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਦੁਆਰਾ ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਹੈ।ਜੇਕਰ ਇਹ ਇੱਕ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਡਾਇਮਰ ਹੈ, ਤਾਂ ਇਸਦੀ ਸਿਫ਼ਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ ਕਿ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਨੂੰ ਘੱਟ ਕੀਤਾ ਜਾਵੇ ਜਾਂ ਉੱਚ ਐਂਪਲੀਫ਼ਿਕੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਵਾਲੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਨੂੰ ਮੁੜ ਡਿਜ਼ਾਇਨ ਕੀਤਾ ਜਾਵੇ।ਜੇਕਰ ਇਹ ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਹੈ, ਤਾਂ ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਵਧਾਓ, ਜਾਂ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਨੂੰ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਦੇ ਨਾਲ ਦੁਬਾਰਾ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਕਰੋ।
ਨੋਟਸ
ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਆਪਣੀ ਸਿਹਤ ਅਤੇ ਸੁਰੱਖਿਆ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਜ਼ਰੂਰੀ PPE, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਲੈਬ ਕੋਟ ਅਤੇ ਦਸਤਾਨੇ ਪਹਿਨੋ!
ਇਹ ਉਤਪਾਦ ਸਿਰਫ ਖੋਜ ਵਰਤੋਂ ਲਈ ਹੈ！
