2×Sensi ਡਾਇਰੈਕਟ ਪ੍ਰੀਮਿਕਸ-UNG (ਪ੍ਰੋਬ qPCR)
ਬਿੱਲੀ ਨੰ: HCB5151A
SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) ਨੂੰ ਡੀਐਨਏ ਕੱਢਣ ਜਾਂ ਨਮੂਨਾ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ ਬਿਨਾਂ ਨਮੂਨਿਆਂ ਤੋਂ ਸਿੱਧਾ ਪੀਸੀਆਰ ਕਰਨ ਲਈ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ।ਇਸ ਰੀਐਜੈਂਟ ਵਿੱਚ ਹਾਟ-ਸਟਾਰਟ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼, ਯੂਰੇਸਿਲ ਡੀਐਨਏ ਗਲਾਈਕੋਸਾਈਲੇਜ਼ (ਯੂਐਨਜੀ), ਆਰਨੇਜ਼ ਇਨ੍ਹੀਬੀਟਰ, ਐਮਜੀਸੀਐਲ ਸ਼ਾਮਲ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।2, dNTPs (dTTP ਦੀ ਬਜਾਏ dUTP ਨਾਲ), ਅਤੇ ਸਟੈਬੀਲਾਈਜ਼ਰ, ਮਾਤਰਾਤਮਕ PCR (qPCR) ਲਈ।ਇਹ ਰੀਐਜੈਂਟ ਉੱਚ ਇਨਿਹਿਬਟਰ-ਸਹਿਣਸ਼ੀਲਤਾ ਨੂੰ ਪ੍ਰਫੌਰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ ਇਸ ਨੂੰ ਡੀਐਨਏ ਕੱਢਣ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਗਲੇ ਦੇ ਫੰਬੇ, ਲਾਰ, ਐਂਟੀ-ਕੋਗੂਲੇਟਿਡ ਪੂਰੇ ਖੂਨ, ਪਲਾਜ਼ਮਾ, ਅਤੇ ਸੀਰਮ ਵਰਗੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੀ ਖੋਜ ਲਈ ਸਿੱਧੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਲਾਗੂ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਰੀਐਜੈਂਟ qPCR ਲਈ ਮਲਕੀਅਤ ਬਫਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਐਂਟੀ-ਇਨਿਹਿਬੀਟਰੀ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਅਤੇ UNG ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਦੇ ਮਿਸ਼ਰਤ ਪਾਚਕ ਨਾਲ ਕਰਦਾ ਹੈ।ਇਸਲਈ, ਇਹ ਇਨਿਹਿਬਟਰਸ ਵਾਲੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਵਿੱਚ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਜੀਨਾਂ ਦਾ ਇੱਕ ਵਧੀਆ ਪ੍ਰਸਾਰਨ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਪੀਸੀਆਰ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ ਅਤੇ ਐਰੋਸੋਲ ਪ੍ਰਦੂਸ਼ਣ ਕਾਰਨ ਹੋਣ ਵਾਲੇ ਝੂਠੇ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਪ੍ਰਸਾਰ ਨੂੰ ਰੋਕ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਇਹ ਰੀਐਜੈਂਟ ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਪੀਸੀਆਰ ਯੰਤਰਾਂ ਦੇ ਅਨੁਕੂਲ ਹੈ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਅਪਲਾਈਡ ਬਾਇਓਸਿਸਟਮ, ਐਪੇਨਡੋਰਫ, ਬਾਇਓ-ਰੈਡ, ਰੋਚੇ ਅਤੇ ਹੋਰ।
ਕੰਪੋਨੈਂਟਸ
1. 50×SensiDirect Enzyme/UNG ਮਿਕਸ
2. 2×SensiDirect ਪ੍ਰੀਮਿਕਸ ਬਫਰ (dUTP)
ਸਟੋਰੇਜ਼ ਹਾਲਾਤ
ਸਾਰੇ ਹਿੱਸਿਆਂ ਨੂੰ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਲਈ ਸਟੋਰੇਜ ਲਈ -20 ℃ ਅਤੇ 3 ਮਹੀਨਿਆਂ ਤੱਕ 4 ℃ ਤੇ ਰੱਖਿਆ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਵਰਤਣ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਪਿਘਲਾਉਣ ਅਤੇ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਰਲਾਓ।ਵਾਰ-ਵਾਰ ਫ੍ਰੀਜ਼-ਪੰਘਣ ਤੋਂ ਬਚੋ।
ਸਾਈਕਲਿੰਗ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ
| ਕਦਮ | ਤਾਪਮਾਨ | ਸਮਾਂ | ਸਾਈਕਲ |
| ਪਾਚਨ | 50℃ | 2 ਮਿੰਟ | 1 |
| ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ | 95℃ | 1-5 ਮਿੰਟ | 1 |
| ਡੈਨੇਚਰ | 95℃ | 10-20 ਸਕਿੰਟ | 40-50 |
| ਐਨੀਲਿੰਗ/ਐਕਸਟੈਨਸ਼ਨ | 56-64℃ | 20-60 |
ਪਾਈਪਿੰਗ ਨਿਰਦੇਸ਼
| ਰੀਏਜੈਂਟ | ਵਾਲੀਅਮ ਪ੍ਰਤੀ ਪ੍ਰਤੀਕਰਮ | ਪ੍ਰਤੀ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਵਾਲੀਅਮ | ਅੰਤਮ ਇਕਾਗਰਤਾ |
| 2×SensiDirect ਪ੍ਰੀਮਿਕਸ ਬਫਰ (dUTP) | 12.5µL | 25µL | 1× |
| 50×SensiDirect Enzyme/UNG ਮਿਕਸ | 0.5µL | 1µL | 1× |
| 25×ਪ੍ਰਾਈਮਰ-ਪ੍ਰੋਬ ਮਿਕਸ1, 2 | 1µL | 2µL | 1× |
| ਨਮੂਨਾ3, 4 | - | - | - |
| ddH2O | - | - | - |
| ਕੁੱਲ ਵੌਲਯੂਮ | 25 μL | 50 μL | - |
1. ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੀ ਅੰਤਮ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 0.2μM ਹੁੰਦੀ ਹੈ।ਬਿਹਤਰ ਨਤੀਜਿਆਂ ਲਈ, ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਨੂੰ 0.2-1μM ਦੀ ਰੇਂਜ ਦੇ ਅੰਦਰ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
2. ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ, ਪੜਤਾਲ ਦੀ ਇਕਾਗਰਤਾ 0.1-0.3μM ਦੀ ਰੇਂਜ ਦੇ ਅੰਦਰ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।ਜਾਂਚ ਦੀ ਸਰਵੋਤਮ ਇਕਾਗਰਤਾ ਅਸਲ ਸਮੇਂ ਦੇ ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫੀਕੇਸ਼ਨ ਯੰਤਰ, ਜਾਂਚ ਦੀ ਕਿਸਮ, ਅਤੇ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਲੇਬਲਿੰਗ ਪਦਾਰਥ ਦੀ ਕਿਸਮ ਨਾਲ ਸਬੰਧਤ ਹੈ।ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਇੰਸਟ੍ਰੂਮੈਂਟ ਮੈਨੂਅਲ ਜਾਂ ਹਰੇਕ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਜਾਂਚ ਦੀਆਂ ਖਾਸ ਲੋੜਾਂ ਵੇਖੋ।
3. ਵੱਖ-ਵੱਖ ਕਿਸਮਾਂ ਦੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਵਿੱਚ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਕਿਸਮਾਂ ਅਤੇ ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਦੀ ਸਮੱਗਰੀ ਅਤੇ ਟਾਰਗੇਟ ਜੀਨ ਦੀ ਕਾਪੀ ਨੰਬਰ ਸ਼ਾਮਲ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਅਸਲ ਸਥਿਤੀ ਦੁਆਰਾ ਵਿਚਾਰਿਆ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ.ਜੇ ਲੋੜ ਹੋਵੇ ਤਾਂ ਨਿਊਕਲੀਜ਼-ਮੁਕਤ ਪਾਣੀ ਜਾਂ TE ਬਫਰ ਨੂੰ ਜੋੜ ਕੇ ਨਮੂਨੇ ਨੂੰ ਪਤਲਾ ਕਰੋ।
4. ਵੱਖ-ਵੱਖ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਮਾਤਰਾ:
| ਨਮੂਨਾ | ਇੱਕ 50 ਲਈ ਵਾਲੀਅਮ μL ਪ੍ਰਤੀਕਰਮ | ਅਧਿਕਤਮ ਅਨੁਪਾਤ |
| ਐਂਟੀਕਾਗੂਲੇਟਿਡ ਸਾਰਾ ਖੂਨ | 2.5 μL | 5% |
| ਪਲਾਜ਼ਮਾ | 15 μL | 30% |
| ਸੀਰਮ | 10 μL | 20% |
| ਗਲੇ ਦਾ ਫੰਬਾ | 10 μL | 20% |
| ਥੁੱਕ | 10 μL | 20% |
ਗੁਣਵੱਤਾ ਕੰਟਰੋਲ
1. ਫੰਕਸ਼ਨ ਖੋਜ: qPCR ਦੀ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ, ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਅਤੇ ਦੁਹਰਾਉਣਯੋਗਤਾ।
2. ਕੋਈ ਐਕਸੋਜੇਨਸ ਨਿਊਕਲੀਜ਼ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨਹੀਂ: ਕੋਈ ਐਕਸੋਜੇਨਸ ਐਂਡੋਨਿਊਕਲੀਜ਼ ਅਤੇ ਐਕਸੋਨਿਊਕਲੀਜ਼ ਪ੍ਰਦੂਸ਼ਣ ਨਹੀਂ।
ਉਤਪਾਦ ਦੇ ਨੋਟਸ
1. ਇਹ ਉਤਪਾਦ ਹਾਟ-ਸਟਾਰਟ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੀ ਇੱਕ ਨਵੀਂ ਕਿਸਮ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਨੂੰ 1-5 ਮਿੰਟਾਂ ਵਿੱਚ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਕਿਉਂਕਿ ਇਸਦੇ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਬਫਰ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ, ਇਹ ਜਾਂਚ ਵਿਧੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਡਬਲ ਜਾਂ ਮਲਟੀਪਲ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਮਾਤਰਾਤਮਕ PCR ਲਈ ਵਧੇਰੇ ਅਨੁਕੂਲ ਹੈ।
2. ਜੇਕਰ PCR ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਦਾ Rn ਮੁੱਲ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਹੈ ਜਾਂ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਸਪੱਸ਼ਟ ਤੌਰ 'ਤੇ ਰੋਕਿਆ ਗਿਆ ਹੈ, ਤਾਂ ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਘਟਾਉਣਾ, ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਵਧਾਉਣਾ ਜਾਂ ਨਮੂਨੇ ਦੇ ਪਿਛਲੇ ਕਮਜ਼ੋਰ ਹੋਣ ਨਾਲ ਨਤੀਜਿਆਂ ਵਿੱਚ ਸੁਧਾਰ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ।
3. ਖੂਨ, ਲਾਰ, ਪਿਸ਼ਾਬ, ਗਲੇ ਦੇ ਫੰਬੇ, ਆਦਿ ਦੇ ਸੰਗ੍ਰਹਿ ਨੂੰ ਕਲੀਨਿਕਲ ਮਾਪਦੰਡ ਲੋੜਾਂ ਦੀ ਪਾਲਣਾ ਕਰਨੀ ਚਾਹੀਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਤਾਜ਼ੇ ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਦੇ ਵਿਗਾੜ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।
4. ਕਿਉਂਕਿ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਐਂਪਲੀਕਨਾਂ ਦੀ dUTP ਲਈ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਉਪਯੋਗਤਾ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਅਤੇ UNG ਪ੍ਰਤੀ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਜੇਕਰ UNG ਸਿਸਟਮ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ ਖੋਜ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਘੱਟ ਜਾਂਦੀ ਹੈ ਤਾਂ ਰੀਐਜੈਂਟਸ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾਇਆ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।ਜੇਕਰ ਲੋੜ ਹੋਵੇ ਤਾਂ ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਤਕਨੀਕੀ ਸਹਾਇਤਾ ਲਈ ਸਾਡੇ ਨਾਲ ਸੰਪਰਕ ਕਰੋ।
5. ਇੱਕ-ਕਦਮ ਦੀਆਂ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਕੈਰੀਓਵਰ ਪੀਸੀਆਰ ਉਤਪਾਦਾਂ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਤੋਂ ਬਚਣ ਲਈ, ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਲਈ ਸਮਰਪਿਤ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਖੇਤਰ ਅਤੇ ਪਾਈਪੇਟ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।ਦਸਤਾਨੇ ਨਾਲ ਕੰਮ ਕਰੋ ਅਤੇ ਵਾਰ-ਵਾਰ ਬਦਲੋ ਅਤੇ ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਟਿਊਬ ਨੂੰ ਨਾ ਖੋਲ੍ਹੋ।
