ਹੌਟਸਟਾਰਟ ਟਾਕ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼
ਹੌਟ ਸਟਾਰਟ ਟਾਕ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ (ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਸੋਧ) ਥਰਮਸ ਐਕੁਆਟਿਕਸ YT-1 ਤੋਂ ਇੱਕ ਹੌਟ-ਸਟਾਰਟ ਥਰਮੋਸਟਬਲ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਹੈ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਇੱਕ 5′→3′ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਗਤੀਵਿਧੀ ਅਤੇ ਇੱਕ 5′→3′ ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਗਤੀਵਿਧੀ ਅਤੇ ਇੱਕ 5′ ਫਲੈਪ ਐਂਡੋਨਿਊਕਲੀਜ਼ ਗਤੀਵਿਧੀ ਹੈ।ਹੌਟ-ਸਟਾਰਟ ਟਾਕ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਇੱਕ ਟਾਕ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਹੈ ਜੋ ਥਰਮੋਲਾਬਿਲ ਟਾਕ ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ ਦੁਆਰਾ ਸੋਧਿਆ ਗਿਆ ਹੈ।ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਸੋਧ ਨੇ ਪੀਸੀਆਰ ਦੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ, ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਅਤੇ ਉਪਜ ਨੂੰ ਵਧਾਇਆ।
ਕੰਪੋਨੈਂਟਸ
| ਕੰਪੋਨੈਂਟ | HC1012ਏ-01 | HC1012ਏ-02 | HC1012ਏ-03 | HC1012ਏ-04 |
| 5×HC ਟਾਕ ਬਫਰ | 4×1 ਮਿ.ਲੀ | 4×10 ਮਿ.ਲੀ | 4×50 ਮਿ.ਲੀ | 5×400 ਮਿ.ਲੀ |
| ਹੌਟ ਸਟਾਰਟ ਟਾਕ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ (ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਸੋਧਿਆ ਗਿਆ) (5 U/μL) | 0.1 ਮਿ.ਲੀ | 1 ਮਿ.ਲੀ | 5 ਮਿ.ਲੀ | 10×5 ਮਿ.ਲੀ |
ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨਾਂ
10 mM Tris-HCl (pH 7.4 at 25℃), 100 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM dithiothreitol, 0.5% Tween20, 0.5% IGEPALCA-630 ਅਤੇ 50% Glycerol।
ਸਟੋਰੇਜ ਦੀ ਸਥਿਤੀ
0°C ਦੇ ਹੇਠਾਂ ਆਵਾਜਾਈ ਅਤੇ -25°C~-15°C 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾਵੇ।
ਯੂਨਿਟ ਪਰਿਭਾਸ਼ਾ
ਇੱਕ ਇਕਾਈ ਨੂੰ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਵਜੋਂ ਪਰਿਭਾਸ਼ਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ ਜੋ 75°C 'ਤੇ 30 ਮਿੰਟਾਂ ਵਿੱਚ ਐਸਿਡ ਅਘੁਲਣਸ਼ੀਲ ਪਦਾਰਥ ਵਿੱਚ 15 nmol dNTP ਨੂੰ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰਦਾ ਹੈ।
ਗੁਣਵੱਤਾ ਕੰਟਰੋਲ
1.Endonuclease ਗਤੀਵਿਧੀ:37℃ 'ਤੇ 4 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ 4 μg pUC19 ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਨਾਲ 20 U ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਦੇ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਹੋਣ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਜੈੱਲ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਦੁਆਰਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਡੀਐਨਏ ਦਾ ਕੋਈ ਖੋਜਣਯੋਗ ਗਿਰਾਵਟ ਨਹੀਂ ਹੋਇਆ।
2.5 kb ਲਾਂਬਡਾ ਪੀਸੀਆਰ:200 µM dNTPs ਅਤੇ 0.2 µM ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਵਿੱਚ Taq DNA ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੀਆਂ 1.25 ਯੂਨਿਟਾਂ ਦੇ ਨਾਲ 5 ng ਲਾਂਬਡਾ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਸਾਰਣ ਦੇ 25 ਚੱਕਰ ਸੰਭਾਵਿਤ 5 kb ਉਤਪਾਦ ਵਿੱਚ ਨਤੀਜੇ ਦਿੰਦੇ ਹਨ।
3.Exonuclease ਗਤੀਵਿਧੀ:37℃ 'ਤੇ 30 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ 10 nmol 5´-FAM ਓਲੀਗੋਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡ ਦੇ ਨਾਲ ਘੱਟੋ-ਘੱਟ 12.5 U Taq DNA ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਵਾਲੀ 50 μl ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦਾ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕਰਨ ਨਾਲ ਕੋਈ ਖੋਜਣਯੋਗ ਗਿਰਾਵਟ ਨਹੀਂ ਮਿਲਦੀ।
4.RNase ਗਤੀਵਿਧੀ:37°C 'ਤੇ 2 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ 1μg RNA ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟਾਂ ਦੇ ਨਾਲ 20 U ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਵਾਲੇ 10 µL ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੇ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਹੋਣ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਜੈੱਲ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਦੁਆਰਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਆਰਐਨਏ ਦਾ ਕੋਈ ਖੋਜਣਯੋਗ ਗਿਰਾਵਟ ਨਹੀਂ ਹੋਇਆ।
5.ਹੀਟ ਇਨਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ:ਨੰ.
ਪ੍ਰਤੀਕਰਮ ਸਿਸਟਮ
| ਕੰਪੋਨੈਂਟਸ | ਵਾਲੀਅਮ |
| ਟੈਂਪਲੇਟ ਡੀਐਨਏa | ਵਿਕਲਪਿਕ |
| 10 μM ਫਾਰਵਰਡ ਪ੍ਰਾਈਮਰ | 0.5 μL |
| 10 μM ਰਿਵਰਸ ਪ੍ਰਾਈਮਰ | 0.5 μL |
| dNTP ਮਿਕਸ (10mm ਹਰੇਕ) | 0.5 μL |
| 5×HC ਟਾਕ ਬਫਰ | 5 μL |
| ਟਾਕ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ਬੀ(5U/μL) | 0.125 μL |
| ਨਿਊਕਲੀਜ਼-ਮੁਕਤ ਪਾਣੀ | 25 μL ਤੱਕ |
ਨੋਟ:
1) ਏ.
| ਡੀ.ਐਨ.ਏ | ਦੀ ਰਕਮ |
| ਜੀਨੋਮਿਕ | 1 ng-1 μg |
| ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਜਾਂ ਵਾਇਰਲ | 1 ਪੀ.ਜੀ.-1 ਐਨ.ਜੀ |
2) ਬੀ.Taq DNA ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੀ ਸਰਵੋਤਮ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨਾਂ ਵਿੱਚ 5-50 ਯੂਨਿਟ/mL (0.1-0.5 ਯੂਨਿਟ/25 μL ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ) ਤੱਕ ਹੋ ਸਕਦੀ ਹੈ।
ਥਰਮਲ ਸਾਈਕਲਿੰਗ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ
ਪੀ.ਸੀ.ਆਰ
| ਕਦਮ | ਤਾਪਮਾਨ(°C) | ਸਮਾਂ | ਸਾਈਕਲ |
| ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਵਿਕਾਰa | 95 ℃ | 1-3 ਮਿੰਟ | - |
| ਵਿਕਾਰ | 95 ℃ | 15-30 ਸਕਿੰਟ | 30-35 ਚੱਕਰ |
| ਐਨੀਲਿੰਗਬੀ | 45-68 ℃ | 15-60 ਸਕਿੰਟ | |
| ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ | 68 ℃ | 1kb/ਮਿੰਟ | |
| ਅੰਤਮ ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ | 68 ℃ | 5 ਮਿੰਟ | - |
ਨੋਟ:
1) 95°C 'ਤੇ 1 ਮਿੰਟ ਦੀ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਵਿਨਾਸ਼ਕਾਰੀ ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਪ੍ਰਸਾਰਣ ਲਈ ਕਾਫੀ ਹੈ।ਔਖੇ ਟੈਂਪਲੇਟਾਂ ਲਈ, 95 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ 'ਤੇ 2-3 ਮਿੰਟ ਦੇ ਲੰਬੇ ਵਿਕਾਰ ਦੀ ਸਿਫ਼ਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਕਲੋਨੀ ਪੀਸੀਆਰ ਦੇ ਨਾਲ, 95 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ 'ਤੇ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ 5 ਮਿੰਟਾਂ ਦੀ ਵਿਨਾਸ਼ਕਾਰੀ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।
2) ਐਨੀਲਿੰਗ ਪੜਾਅ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 15-60 ਸਕਿੰਟ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਜੋੜੇ ਦੇ ਟੀਐਮ 'ਤੇ ਅਧਾਰਤ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 45-68℃ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।
