UDG/UNG ਐਨਜ਼ਾਈਮਜ਼
UDG(uracil DNA glycosylase) ssDNA ਅਤੇ dsDNA ਵਿੱਚ uracil ਬੇਸ ਅਤੇ ਸ਼ੂਗਰ-ਫਾਸਫੇਟ ਰੀੜ੍ਹ ਦੀ ਹੱਡੀ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ N-ਗਲਾਈਕੋਸੀਡਿਕ ਲਿੰਕ ਦੇ ਹਾਈਡੋਲਿਸਿਸ ਨੂੰ ਉਤਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਇਹ ਆਸਾਨੀ ਨਾਲ ਐਰੋਸੋਲ ਪ੍ਰਦੂਸ਼ਣ ਨੂੰ ਕੰਟਰੋਲ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਆਮ ਅਣੂ ਜੀਵ ਵਿਗਿਆਨ ਪ੍ਰਣਾਲੀਆਂ ਜਿਵੇਂ ਕਿ PCR, qPCR, RT-qPCR ਅਤੇ LAMP ਲਈ ਢੁਕਵਾਂ ਹੈ।
ਨਿਰਧਾਰਨ
| ਸਮੀਕਰਨ ਹੋਸਟ | ਰੀਕੌਂਬੀਨੈਂਟ ਈ. ਕੋਲੀਵਿਥ ਯੂਰੇਸਿਲ ਡੀਐਨਏ ਗਲਾਈਕੋਸਾਈਲੇਜ਼ ਜੀਨ |
| ਅਣੂ ਭਾਰ | 24. 8kDa |
| ਸ਼ੁੱਧਤਾ | ≥95% (SDS-PAGE) |
| ਹੀਟ ਇਨਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ | 95℃, 5~10 ਮਿੰਟ |
| ਯੂਨਿਟ ਪਰਿਭਾਸ਼ਾ | ਇੱਕ ਯੂਨਿਟ (U) ਨੂੰ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਵਜੋਂ ਪਰਿਭਾਸ਼ਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ ਜੋ 25℃ 'ਤੇ 30 ਮਿੰਟਾਂ ਵਿੱਚ l μg dU- ਰੱਖਣ ਵਾਲੇ dsDNA ਦੇ ਹਾਈਡੋਲਿਸਿਸ ਨੂੰ ਉਤਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਲੋੜੀਂਦਾ ਹੈ। |
ਸਟੋਰੇਜ
ਉਤਪਾਦ ਨੂੰ ਦੋ ਸਾਲਾਂ ਲਈ -25℃~-15°C 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।
ਹਦਾਇਤਾਂ
1.ਹੇਠ ਲਿਖੇ ਸਿਸਟਮ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਮਿਸ਼ਰਣ ਦੀ ਤਿਆਰੀ
| ਕੰਪੋਨੈਂਟਸ | ਵਾਲੀਅਮ (μL) | ਅੰਤਮ ਇਕਾਗਰਤਾ |
| 10×PCR ਬਫਰ (Mg²+ ਪਲੱਸ) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1.5 mmol/L |
| dUTP(10 mmol/L) | 3 | 0.6 mmol/L |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP(10mmol/ਲੀਚ) | 1 | 0.2 ਮਿਲੀਮੀਟਰ/ਲੀਚ |
| ਟੈਂਪਲੇਟ ਡੀਐਨਏ | X | - |
| ਪ੍ਰਾਈਮਰ1 (10μmol/L) | 2 | 0.4 μmol/L |
| ਪ੍ਰਾਈਮਰ 2 (10μmol/L) | 2 | 0.4 μmol/L |
| ਟਾਕ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ (5 U/μL) | 0. 5 | 0. 05 U/μL |
| ਯੂਰੇਸਿਲ ਡੀਐਨਏ ਗਲਾਈਕੋਸਾਈਲੇਜ਼ (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH₂O | 50 ਤੱਕ | - |
ਨੋਟ: ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਲੋੜਾਂ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ, dUTP ਦੀ ਅੰਤਮ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਨੂੰ 0.2-0.6 mmol/L ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਐਡਜਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ 0.2 mmol/L dTTP ਨੂੰ ਚੋਣਵੇਂ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਜੋੜਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
2.ਪ੍ਰਸਾਰਣ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ
| ਸਾਈਕਲ ਕਦਮ | ਤਾਪਮਾਨ | ਸਮਾਂ | ਸਾਈਕਲ |
| dU-ਰੱਖਣ ਵਾਲਾ ਟੈਂਪਲੇਟ ਡੀਗਰੇਡੇਸ਼ਨ | 25℃ | 10 ਮਿੰਟ | 1 |
| UDG ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ, ਟੈਂਪਲੇਟ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਵਿਨਾਸ਼ਕਾਰੀ | 95℃ | 5~10 ਮਿੰਟ | 1 |
| ਵਿਕਾਰ | 95℃ | 10 ਸਕਿੰਟ |
30-35 |
| ਐਨੀਲਿੰਗ | 60℃ | 20 ਸਕਿੰਟ | |
| ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ | 72℃ | 30 ਸਕਿੰਟ/kb | |
| ਅੰਤਮ ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ | 72℃ | 5 ਮਿੰਟ | 1 |
ਨੋਟ: 25°C 'ਤੇ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦਾ ਸਮਾਂ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਲੋੜਾਂ ਅਨੁਸਾਰ 5-10 ਮਿੰਟ ਦੇ ਅੰਦਰ ਐਡਜਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਨੋਟਸ
1.UDG ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ PCR ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਬਫਰਾਂ ਵਿੱਚ ਸਰਗਰਮ ਹੈ।
2.ਐਨਜ਼ਾਈਮਜ਼ ਨੂੰ ਬਰਫ਼ਬਾਕਸ ਜਾਂ ਬਰਫ਼ ਦੇ ਇਸ਼ਨਾਨ 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ ਜਦੋਂ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਵਰਤੋਂ ਤੋਂ ਤੁਰੰਤ ਬਾਅਦ -20°C 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।
3.ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਆਪਣੀ ਸਿਹਤ ਅਤੇ ਸੁਰੱਖਿਆ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਜ਼ਰੂਰੀ PPE, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਲੈਬ ਕੋਟ ਅਤੇ ਦਸਤਾਨੇ ਪਹਿਨੋ!
